一、动物外伤的观察治疗（论文文献综述）
周晓昱[1]（2021）在《青盲一号方对视神经损伤大鼠RGCs细胞的影响及其调控Bcl-2/Beclin-1自噬通路的研究》文中认为第一部分青盲一号方对视神经牵拉损伤模型大鼠的视神经保护作用目的:青盲一号方在临床中起到了良好的视神经保护作用,前期体外实验表明,青盲一号方可有效抑制RGCs凋亡,本研究旨在探究青盲一号方对视神经牵拉损伤模型大鼠的视神经保护作用。方法:部分大鼠行脑立体定位仪注射荧光金逆行标记RGCs,采用横向牵拉法建立大鼠视神经损伤模型,将大鼠随机分为假手术组,模型组,低、中、高剂量中药干预组,根据分组分别采取不干预、生理盐水灌胃、不同浓度（分别含生药1 g/mL、2 g/mL、4g/mL）青盲一号方药液灌胃干预,于干预14天后,观察以下指标:（1）拍摄眼底彩照观察视神经损伤大鼠眼底改变;（2）F-VEP检测视神经损伤大鼠视觉电生理变化;（3）光学显微镜下观察视神经损伤大鼠视网膜组织结构病理变化;（4）倒置荧光显微镜下激发荧光显像统计视神经损伤大鼠RGCs数量变化。结果:（1）眼底彩照显示:与正常大鼠眼底相比,模型组大鼠眼底可见血管变细,组织苍白缺血的情况,低、中、高剂量青盲一号方干预均可一定程度改善视神经损伤大鼠眼底血管变细,组织苍白缺血的情况,其中高剂量中药干预效果最好;（2）F-VEP检测中:视神经损伤大鼠P2波出现潜伏期延长以及振幅降低（均为p<0.05）,高剂量青盲一号方干预可减轻P2波潜伏期延长的情况（p<0.05）,低、中剂量青盲一号方干预对减轻P2波潜伏期延长情况无效（均为p>0.05）;低、中、高剂量青盲一号方干预均不能改善P2波振幅降低的情况（均为p>0.05）;（3）观察HE染色切片:低、中、高剂量青盲一号方干预可有效改善视神经损伤大鼠眼底RGCs排列紊乱,细胞核皱缩浓染,细胞内空泡样改变,胞体肿胀或皱缩,细胞间隙变大,总体RGCs数量减少的情况;（4）荧光金标记RGCs计数:视神经损伤大鼠视网膜RGCs密度减小,中、高剂量青盲一号方干预可减轻RGCs密度减小的程度（均为p<0.05）,低剂量青盲一号方干预对减轻RGCs密度减小情况无效（p>0.05）。结论:（1）视神经牵拉损伤14天后大鼠RGCs出现大量的凋亡;（2）中、高剂量青盲一号方干预可以抑制视神经损伤大鼠RGCs凋亡。第二部分青盲一号方对视神经牵拉损伤大鼠RGCs自噬激活的影响目的:本研究旨在探究青盲一号方对视神经牵拉损伤模型大鼠RGCs中自噬激活情况的影响,进一步明确青盲一号方对于大鼠视神经牵拉损伤后视神经的保护作用是否通过对自噬的影响来实现。方法:采用横向牵拉法建立大鼠视神经牵拉损伤模型,随机分为假手术组,模型组,低、中、高剂量中药干预组,根据分组分别采取不干预、生理盐水灌胃、不同浓度青盲一号方药液干预,于干预14天后通过（1）透射电子显微镜下观察大鼠视神经损伤后RGCs细胞凋亡过程中各种结构的变化并寻找自噬小体;（2）Western-blot分子生物学方法检测自噬标志蛋白LC-3Ⅱ和p62的表达情况。结果:（1）透射电镜拍摄图片见:空白对照组与假手术组大鼠RGCs细胞结构清晰完整,超微结构正常,胞质内线粒体、内质网、高尔基复合体等各种细胞器丰富,偶有少量自噬泡,几乎无自噬小体显示。模型组和各剂量中药干预组中,大鼠RGCs结构被破坏,线粒体肿胀、超微结构不完整、出现线粒体嵴消失的情况,粗面内质网肿胀,细胞器总体均减少,自噬溶酶体及自噬小体数量增加,细胞浆内出现大小不均的空泡,模型组和低、中剂量中药干预组中出现细胞膜崩解,细胞内容物泄漏。高剂量中药干预组较模型组自噬程度有一定程度的缓解,自噬溶酶体及自噬体有所减少;（2）自噬标志蛋白LC-3Ⅱ和p62表达水平:①与空白对照组相比,假手术组LC3-Ⅱ蛋白表达水平无明显变化（p>0.05）,模型组和低、中、高剂量中药干预组LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显升高（均p<0.05）;与模型组相比,中、高剂量青盲一号方干预后LC3-Ⅱ蛋白表达水平升高的程度有所减轻（均为p<0.05）,低剂量青盲一号方干预对减轻LC3-Ⅱ蛋白表达水平升高情况无效（p>0.05）。②与空白对照组相比,假手术组p62蛋白表达水平无明显变化（p>0.05）,与空白对照组相比,模型组和低、中、高剂量中药干预组p62蛋白表达水平明显降低（均为p<0.05）。与模型组相比,低、中、高剂量青盲一号方干预后p62蛋白表达水平降低的程度有所减轻（均为p<0.05）。结论:（1）视神经牵拉损伤后大鼠RGCs出现自噬的激活;（2）中、高剂量青盲一号方干预可以通过抑制过度的自噬反应从而实现对模型大鼠的视神经保护作用。第三部分青盲一号方对视神经牵拉损伤大鼠RGCs中Bcl-2/Beclin-1自噬通路的调控目的:本研究旨在进一步探究青盲一号方对视神经牵拉损伤模型大鼠RGCs中Bcl-2/Beclin-1自噬通路的调控作用,明确青盲一号方对视神经牵拉损伤大鼠视神经保护的具体作用靶点。方法:采用横向牵拉法建立大鼠视神经牵拉损伤模型,随机分为假手术组,模型组,低、中、高剂量中药干预组,根据分组分别采取不干预、生理盐水灌胃、不同浓度青盲一号方药液干预,于干预14天后通过（1）激光共聚焦显微镜下观察免疫荧光Tunel染色以及NeuN染色双染法标记定性显示RGCs凋亡与自噬情况;（2）Western-blot分子生物学方法检测Bcl-2/Beclin-1自噬通路相关蛋白JNK1,Bcl-2,p-Bcl-2,Beclin-1,PI3KC3蛋白表达情况。结果:（1）观察双染切片:TUNEL染色将凋亡RGCs细胞核染为绿色,NeuN染色可标记RGCs细胞为红色,DAPI将RGCs细胞核标记为蓝色,将TUNEL/NeuN/DAPI叠加后得到“Merge”。空白对照组可见规律排列的RGCs细胞层,TUNEL染色凋亡阳性细胞荧光数量较少,假手术组与空白对照组无明显差异。与空白对照组相比,模型组与低、中、高剂量中药干预组大鼠视神经损伤后出现大量TUNEL染色凋亡阳性细胞,与NeuN 阳性细胞荧光重合。与模型组相比,高剂量中药干预组重合的凋亡阳性细胞与NeuN阳性细胞荧光数量相对减少;（2）Bcl-2/Beclin-1自噬通路相关蛋白表达水平:①与空白对照组相比,假手术组JNK1蛋白表达水平无明显变化（p>0.05）,模型组和低、中、高剂量中药干预组JNK1蛋白表达水平明显升高（均为p<0.05）;与模型组相比,低、中、高剂量中药干预组JNK1蛋白表达水平升高的程度有所减轻（均为p<0.05）。②与空白对照组相比,假手术组Bcl-2蛋白表达水平无明显变化（p>0.05）,模型组和低、中、高剂量中药干预组Bcl-2蛋白表达水平明显降低（均为p<0.05）;与模型组相比,高剂量中药干预组Bcl-2蛋白表达水平降低的程度有所减轻（p<0.05）,低、中剂量青盲一号方干预对Bcl-2蛋白表达水平降低程度的减轻无效（均为p>0.05）。③与空白对照组相比,假手术组pBcl-2蛋白表达水平无明显变化（p>0.05）,模型组和低、中、高剂量中药干预组pBcl-2蛋白表达水平明显降低（均为p<0.05）;与模型组相比,低、中、高剂量中药干预组的pBcl-2蛋白表达水平降低的程度明显减轻（均为p<0.05）。④与空白对照组相比,假手术组Beclin-1蛋白表达水平无明显变化（p>0.05）,模型组和低、中、高剂量中药干预组Beclin-1蛋白表达水平明显升高（均为p<0.05）;与模型组相比,低、中、高剂量中药干预组的Beclin-1蛋白表达水平升高的程度有所减轻（均为p<0.05）。⑤与空白对照组相比,假手术组PI3KC3蛋白表达水平无明显变化（p>0.05）,模型组和低、中、高剂量中药干预组PI3KC3蛋白表达水平明显升高（均为p<0.05）;与模型组相比,低、中、高剂量中药干预组的PI3KC3蛋白表达水平升高的程度有所减轻（均为p<0.05）。结论:（1）视神经牵拉损伤后大鼠RGCs出现Bcl-2/Beclin-1自噬通路的激活;（2）高剂量青盲一号方干预可以通过调控Bcl-2/Beclin-1自噬通路从而抑制视神经损伤大鼠RGCs凋亡情况。
王成[2]（2021）在《颅内静脉循环障碍加重TBI后脑损伤的实验研究》文中指出目的:基于激光散斑（LSCI）及磁共振技术,应用动物模型,观察创伤性急性硬膜下血肿（ASDH）压迫状态下以及开颅术中血肿清除前后脑皮层血流的时空变化。探讨TBI继发颅内静脉循环改变及开颅减压对脑血流的影响。构建ASDH与颅内静脉循环受阻复合动物模型,从影像及分子生物学角度研究颅内静脉循环障碍加重外伤后脑组织损害的病理机制,揭示外伤后脑静脉血液循环受阻与炎症反应及组织肿胀间的关系,以期为临床治疗提供指导。方法:本研究首先通过LSCI、MR静脉及血管重建技术表征大鼠大脑静脉循环的解剖结构,明确大鼠颅内静脉流出颅腔的途径。根据大鼠颅内静脉特点,结扎大鼠左侧眼眶后静脉丛和左侧岩骨裂孔处的静脉丛,形成颅内静脉回流受阻,通过LSCI动态观察受阻后局部脑皮层血流变化,为下一步实验研究奠定理论基础。其次通过改良Miller法创建ASDH大鼠模型,应用LSCI获取高分辨率的二维大脑皮层血流图,动态观察ASDH大鼠皮层脑血流的全场变化特征,通过磁共振SWI序列观察ASDH大鼠脑深部静脉回流情况,并结合颅内压、血压变化进一步分析ASDH对血管中血流参数特征影响。第三部分通过模拟ASDH大鼠开颅清除手术,应用LSCI监测ASDH大鼠血肿清除术中局部脑血流的动态变化,通过对比假手术组,探讨血肿压迫前后皮层动静脉及微循环顺应性改变,揭示脑静脉循环与术中脑肿胀之间的内在联系,更好地理解缺血再灌注损伤的发生机制。最后在ASDH动物基础上给予颅内静脉循环阻塞干预,形成复合模型。分别构建假手术组（Sham）,CVO组,ASDH组,ASDH+CVO组。进行神经行为学评估和脑含水量的测定,Evans blue染色并测定含量,免疫荧光、Elisa实验及蛋白质印迹检测炎性因子表达及金属蛋白酶ADAM17、MMP9的表达水平。并对ASDH+CVO组大鼠进行XPro1595药物干预,对比抑制sol TNF前后NF-κB/MMP9通路变化,从影像及分子生物学角度研究颅内静脉循环障碍加重外伤后的脑组织损害的病理机制。结果:通过应用LSCI、MRI血管重建技术对大鼠脑部成像可以看出大鼠颅内静脉主要通过颈外静脉回流,上矢状窦前端没有闭塞,通过端脑与嗅脑连接处的鼻喙窦向两侧与眼眶静脉丛相连,后端与双侧横窦相连形成汇点,经双侧横窦与岩骨裂隙静脉丛相连引流入颈外静脉系统。结扎大鼠一侧眼眶后静脉丛和岩骨裂孔处的静脉丛,可以使局部脑组织颅内静脉回流受阻。ASDH造成的颅高压引起压迫侧和对侧脑皮层静脉血液循环障碍。脑静脉血流与颅内压不是简单的线性相关关系。在行ASDH开颅术时,相比于动脉及毛细血管区血流速度,皮层静脉血流延迟恢复。CVO加重ASDH大鼠神经功能缺损及血脑屏障破坏,血管内皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Occludin含量减少,MMP9表达升高,促进ADAM17表达水平明显升高,且ADAM17在颅内细胞定位主要于小胶质细胞或巨噬细胞（Iba-1阳性）,并伴随sol TNF的分泌增加。sol TNF/NF-κB/MMP9通路激活加重随后的炎症反应及组织损伤。结论:TBI继发的颅高压可以引起脑皮层静脉循环障碍;颅内静脉循环障碍通过促进免疫细胞ADAM17表达水平升高,导致sol TNF分泌增加及下游NF-κB/MMP9通路的激活,加重TBI后炎症反应及脑组织肿胀。脑血管功能状态改变可能是引起继发性脑损伤的基础。治疗策略上应从单纯强调改善脑灌注的目标向促使脉管系统动态平衡的转变。
吴琼[3]（2021）在《基于数据挖掘和网络药理学探讨中药治疗TON的用药规律及机制》文中进行了进一步梳理第一部分基于数据挖掘探讨中药治疗外伤性视神经病变的用药规律目的:整理近20年以中药治疗外伤性视神经病变（Trauma optic neuropathy,TON）的临床研究类文献,运用数据挖掘技术对文献中涉及的中药处方进行系统分析,探究中药治疗TON的用药规律,为临床提供参考和指导。方法:通过计算机检索中国知识资源总库（China national knowledge infrastructure,CNKI）、万方数据库、维普数据库自2000年1月至2020年9月关于中药治疗TON的临床文献,按照纳入、排除标准筛选文献、提取数据,使用Excel 2016进行中药频次频率、四气五味、归经、功效特点分析,使用SPSS Modeler 18.0软件对频次≥7的高频中药进行关联规则分析,使用IBM SPSS25.0对频次≥5的高频中药进行聚类分析。结果:（1）本研究共纳入文献38篇,获得处方38个,共涉及74味中药,中药累及使用频次为392次,使用频次最多的前五位中药为:当归、川芎、赤芍、红花、柴胡。最常用的基础方为血府逐瘀汤和除风益损汤。（2）药物归经上,归于足厥阴肝经的中药频次最高,其次为手少阴心经、足太阴脾经;药性方面,温性药与寒性药使用频次最高;药味方面,使用频次在前三位的是苦味药、甘味药和辛味药。（3）中药功效类别上,使用频次位于前两位的是活血化瘀药和补虚药。（4）根据关联规则分析,置信度为100%时,支持度位于前三位的关联规则是川芎-桃仁、川芎-桃仁-红花、川芎-赤芍-红花。（5）根据聚类分析,可将中药聚为四类:藁本、前胡、防风聚为一类;熟地、白芍、当归聚为一类;红花、桃仁、牛膝、川芎聚为一类;柴胡、枳壳、桔梗聚为一类。结论:（1）中医治疗TON的高频次中药为当归、川芎、赤芍、红花、柴胡,功效类别以活血化瘀药和补虚药为主,支持度前三位的关联规则为川芎-桃仁、川芎-桃仁-红花、川芎-赤芍-红花,均体现中医治疗TON的治疗原则为活血化瘀、补虚行气;（2）治疗TON的中药多归于肝、心二经,且以苦味药和甘味药为主,寒温属性药物均有,符合活血化瘀药和补虚药的性味归经特点;（3）治疗TON最常用的处方为血府逐瘀汤和除风益损汤,聚类分析展现了治疗TON常用处方的组方配伍特点,即以活血化瘀药（红花、桃仁、川芎等）和补虚药（白芍、当归等）为主,辅以祛风解表药（藁本、前胡、防风）与行气药（柴胡、枳壳、桔梗）。第二部分基于网络药理学探究红花治疗外伤性视神经病变的机制目的:基于网络药理学及生物信息学的研究思路,探究红花治疗TON视神经损伤的潜在分子网络调控机制。方法:（1）通过中医药系统药理学数据库分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP）筛选红花的活性成分及作用靶点,利用Uniprot数据库查询靶点蛋白对应的基因名称,并通过Cytoscape软件构建红花有效成分-基因靶点的调控网络;（2）在基因表达数据库（Gene Expression Omnibus,GEO）中筛选TON相关芯片,使用GEO2R筛选疾病差异基因,使用韦恩分析得到红花有效成分治疗TON的核心靶点;（3）使用Cytoscape 3.7.2软件构建红花对TON基因靶点的蛋白质相互作用网络（protein-protein interaction network,PPI）,使用 BisoGenet、CytoNCA 软件包提取核心互作网络;（4）使用DAVID数据平台对筛选出的红花治疗TON的核心靶点进行基因本体论（geneontology,GO）功能注释和日本京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析。结果:（1）本研究共获得红花17种活性成分,作用靶点共205个;筛选出GSE17117芯片中TON的差异表达基因共617个,其中上调基因429个,下调基因188个;（2）经过韦恩分析,筛选出红花治疗TON的核心靶点11个;（3）通过PPI网络构建和网络拓扑分析,共筛选出红花治疗TON的14个核心靶点蛋白;（4）GO富集分析结果显示,红花作用于TON的靶点主要富集于胞外间隙、细胞质基质、顶端细胞;所涉及的生物学过程包括凋亡过程的负调控、对有机物质的应答、凋亡过程中的正调控等;相关的分子功能主要为结合核激素受体、结合蛋白质复合物。（5）KEGG调控通路富集分析结果显示,红花调控TON的通路主要有肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor,TNF）信号通路、癌症信号通路、雌激素信号通路、Toll样受体信号通路。结论:通过对红花有效成分治疗TON的网络药理学分析,我们推断出红花可能通过调节Caspase-3、基质金属蛋白酶-9（Matrix Metallopeptidas 9,MMP9）等靶点调控TNF等相关信号通路,干预视网膜神经节细胞（Retinal Ganglion Cells,RGCs）凋亡等生物学过程,从而在TON的治疗中起到视神经保护的作用。第三部分红花注射液对L-谷氨酸钠诱导的RGC-5细胞TNF凋亡信号通路的影响目的:在前两部分研究的基础上,运用体外实验验证红花注射液对视神经损伤后RGCs凋亡的调控机制。方法:（1）实验采用星孢菌素（Staurosporine,STSN）诱导RGC-5神经元性分化;采用CCK-8法,筛选RGC-5谷氨酸损伤模型中L-谷氨酸钠最佳损伤浓度和损伤时间,以及红花注射液干预RGC-5细胞的最佳浓度。（2）根据检测目标的需要,将RGC-5细胞按照1×105/ml的浓度接种至相应培养板中;经STSN诱导后的,分别标记为5个实验组:细胞对照组（A组）、L-谷氨酸钠模型组（B组）、红花注射液组（C组）、抑制剂Ac-DEVD-CHO组（D组）、红花注射液联合抑制剂组（E组）。A组添加DMEM-H培养基,B-E组加入所筛选的最佳L-谷氨酸钠损伤浓度培养基。根据筛选出的L-谷氨酸钠损伤时间孵育后,按照分组进行加样:A组加入DMEM-H培养基,B组加入同浓度的L-谷氨酸钠培养基,C组加入筛选出最佳浓度的红花注射液培养基,D组加入10μmol/L的Ac-DEVD-CHO培养基,E组加入最佳浓度的红花注射液联合Ac-DEVD-CHO培养基。培养24h后进行检测。（3）实验指标检测:采用免疫荧光法检测RGC-5细胞中Brn3a的表达;采用CCK-8法检测各实验组RGC-5细胞的存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western-blot检测各组细胞I型TNF受体（tumor necrosis factor receptorI,TNFR1）、死亡结构域相关蛋白（Fas-associated protein with death domain,FADD）、Caspase-8、Caspase-3 蛋白的表达水平。结果:（1）经筛选,浓度为0.5 μmol/L的STSN培养基孵育1 h可诱导RGC-5发生神经元形态改变。浓度为8mmol/L的L-谷氨酸钠干预18h所建立的RGC-5损伤模型,细胞凋亡率能够达到43.98%,最接近细胞半数凋亡剂量（half maximal inhibitory concentration,IC50）。60%的红花注射液干预 RGC-5 细胞 24h,细胞抑制率为41.34%,最接近IC50。最终选择0.5 μmol/LSTSN诱导RGC-5细胞1h促进RGC-5的分化,10 mmol/L的L-谷氨酸钠干预18 h建立RGC-5损伤模型,70%红花注射液作为本次实验的干预浓度。（2）免疫荧光结果显示,RGC-5细胞可以表达鼠类视网膜神经节细胞中的特异性转录因子Pou结构域转录因子3A（POU domain transcription factor 3A,Brn3A）。（3）细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测结果显示:与A组相比,B组细胞存活率仅为68.35%;C组细胞存活率为77.51%,D组81.13%,E组为86.88%;与B组光密度（optical density,OD）值相比,C、D、E组的OD值均显着增高,差异均有统计学意义（P<0.01）。（4）流式细胞凋亡检测结果显示:各组RGC-5细胞凋亡率分别为:A 组 3.43%,B 组 25.75%,C 组 15.88%,D 组 14.21%,E 组 11.56%。与 B 组相比,C、D、E组的凋亡率显着降低,差异均有统计学意义（P<0.01）。（5）TNFR1/FADD/Caspase-8/Caspase-3凋亡信号通路相关蛋白表达水平:与B组比较,C、D、E组的TNFR1、FADD、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达水平显着降低,差异均具有统计学意义（P<0.05）。在TNFR1、FADD、Caspase-8蛋白表达水平上,C组与D组间无显着统计学差异（P>0.05）,说明红花注射液与抑制剂Ac-DEVD-CHO 在调控 TNFR1、FADD、Caspase-8 蛋白上效力相当;在 Caspase-3蛋白表达水平上,C组与D组间有显着统计学差异（P<0.05）,说明在降低Caspase-3蛋白水平上,特异性Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO较红花注射液效果更显着。此外,E组在降低Caspase-8、Caspase-3蛋白水平上,较C组、D组更显着（P<0.05）,说明红花注射液联合抑制剂可以起到协同抑制细胞凋亡的作用。结论:（1）红花注射液能够有效抑制L-谷氨酸钠对RGC-5细胞的凋亡损伤,提高其存活率;（2）70%红花注射液能够发挥明显的抗凋亡作用,该作用可能通过抑制RGC-5细胞中TNFR1、FADD、Caspase 8、Caspase 3蛋白的表达水平,调控TNFR1信号通路实现的。
王明刚[4]（2021）在《脱细胞基质材料在动物模型中增强腹壁薄弱强度的应用机制及临床疗效观察》文中提出第一部分79例腹壁薄弱患者临床资料回顾性分析目的回顾性分析腹壁薄弱患者的临床发病特点、诊断方式、治疗效果及随访情况,进一步探讨腹壁薄弱理想的手术治疗方式及修复材料选择。方法回顾性收集首都医科大学附属北京朝阳医院疝和腹壁外科自2010年1月至2020年1月期间收治的腹壁薄弱患者临床资料共计79例,经术前影像学检查及术前准备后,行手术治疗。对腹壁薄弱的发病特点、临床表现、手术方案、修补材料选择及随访情况进行统计学分析,随访以电话等随访方式为主。数据采用SPSS 23.0进行统计学分析,P<0.05具有统计学意义。结果（1）发病情况:79例患者包括45例男性,34例女性。腹壁薄弱患者发病原因不同,医源性腹壁肌筋膜组织薄弱或缺失43例（54.43%）、外伤性腹壁肌筋膜组织薄弱或缺失21例（26.58%）、病毒感染9例（11.40%）、先天性因素6例（7.59%）,病程为6.3±3.6年（3～11年）。（2）临床特点:医源性腹壁肌筋膜组织薄弱或缺失发生于胸、腰椎、主动脉、肾脏手术后,既往手术在进行分离操作过程中可能伤及肋间神经,导致肋间神经控制范围的腹壁肌肉组织发生去神经化改变,从而引起腹壁肌肉和相关组织薄弱的发生;而外伤同样可导致相应肋间神经损伤,与医源性腹壁组织损伤出现相同的病理生理学机制;伏在体内的水痘-带状疱疹病毒引起的带状疱疹,侵犯肋间神经时,受累的肋间神经控制相应的运动神经麻痹,进一步导致该神经所支配区域的腹壁肌肉和腹壁组织,进而引起腹壁膨出出现腹壁薄弱的临床表现;胚胎发育过程中,因胚胎体腔关闭停顿,可能导致先天性腹壁膨出,表现先天性腹壁薄弱,临床较为少见。（3）诊断:全部79例患者经病史、查体和影像学检查可确诊为腹壁薄弱。35例（44.30%）患者术前CT检查存在明确缺损样表现,其余44例（55.70%）患者术前CT检查无明显缺损,表现为腹壁薄弱整体膨出。（4）治疗:所有患者均行开放手术治疗,其中34例（43.04%）行Sublay手术,27例行Stoppa手术（34.18%）,14例（17.72%）行Onlay手术,4例行组织缝合手术（5.06%）。修补材料方面,使用聚丙烯材料51例（64.56%）,脱细胞基质材料13例（16.46%）,聚偏二氟乙烯材料10例（12.66%）。（5）随访:66例患者完成不同时间的随访,随访率83.54%,中位随访时间年48个月（6～120月）。有4例患者复发（4/66）,复发率为6.06%;5例患者在院期间出现切口浅层感染（5/79）,浅层感染发生率6.33%;2例患者随访出现深部感染并累及修补材料（2/66）,深部感染发生率为3.03%;有5例患者在院期间出现血肿（5/79）,血肿发生率为6.33%;19例患者随访期内出现血清肿（19/66）,血清肿发生率为28.79%;共计10例患者出现异物感（10/66）,异物感发生率为15.15%;有1例患者出现术后慢性疼痛（1/66）,慢性疼痛发生率为1.51%。结论（1）手术治疗腹壁薄弱能够取得较好的治疗效果;（2）腹壁薄弱的手术治疗可以选择多种修复材料;（3）人工合成材料治疗腹壁薄弱存在术后异物感的问题。第二部分脱细胞基质在动物模型中增强腹壁薄弱的应用机制背景腹壁薄弱是普通外科临床常见疾病之一,是一种特殊类型的腹壁疝,一般是腹壁的肌肉组织发生萎缩、减少或失去原有的组织强度而导致局部腹壁功能的缺失及外形改变,其发病原因主要可分为患者自身因素和手术相关临床因素。当由于患者生理因素或医源性损伤（手术、外伤、神经系统疾病等）而导致腹壁肌肉组织力量下降时,即出现腹壁薄弱。然而,相对于这种疾病的治疗却是复杂的,传统人工合成材料的使用存在一定局限。为了探讨脱细胞基质（acellular tissue matrix,ACTM）材料与传统的聚丙烯材料在腹壁薄弱中的作用机理,并讨论其修复腹壁薄弱的根本机制,本研究尝试建立了腹壁薄弱的动物模型。通过脱细胞基质材料与聚丙烯材料修补腹壁薄弱的动物实验模型,行随机对照研究,从而监测动物腹壁肌肉强度改善状况,并对反映机制重要实验指标的动态变化行对比、分析,探讨两种不同材料对改善实验兔的腹壁肌肉薄弱的重要机制。方法本研究通过对20只健康雄性实验兔,采用切断实验兔的左侧腹壁运动神经建立腹壁薄弱动物模型,左侧腹壁为试验组,同只实验兔的右侧腹壁为对照组。术后1月观察期内注意伤口愈合及肿胀发生情况。于术后第12周记录双侧腹壁长度,通过对比腹围情况判断是否发生腹壁薄弱。取出实验兔两侧腹壁肌肉组织,行力学测试,包括拉伸应力和拉伸应变。动物模型成功建立后,分别在30只健康的腹壁薄弱动物模型的左、右腹壁的肌后间隙层面分别植入聚丙烯材料和脱细胞基质材料（ACTM）,并缝合固定,同时修补腹壁缺损。术后1月观察期内注意实验兔体温及局部伤口愈合情况,于术后第24、48周分别处死15只实验兔,取出腹壁标本,对其两侧腹壁肌肉组织进行生物力学测试并比较,以及组织学和扫描电子显微镜（scanning electron microscopy,SEM）观察。结果在腹壁薄弱动物模型的建立过程中,2只实验兔均因麻醉意外死亡,1只因术后感染死亡,随后补做3只。其他实验兔均存活超过3个月。非手术侧腹壁腹围长度为17.0±0.7 cm,腹壁薄弱侧腹围长度为19.0±1.2 cm,表明腹壁薄弱动物模型腹围长度平均增加2 cm。腹壁薄弱组的拉伸应力显着降低为1.116±0.221MPa（P<0.001）,拉伸应变显着降低为 9.126±2.073%（P<0.001）。根据临床诊断标准,通过对其术后的腹围长度和生物力学特性都证实成功建立了腹壁薄弱的动物模型。植入性修补材料植入动物模型后,聚丙烯组和ACTM材料组均有2只兔共4只因麻醉意外死亡,随后补做4只兔。材料植入术后,聚丙烯组有4只兔和ACTM组1只兔发生切口感染,经敞开清创换药后痊愈。两种材料植入体内的成功率为100%。补充标本后30只实验兔均存活。与聚丙烯组相比,ACTM组24周后平均拉伸应力比聚丙烯组低2.409±0.806MPa（P=1.482E-08）,48周后平均拉伸应力比聚丙烯组低2.319±0.486 MPa（P=3.093E-11）;ACTM组24周后平均拉伸应变比聚丙烯高15.259±6.499%（P=2.992E-07）,48周后平均拉伸应变比聚丙烯组高15.845±6.731%（P=3.093E-11）。需要注意的是,从24周到48周,聚丙烯组和ACTM组拉伸应力的平均增长幅度分别为1.01±0.321 MPa（P=0.004）和1.1±0.244 MPa（P<0.001）,增长幅度具有统计学意义;聚丙烯组和ACTM组拉伸应变的平均增长幅度分别为 0.111±1.195%（P=0.926）和0.697±2.104%（P=0.743）,变化幅度无统计学意义。术后24周,聚丙烯周围组织见轻微炎症反应,ACTM周围组织几乎无炎症反应,还可见毛细血管的长入。扫描电子显微镜结果,ACTM材料植入术后的24周,纤维组织排列和走向相对整齐、正常,还可看到细胞粘附在ACTM材料上。ACTM材料植入术后的48周,材料外缘可见一定程度降解,周围组织长入。可见,ACTM材料植入后组织结构变化较小,束状结构仍然紧密相连。结论研究成功地建立了实验兔的腹壁薄弱模型。植入性修补材料植入动物模型后,证实ACTM材料是一种很有前途的生物学材料,有进一步应用于腹壁薄弱患者的临床治疗中的可能。
李佳[5]（2021）在《人脐带间充质干细胞联合改良视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的临床转化研究》文中研究说明研究背景外伤性视神经病变（TON）占颅脑损伤的2%—5%,常引起严重的视功能损害。TON的发病机制仍未完全清楚,目前认为其机制主要包括由外力导致的视神经的原发性损伤和由缺血及炎症等所致的继发性损伤两个方面。原发性损伤是不可逆的,其严重程度是由受伤瞬间的外力所决定,而继发性损伤则是原发性损伤后,在损伤区出现一系列氧化应激反应如视神经的水肿、炎症反应、局部缺血、过度激活的谷氨酸受体、脂质过氧化作用和钙离子超载等,造成神经元的髓鞘和胶质瘢痕的形成,以及神经节细胞（RGCs）的凋亡。在视神经损伤后轴索断裂致轴浆流运输中断、营养因子缺乏,大量的神经节细胞大约在损伤7天左右达到凋亡高峰,而RGCs的凋亡最终将导致患者视力下降甚至丧失。然而,继发性的损伤往往在伤后数周内仍造成持续的视神经损伤,因而它的损伤程度往往超过原发性损伤,但它可以通过有效治疗改善控制。目前临床上针对TON的治疗方法多样,但各种方法的疗效争议较大。一般伤后视力大于0.1者多采用药物保守治疗,而视力小于0.1者则可采用激素冲击、减压手术或二者联合治疗。TON治疗中最常用的手术方式是视神经管减压术,它是通过手术切除视神经管周围的骨壁,以减轻因视神经水肿、出血等引起的对视神经的压迫症状,从而缓解视神经的血运障碍,是治疗外伤性视神经病变常用的手术方法。视神经减压术最早采用的是经颅入路的手术方式,这种方式损伤大且手术风险也相对较高。随着内窥镜设备及鼻窦手术的不断发展,视神经减压术已发展为创伤更小的鼻内镜下经鼻视神经管减压术。常规的经鼻视神经管减压术是通过切除钩突,并将前后组筛窦以及部分蝶窦打开,进行视神经管减压。这种手术入路方式视野开阔,能够充分暴露视神经管,并且较容易操作,但不足之处是术中切除钩突和前、后组筛窦,会造成较大的医源性损伤。此外,当TON患者合并有复杂的颅底骨折时易损伤颅脑组织及眼眶组织,增加了手术中寻找视神经管位置的难度。因此,迫切需一种新的微创手术入路方式来进行视神经管减压,以提高手术的安全性及减少医源性的损伤。由于视神经管临近蝶窦和筛窦,由蝶骨小翼构成,如果从蝶窦入路行视神经管减压术,只需切除上鼻甲开放蝶窦及少部分后组筛窦,这样可以在一定程度上减少医源性损伤的发生。然而,单纯的手术治疗,虽可以减轻视神经管的压迫症状,但是仍无法改善损伤局部炎症微环境,阻止继发性损伤的发生。研究表明,间充质干细胞移植在治疗神经损伤修复方面具有良好的应用前景。间充质干细胞在脊髓损伤修复中能够提高大鼠的运动功能,改善病变局部的微环境利于神经功能的恢复。移植人脐带间充质干细胞（h UCMSCs）可以明显提高颅脑创伤后遗症患者的神经功能评分。此外,在损伤局部移植MSCs能够促进脊髓损伤的修复,并且MSCs对脊髓再生的影响是剂量依赖性的,可通过提高剂量加强疗效。在视神经损伤的动物模型中,通过玻璃体腔内注射MSCs可以促进大鼠RGCs的存活及轴突的再生,促进视神经（ON）损伤的恢复。另外,MSCs除具有再生修复功能外,还有极强的免疫抑制和抗炎功能。为此,我们认为在外伤性视神经病变患者通过经蝶窦入路视神经管减压暴露视神经管后,并在损伤局部移植h UC-MSCs一方面能促进视神经的再生修复,同时也可弱化视神经损伤局部的炎症微环境,进而减少视神经的继发性损伤和胶质瘢痕的形成,从而改善TON患者的预后。研究目的1.探讨明胶海绵支架对h UC-MSCs增殖的影响。2.探讨h UC-MSCs明胶海绵支架材料对大鼠视神经损伤的修复作用。3.探讨在CT后处理技术的辅助下进行鼻内镜下视神经管减压术的安全性及有效性。4.探讨局部移植h UC-MSCs联合改良视神经管减压术治疗对外伤性视神经病变患者的安全性,以期为TON寻找一种更为有效的治疗方法。研究方法1.分离培养人脐带来源的原代MSCs,通过流式细胞分析技术和定向诱导分化技术对MSCs的表面标志物及三系分化能力进行了鉴定;通过激光共聚焦显微镜观察明胶海绵的三维结构,通过共培养运用MTT法检测MSCs在明胶海绵支架上的增殖能力。2.通过建立大鼠视神经半横断损伤动物模型,利用HE染色、视觉诱发电位等观察间充质干细胞对大鼠视神经损伤的形态学及视功能的改变。3.利用CT后处理技术,模拟内镜下视神经管及颈动脉在蝶窦内壁上的解剖位置,并通过后处理容积成像（VR）技术显示出颈内动脉和视神经在蝶窦内侧壁上的位置,有利于手术中找寻视神经管的位置,增加手术的安全性,并通过收集患者在治疗前后的视力、视神经的管径、视神经管的长度和术后并发症等临床资料,来评估手术的安全性及有效性,并介绍一种可靠的辅助术中视神经管找寻的方法。4.招募20名外伤性视神经病变患者分为两组,一组为人脐带间充质干细胞移植（h UC-MSCT）联合视神经管减压术组,另一组为单纯视神经管减压组（ETOCD组）,通过观察患者术前及术后半年内最佳视力变化、色觉、相对性瞳孔传导阻滞（RAPD）、闪光视觉诱发电位（FVEP）等指标评价疗效,并通过观察MSCT后,患者体温、过敏反应、鼻腔感染、全身感染等指标,评估干细胞治疗的安全性。研究结果1.本课题采用体外贴壁法分离人脐带来源的MSCs,该细胞表面阳性表达CD90（99.82%）、CD29（99.76%）、CD44（99.39%）和CD105（95.37%）,阴性表达CD34（0.72%）、CD31（0.57%）和CD45（0.83%）,并且该细胞能够分化成脂肪、骨和软骨,具有三系分化潜能。利用明胶海绵作为干细胞生长的三维支架,具有较高的孔隙率及不溶胀,且材料最终能自行吸收,并且MSCs在明胶海绵支架上的增殖能力在培养96h及120h要显着高于无支架材料的对照组。2.本课题成功建立了大鼠视神经半横断损伤的动物模型,从形态学观察可以看到,MSCs移植组视神经及视网膜的损伤程度较损伤对照组明显减轻;从视功能来看,在损伤后各时间点,与正常组相比损伤组FVEP的波幅明显降低,潜伏期明显延长（P<0.05）。而实验组在各时间点,与正常组相比FVEP的潜伏期显着延长（P<0.05）,而波幅值在损伤后的第1天和第3天比正常组降低（P<0.05）,但在损伤后第7天至14天时,波幅与正常组无显着改变（P>0.05）;实验组与损伤组在各时间点,波幅明显增高及潜伏期明显缩短（P<0.05）。3.在CT后处理技术的辅助下,所有患者在术中都能正确找寻到视神经管的位置,我们的结果发现,有13例患者的视力（VA）有改善,总改善率为59.1%。术后出现1例轻度的脑脊液漏,通过平卧休息后症状改善,未观察到其他严重的并发症。我们还发现视神经管的内侧壁最长（p<0.05）。视神经管颅口管径最宽,与中段、眶口管径大小有显着差异（p<0.05）。4.20例TON患者均完成6个月的随访。未发生任何局部移植干细胞所造成的不良反应事件,研究无确切的有效性结果,所观察的视功能评价指标如视力、色觉、RAPD和VEP,在两组患者之间无显着性差异（P>0.05）。研究结论1.明胶海绵支架具有较高的孔隙率,能促进h UC-MSCs在其上的增殖,在一定时间内能够自行吸收,是理想的h UC-MSCs生长的支架材料。2.h UC-MSCs局部移植能够减轻大鼠视神经半横断损伤的程度并促进损伤的修复。3.ETOCD是一种可行的、安全的、有效的和微创的治疗方法。CT后处理技术有助于术者在手术中识别视神经管的位置。而视神经管内侧壁的减压长度可能不需要完全切除整个内侧壁,特别是靠近颅口处的骨壁不一定需要完全去除。4.10例TON患者局部移植同种异基因间充质干细胞是安全的,耐受性良好。
鲜亮[6]（2021）在《大鼠急性硬膜下血肿对脑表面血流影响的激光散斑技术研究》文中指出第一部分:大鼠急性硬膜下血肿改良模型的构建目的建立一种新的改良大鼠急性硬膜下血肿模型,为脑创伤研究提供合适模型。方法选取成年雄性SD大鼠30只,随机分为两组。传统组基于Miller的模型构建方法,改良组基于改良的针头、注射部位和操作方法。通过比较两组大鼠的生理指标、行为评分、死亡率、磁共振表现和HE染色结果对改良后的模型进行评价。结果两组大鼠的生理指标基本一致。两组大鼠的行为学得分差异无统计学意义。改良组生存率高于传统组。MRI显示改良模型的血肿较厚且集中在注射侧。HE染色提示改良方法对注射部位周围皮层的侵犯少,比传统模型干扰因素更少。改良模型相比于传统模型能更好模拟人类血肿,且模型成功率高,操作简便,可重复性好。结论改良模型是在传统模型的基础上建立的。虽然死亡率与人类存在差异,但改良进后的模型操作简便,模拟人类血肿效果更好,并且改良模型可应用于如血流研究等更多方面研究。第二部分:大鼠急性硬膜下血肿对脑表面血流的影响目的探讨急性硬膜下血肿大鼠的脑表面血流改变。方法选取成年雄性SD大鼠30只,随机分为三组。在顶部打磨7mm×5mm透明骨窗。sham组不注射血肿;0.2m L组注射血肿量0.2m L;0.4m L组注射血肿量0.4m L。使用激光散斑成像系统透过透明骨窗观测血肿对侧半球脑表面上矢状窦、静脉、动脉的血流变化,分别于术前、术后及术后的30min、60min、90min、120min分别计算血流灌注率,并监测颅内压。对比急性硬膜下血肿前后和不同血肿量下的血流变化情况。结果两个实验组术后及术后的30min、60min上矢状窦、静脉、动脉的血液灌注率对比术前及sham组显着下降。两个实验组术后的90min、120min上矢状窦的血液灌注率与术前及sham组相比有显着差异,而静脉、动脉差异无统计学意义。两个实验组术前颅内压与sham组差异无统计学意义,术后的各个时间点的颅内压对比术前及sham组显着升高。两个实验组相互对比,各时间点上矢状窦、静脉、动脉差异无统计学意义。两个实验组相互对比,术前差异无统计学意义,术后的各个时间点的颅内压对比术前及sham组有显着差异。综上,发生急性硬膜下血肿后,大鼠颅内压升高,上矢状窦及血肿对侧脑表面静脉、动脉血流将显着下降一定时间,在血肿形成后的90min时静脉、动脉可代偿恢复,而上矢状窦则无法恢复;对于大鼠,血肿量在0.4m L以下时,血流下降的程度与血肿量的多少并无关系。结论急性硬膜下血肿一方面会造成高颅压,还会造成大脑血液循环障碍,这可能是造成继发性损害的因素。因此,在临床中治疗急性硬膜下血肿时,在术前就应通过影像学等手段关注患者的脑循环情况,以避免术后可能出现的脑循环缺血、脑梗死等并发症。第三部分:大鼠急性脑膨出时脑表面血流的改变及机制目的探讨术中急性脑膨出大鼠的脑表面血流改变的机制及其影响,对脑外伤术中脑膨出的治疗策略提供新的思路。方法选取成年雄性SD大鼠18只,随机分为三组。三组大鼠制作急性硬膜下血肿模型后,在冠状缝后2mm,矢状缝左侧4mm处钻一个2mm的骨孔,将一枚可注水球囊置入硬膜外腔。之后在血肿注入侧半球开一骨窗,骨窗大小10mm×5mm,将颅骨去除,缓慢逐步切开硬脑膜并行血肿清除术。sham组在血肿清除后不做操作;0.05m L组在血肿清除后,将球囊缓慢充水0.05m L,诱导脑组织膨出10分钟后撤去球囊;0.1m L组在血肿清除后,将球囊缓慢充水0.1m L,诱导脑组织膨出,10分钟后撤去球囊。使用激光散斑成像系统透过骨窗观测血肿清除侧半球脑表面静脉、动脉的血流变化,分别于血肿清除后、球囊充水后、球囊充水后10min、球囊撤去后、球囊撤去后10min分别计算血流灌注率。对比脑膨出前后、去除脑膨出因素前后和不同膨出程度下的脑表面血流变化情况。结果两个实验组大鼠在球囊充水后及球囊充水后10min时,静脉、动脉血流显着下降。球囊撤去后及球囊撤去后10min,静脉、动脉的血流与术前相比显着下降,而相比于球囊充水后及球囊充水后10min,静脉、动脉显着上升。球囊充水后颅内压显着升高,高于正常颅内压;球囊撤去后颅内压显着降低,且低于正常颅内压。两实验组相比,血肿清除后静脉、动脉的血流差异无统计学意义。球囊充水后及球囊撤去后各时间点,静脉血流有显着差异,动脉血流差异无统计学意义。清除血肿后,两实验组大鼠颅内压差异均无统计学意义;球囊充水后各时间点,颅内压有显着差异,球囊撤去后各时间点,颅内压无显着差异。综上,当脑组织膨出时,静脉及动脉血流都会显着下降;若脑组织持续膨出,这种循环障碍会持续存在;当及时的清除脑膨出诱因,降低颅内压,这种循环障碍可得到缓解,但短时间内无法恢复到没有膨出的状态。不同程度的脑膨出对于动脉血流的下降并没有太大的差异,但是对于静脉的血流下降有明显的不同。结论脑膨出越严重就会伴随越严重的脑血液循环障碍,且静脉的循环障碍相比于动脉更显着。因此,研究者们需要关注脑血液循环与术中急性脑膨出之间的关系,尤其是静脉循环。脑循环障碍可能与术中急性脑膨出互为因果,这也提示了临床医生,对颅脑损伤的患者在术前就要关注患者的脑循环问题,在术中及后续治疗过程中,更要时刻预防或及时处理脑循环障碍。若术中急性脑膨出仍然发生,应尽快明确原因,去除诱因可尽量地缓解循环障碍,可避免产生更严重的恶性循环。
田军[7]（2021）在《降钙素基因相关肽（CGRP）通过调控Akt/mTOR信号通路介导的凋亡和自噬减轻创伤性颅脑损伤的实验研究》文中进行了进一步梳理创伤性颅脑损伤（Traumatic Brain Injury TBI）的定义是由于外部机械力造成的脑损伤,并导致大量的死亡和残疾,许多受害者有功能障碍,如运动和感觉功能障碍,甚至认知功能缺陷。据估计,全世界每年约有5000万人被诊断为TBI。颅脑损伤根据发生的不同过程和阶段,可分为原发性和继发性脑损伤,都是由脑外伤引起的复杂疾病。组织丢失和细胞死亡是主要的损伤,TBI后由于原发性颅脑损伤导致的继发性脑损伤,导致激活的小胶质细胞、募集的中性粒细胞和巨噬细胞以及血液代谢物中引起的炎症反应均可导致继发性脑损伤,进而导致进一步的功能性和器质性的脑损伤。炎症反应被认为是TBI继发性损伤的重要机制。从理论上讲,减少炎症改善受损脑组织能量及代谢可以减轻TBI引起的继发性脑损伤。降钙素基因相关肽（Calcitonin gene-related peptide CGRP）是由37个氨基酸组成的多肽,广泛表达于中枢和外周神经系统。目前,CGRP被认为是最有效的血管舒张药。CGRP在脑组织中起保护作用。当脑组织受到损伤并出现缺血时,小鼠脑TBI后产生大量自我保护物质,CGRP是其中最重要的保护物质之一。研究表明,在TBI后的病理过程中,CGRP的分泌在TBI后增多。增加的目的是使脑血管扩张,尽快为损伤后缺血缺氧的脑组织提供血液供应。然而,当脑组织损伤缺血较严重时,脑组织产生的CGRP不能完全防御这种损伤。因此出现了严重的脑组织继发性和永久性损伤。考虑到CGRP具有保护脑损伤的潜力,而自噬和凋亡在TBI诱导的继发性损伤中发挥重要作用,我们检测了CGRP是否能抑制TBI小鼠的自噬和凋亡的表达。结果表明,CGRP通过减轻脑水肿、调节神经元自噬和凋亡,减低TBI后神经炎症反应来保护大脑。第一部分创伤性颅脑损伤患者血清CGRP水平及与预后的关系目的:临床工作中,观察不同TBI患者CGRP表达变化、判断伤情程度,进一步探讨CGRP与TBI患者病情程度及预后的关系,并探讨CGRP是否可以作为判断TBI预后的可靠指标。方法:选取138例TBI患者进行分组:健康体检者54例（对照组）,重度TBI组73例,轻度TBI组65例。采用酶联免疫分析试剂法（ELISA）,测定TBI患者特定时间的血清CGRP水平。采用格拉斯哥昏迷量表（GCS）判定TBI严重程度。统计分析:各组不同时间CGRP比较采用重复测量资料的方差分析,同一时间组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法。采用wilicoxon秩和检验分析患者血清CGRP水平与临床变量的关系。结果:1.TBI后患者血清CGRP的变化对照组随时间变化呈现平稳状态,TBI（轻度组）和TBI（重度组）先下降后逐渐上升。两组血清CGRP水平均低于对照组。入院时、1天、3天、7天和14天时间点,TBI（重度组）低于TBI（轻度组）,差异显着,有统计学意义;入院时、1天、3天时间点,TBI（轻度组）低于对照组,差异显着,有统计学意义;入院时间点7天和14天,TBI（轻度组）低于对照组,但差异不显着。2.入院时TBI患者血清CGRP水平与临床病理特征关系相对于GCS评分<5分的患者,GCS评分≥5分的患者血清CGRP水平较高（Z=-2.277,P=0.023）。存活患者的CGRP水平高于死亡患者（Z=-3.571,P<0.001）。3.入院血清CGRP预测TBI患者伤后死亡的价值评估血清CGRP水平预测TBI患者伤后死亡的特异度为88.24%,灵敏度为68.82%,CGRP预测最佳临界值为13.255pg/ml。4.TBI患者预后与血清CGRP的相关性CGRP高水平组患者生存情况优于低水平组患者,差异显着;单因素Cox分析发现,年龄,中线结构移位,GCS分数,CGRP水平与TBI患者预后相关;多因素Cox分析发现,中线结构移位,CGRP水平是TBI患者独立预后因素。小结:1.TBI后患者血清中的CGRP变化趋势为随伤后时间变化先降低,然后逐渐升高。约至24小时到达最低点,大约在14天前后达高峰。2.血清CGRP水平可以预测TBI患者的预后不良及死亡,而且该预测效能较高。第二部分降钙素基因相关肽（CGRP）对小鼠创伤性颅脑损伤神经功能的保护作用目的:通过重物打击法（Feeney重物下降挫伤法）,建立开放性创伤性颅脑损伤（Traumatic Brain Injury TBI）动物模型,并予以脑室注射联合尾静脉注射外源性降钙素基因相关肽（CGRP）干预TBI模型小鼠;通过旷场实验、水迷宫实验、巴恩斯迷宫实验、跳台实验对实验小鼠的行为学评分进行测量,验证（CGRP）对创伤性颅脑损伤神经功能的保护作用。通过测量CGRP干预前后小鼠脑挫伤面积比较、脑水肿比较、血脑屏障破坏程度等方面的比较,来探讨CGRP对TBI小鼠脑损伤的保护作用。方法:清洁级（SPF）雄性BALB/C小鼠390只,随机分为sham组、TBI组和TBI+CGRP组。用1%戊巴比妥钠（40 mg/kg,i.p.i.）麻醉小鼠,根据Feeney重物下降法,建立开放性颅脑创伤模型。TBI+CGRP两组分别用CGRP肽（脑室注射+尾静脉注射）,术后每日采用改良神经严重程度评分（m NSS）检测各组小鼠的神经功能缺损程度。各组小鼠分别于术后相应的时间点（1、3、5、7天）取材;苏木精伊红染色（HE染色法）和（TTC）染色法:测量小鼠脑组织损伤面积,并进行组间对比;通过干湿重法测量不同组别小鼠的脑组织含水量;通过测量Evans Blue（EB）渗透率的方法,来判定TBI后血脑屏障的破坏程度。通过蛋白质印迹法（Western blot）测量脑组织CGRP蛋白的表达量。通过行为学测试对小鼠神经行为学进行测量:术后第8、9天进行旷场实验;术后第10-15天行水迷宫实验;术后第16-22天行巴恩斯迷宫实验;术后第23、24天为跳台实验的训练和测试阶段。结果:1.创伤性颅脑损伤（TBI）（Feeney重物下降挫伤法）动物模型稳定:术后小鼠平均昏迷时间约为1.5-2h,生命体征较平稳,体温恢复,呼吸平稳,逐渐苏醒和爬行,可进食水。脑组织经解剖,均可见局部挫伤灶,局部坏死、淤血,伴部分脑组织的凹陷缺损;部分样本损伤灶同侧可见蛛网膜下腔出血。2.各组小鼠m NSS评分差异术后第1天,TBI+CGRP组和TBI组相对sham组,神经功能均受损明显。TBI+CGRP组和TBI组神经功能基本相同,差异无统计学意义;在TBI后第2-7天,TBI+CGRP组小鼠m NSS评分低于TBI组,差异显着;第2-7天TBI+CGRP组和TBI组神经功能逐渐有所好转,两组小鼠的分数逐渐下降。3.TBI小鼠神经功能行为学评分结果旷场实验（Open field test）评分结果:总活动距离测试:sham组总距离最长,TBI+CGRP组小鼠的总距离居中间水平,TBI组的总距离最短。TBI+CGRP组小鼠的总距离相比TBI组的总距离长,差异显着。静止次数和静止时间和测试方面:TBI组小鼠静止次数最多,sham组和TBI+CGRP组静止次数较低,和TBI组小鼠相比,差异不显着,无统计学意义。TBI组小鼠静止时间最长,sham组和TBI+CGRP组静止时间相对较最低,和TBI组小鼠相比,差异不显着,无统计学意义。水迷宫实验:定位航行实验阶段:水迷宫测试小鼠发现平台的潜伏期,TBI+CGRP组小鼠的潜伏期相比TBI组小鼠的潜伏期时间短,差异显着,有统计学意义。TBI组小鼠比sham组小鼠的潜伏期长,差异显着,有统计学意义。空间探索实验阶段:在测试的第五天小鼠穿过平台次数,sham组最多,TBI组最少,TBI+CGRP组居中。TBI组穿过平台次数相比sham组少,差异显着,有统计学意义;TBI+CGRP组穿越平台次数多于TBI组,差异显着,有统计学意义。巴恩斯迷宫测试:训练阶段:TBI组小鼠的潜伏期相比较TBI+CGRP组小鼠的潜伏期长,差异显着,有统计学意义。第六天试验中,第一次探查目标洞（无暗箱）前的错误探查次数比较,TBI+CGRP组小鼠的探错次数相比TBI组小鼠多,差异显着,有统计学意义。跳台实验评分:在跳台试验测试阶段,TBI+CGRP组小鼠的潜伏期相比较TBI组小鼠的潜伏期长,差异显着,有统计学意义;错误次数:TBI+CGRP组小鼠的错误次数相比较于TBI组小鼠的错误次数少,差异显着,有统计学意义。4.不同组别小鼠脑组织标本创伤面积的测量和比较:三组小鼠脑组织切片相比较:TBI+CGRP组与TBI组相比较,均可见一定程度的脑组织损伤及局灶性神经细胞组织缺失,早期缺损范围的差异性较小。随着时间的推移,TBI小鼠脑组织切片可见更严重的脑损伤;定量计算脑损伤体积,TBI+CGRP组小鼠脑组织切片与TBI组小鼠脑组织切片相比较,损伤面积略小,但差异不显着,无统计学意义。5.脑水肿测定:外源性CGRP干预,将TBI术后脑水肿消退的时间点提前,减少了TBI诱导的脑水肿在TBI后持续时间,加速了TBI诱导的脑组织水肿的吸收,进而减轻脑损伤;另一方面,TBI+CGRP组小鼠的脑含水量在1天、3天、5天、7天这四个时间点,脑水肿程度均低于TBI组小鼠,差异显着,有统计学意义。6.血脑屏障损伤程度:TBI术后第1天,sham组未见明显依文思蓝（EB）渗出,TBI+CGRP组小鼠（EB）渗透率和TBI组相比无明显差异;TBI后第3、5、7天,TBI+CGRP组和TBI组小鼠依文思蓝（EB）渗透率仍较高,TBI+CGRP组小鼠依文思蓝（EB）渗透率低于TBI组,两者差异显着,有统计学意义。7.TBI后各组小鼠CGRP蛋白表达水平的差异:TBI组小鼠脑组织中CGRP表达水平显着降低,并随着时间的推移逐渐升高;TBI+CGRP组脑组织中CGRP蛋白表达水平明显高于TBI组,差异显着,有统计学意义。小结:1.根据Feeney重物下降法,可建立标准、可靠的开放性颅脑损伤动物模型,术后正常喂养及观察行为学变化,确认TBI模型建立。2.CGRP干预减低了创伤性颅脑损伤小鼠的神经功能损伤,减低了创伤性颅脑损伤挫伤灶的损伤面积;减低了创伤性颅脑损伤后脑水肿的程度,减少了TBI后脑水肿的持续时间;减轻了TBI后血脑屏障的破坏程度。3.通过蛋白印迹法可见TBI后小鼠脑组织中CGRP的表达水平显着降低,24h达最低,随时间推移逐渐回升。TBI+CGRP组小鼠脑组织中CGRP蛋白表达水平明显高于TBI组,提示本实验采用的脑室注射+尾静脉注射干预途径有效可靠。第三部分降钙素基因相关肽（CGRP）对创伤性颅脑损伤后神经元细胞自噬和凋亡的影响目的:通过对小鼠挫伤脑组织部位取材,对其进行自噬和凋亡相关标志性蛋白检测,观察对比CGRP干预前后自噬和凋亡标志性蛋白的变化情况,探讨CGRP在TBI环境下对自噬和凋亡的调控作用。方法:通过免疫荧光双染法:定位分析LC3和Neu N及GFAP蛋白;蛋白质印迹法,定量分析LC3、P62、Beclin-1、cleaved-caspase-3表达量;TUNEL和Neu N双染色法,分析TBI后神经元凋亡的表达变化情况。结果:1.CGRP对TBI小鼠神经元细胞自噬的影响免疫荧光双染法:脑皮层挫伤区LC3（+）蛋白定位于挫伤部位神经元的胞质中,Sham组可见少量阳性表达,随时间推移阳性表达程度无变化。TBI组于伤后1天可见LC3（+）细胞显着增多,随时间推移表达程度逐渐增强,高于Sham组,差异显着;TBI+CGRP组与TBI组比较,LC3（+）细胞数量较少,表达程度明显减弱,TBI后第1天,差异不显着,无统计学意义;而TBI后第3、5、7天,两组差异性逐渐增强,差异显着,有统计学意义。蛋白质印迹法:部分自噬标志物LC3、P62、Beclin-1蛋白表达与双染结果一致。TBI+CGRP组的LC3II/LC3I比值和Beclin-1水平较TBI组明显降低,差异显着,有统计学意义。P62水平的变化则相反,与sham组相比,TBI导致小鼠P62表达降低,TBI+CGRP组的P62较TBI组明显升高,差异显着,有统计学意义。CGRP的干预导致P62蛋白表达逐渐增强并维持在一个相对较高的阶段。2.CGRP对TBI小鼠神经元细胞凋亡的影响:TUNEL和Neu N双染色显示:TBI导致神经元凋亡增加,挫伤灶周围TUNEL（+）细胞明显增加;TBI+CGRP组的TUNEL（+）较TBI组明显降低,差异显着,有统计学意义;蛋白质印迹法:（Western blot法）:TBI导致神经元凋亡,小鼠挫伤灶脑组织凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3表达升高,皮层组织细胞凋亡增加。TBI+CGRP组的cleaved-caspase-3较TBI组明显降低,差异显着,有统计学意义。3.CGRP对TBI小鼠神经元细胞神经胶质纤维酸性蛋白GFAP的影响:与sham组相比,TBI导致小鼠神经元细胞GFAP数量明显增加,Neu N数量明显减低,而CGRP的干预降低了神经元细胞损伤。脑皮层挫伤区GFAP（+）表达:Sham组可见少量阳性细胞表达,表达不明显。TBI组和TBI+CGRP组伤后1、3、5、7天均可见阳性细胞显着增多。TBI组GFAP（+）计数率高于Sham组,差异显着;TBI+CGRP组GFAP（+）计数率低于TBI组第1、3天差异无显着性,第5、7天差异显着,有统计学意义。脑皮层挫伤区Neu N（+）表达:Sham组可见适量Neu N（+）表达。TBI组和TBI+CGRP组伤后1、3、5、7天均可见Neu N（+）细胞显着减少。TBI组Neu N（+）计数率低于Sham组,差异显着,有统计学意义;TBI+CGRP组Neu N（+）计数率高于TBI组差异显着,有统计学意义。小结:1.TBI后小鼠神经细胞自噬和凋亡水平增加,予以外源性CGRP干预,有效抑制了TBI所致小鼠神经元细胞的自噬和凋亡;2.TBI后小鼠神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在显着增加,CGRP干预后,减少了TBI小鼠颅脑损伤部位的胶质纤维酸性蛋白的出现,保护神经细胞功能。第四部分AKT/m TOR信号通路参与了外源性CGRP对神经元细胞自噬和凋亡的调控目的:通过利用CGRP干预TBI小鼠模型,在信号通路层面探讨CGRP对自噬和凋亡相关通路蛋白的调控情况,进一步探讨CGRP对自噬和凋亡的调控机制。方法:通过CGRP干预TBI小鼠模型,采用蛋白质印迹法（Western Blot法）,测定CGRP干预前后挫伤灶局部脑组织的AKT/m TOR、Fox O3a通路相关标志蛋白的变化情况,并对比CGRP干预前后的蛋白表达变化差异。结果:1.CGRP对AKT/m TOR通路的影响TBI术后导致了小鼠脑神经元细胞内p-Akt/Akt和p-m TOR/m TOR水平降低,TBI+CGRP组和TBI组均低于sham组,差异显着,有统计学意义。CGRP使这两者比值均升高。其中,CGRP对p-Akt/Akt激活作用较明显,术后1、3、5、7天四个时间点,TBI+CGRP组的p-Akt/Akt相比TBI组表达升高,差异显着,有统计学意义;CGRP对p-m TOR/m TOR激活作用较弱,术后第1、3天TBI+CGRP组p-m TOR/m TOR相比TBI组,差异显着,有统计学意义;术后第5、7天TBI+CGRP组p-m TOR/m TOR相比TBI组,差异不显着,无统计学意义;同时,Akt/m TOR信号的激活也在TBI后逐渐增强。2.CGRP对Fox O3a表达的影响TBI术后细胞核中Fox O3a蛋白水平显着升高,而细胞浆中Fox O3a蛋白水平显着降低,证实TBI导致了小鼠脑神经元细胞内Fox O3a蛋白分布的变化。CGRP使细胞核内Fox O3a增加逐渐减弱,而胞浆中Fox O3a逐渐升高。细胞核中Fox O3a蛋白表达情况可见,TBI+CGRP组的Fox O3a蛋白表达低于TBI组,差异显着,有统计学意义;而细胞浆中Fox O3a表达情况可见,TBI术后1、3、5、7天四个时间点,TBI+CGRP组的Fox O3a蛋白表达高于TBI组,差异显着,有统计学意义。小结:1.TBI抑制了Akt/m TOR信号通路的激活,对神经元细胞有损伤作用;外源性CGRP干预促进了Akt/m TOR信号通路的激活,导致了神经元细胞自噬和凋亡的降低,起到了脑保护作用。2.TBI促进了Fox O3a蛋白向神经元细胞核内转移,对神经元细胞有损伤作用;外源性CGRP干预可缓解细胞核内的Fox O3a升高趋势,保护神经元细胞。结论:1.临床TBI患者血清样本中CGRP变化趋势为先迅速降低然后逐渐升高,约24小时到达最低点,大约在14天前后达高峰,与动物模型变化趋势相同。2.血清CGRP水平可以预测TBI患者的预后不良及死亡情况,而且该预测的效能较高。CGRP高水平组远期预后、存活率优于CGRP低水平组;存活患者血清CGRP水平高于因TBI死亡的患者。CGRP可以作为TBI预后不良及死亡评估的参考指标。3.根据Feeney重物下降法,可建立标准、可靠的颅脑挫伤动物模型,术后正常喂养及观察行为学变化,确认TBI模型建立。4.CGRP干预,减低了创伤性颅脑损伤鼠的神经功能损伤,减低了创伤性颅脑损伤挫伤灶的损伤面积;减低了创伤性颅脑损伤后脑水肿的程度,减少了TBI后脑水肿的持续时间;减轻了TBI后血脑屏障的破坏程度;通过蛋白印迹法,可见TBI+CGRP组脑组织中CGRP蛋白表达水平明显高于TBI组,提示脑室注射联合尾静脉注射的外源性干预途径有效可靠。5.TBI后小鼠神经细胞自噬和凋亡水平增加,神经胶质纤维酸性蛋白GFAP增加;CGRP的干预有效抑制了TBI所致小鼠神经元细胞的自噬和凋亡,减少了TBI小鼠颅脑损伤部位GFAP的表达。6.TBI抑制了Akt/m TOR信号通路的激活,导致了神经元细胞自噬和凋亡水平升高,同时促进了Fox O3a蛋白向细胞核内转移,对神经元细胞有损伤作用;相反,外源性CGRP干预可促进Akt/m TOR信号通路的激活,抑制了神经元细胞自噬和凋亡,缓解了细胞核内的Fox O3a升高趋势,起到了脑保护作用。
时全星[8]（2020）在《胸腺肽α1对颅脑爆炸伤后认知功能障碍的作用和机制》文中认为研究背景:创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）是指由多种因素（坠落事件、汽车撞车事故、运动碰撞、火器袭击及爆炸等）导致的外部机械力作用于大脑的而产生的脑损伤。在一些发达国家,TBI被认为是45岁以下人群致死或致残的首要病因,仅在美国,多达约170万人每年患有不同程度的TBI,其中5万多人死于创伤,23万住院幸存者中至少35%将面临长期残疾。随着社会经济水平的提高和交通事业的发展,颅脑外伤的发病率以及颅脑外伤导致的致死率和致残率在中国也呈现逐渐上升趋势。TBI会导致短暂或永久的躯体运动障碍、认知功能障碍以及心理功能障碍,是临床工作中经常遇到的问题。冲击波诱导的创伤性脑损伤（blast induced traumatic brain injury,b TBI）是一种重要以及独特类型的TBI,在局部战争、反恐行动以及民用环境下都有发生。简易爆炸装置（improvised explosive devices,IEDs）诱导的脑损伤是当前国际局部战争（包括反恐）中平民和士兵伤亡的主要原因。IEDs引起的TBI可导致不同程度的认知和行为损害,但其确切的脑组织病理生理机制尚不清楚以及理想的动物模型仍欠缺。不同于其他TBI动物模型:控制性皮质击打（controlled cortical impact injury,CCI）动物模型以及液压冲击伤（fluid percussion injury,FPI）动物模型都有商品化的动物模型,b TBI动物模型由于其爆炸源的不同、原理的差异以及暴露部位的不同等,不同实验室研制的模型差异很大,为我们一致性的研究以及阐释b TBI带来了很多困扰。因此,迫切需要建立一种小型的便于复制的能产生更接近真实世界人b TBI的动物模型,以进一步深入阐明b TBI的发病机制,寻找新的有效的治疗方法。认知功能障碍是TBI尤其是b TBI的重要后遗症,严重影响患者的生活质量,是临床面临的一个重大课题,已吸引越来越多学者的关注。流行病学和实验数据表明,冲击波暴露可导致长期行为变化以及记忆力受损,其特点是学习记忆能力的迅速受损,已被认为是最近在伊拉克和阿富汗军事行动的标志性损伤。不同于阿尔兹海默病等其他神经退行性疾病,b TBI或TBI后认知功能障碍呈现出以下特点:出现早、进展迅速、持续时间伴随后半生以及以工作记忆受损为主要表现症状。因此研究如何改善TBI后认知功能障碍是一项亟待解决的重大课题,虽然越来越多的动物研究集中在b TBI的病理生理学机制上,但迄今为止尚无有效的针对b TBI的有前景的药物。因此,深入研究b TBI的发病机制,寻找有效的干预策略或药物来改善b TBI所致的神经和认知功能缺损具有重要意义和迫切需要,无论在军事方面和民用方面都有具有重要的应用前景。胸腺素α1（Tα1）是从胸腺生成素组份V中分离纯化的一种由28个氨基酸组成的小分子多肽。Tα1是一种多效性药物,可以增强细胞免疫,表现出抗肿瘤和抗炎特性,已在感染疾病、免疫缺陷疾病和癌症患者中得到验证或临床应用。此外,Tα1已被证实可以减轻胰腺病变和糖尿病,显示出抗动脉粥样硬化的作用,刺激内皮细胞迁移和伤口愈合,以及在动脉粥样硬化兔模型中表现出抗氧化应激损伤效应。胸腺切除不仅会导致小鼠免疫缺陷,而且还会降低其的学习和记忆能力,提示胸腺肽类物质可能参与学习记忆功能的调控。而且已有研究证实Tα1可促进新生正常小鼠神经再生和认知功能,提示Tα1可调节正常小鼠的认知功能。Tau蛋白属于微管相关蛋白（MAP）家族。磷酸化的tau聚集体进一步导致神经原纤维缠结（Neurofibrillary tangles,NFTs）的形成,这已被广泛认为是许多神经退行性疾病和脑外伤的共同病理特征。先前的研究以及我们未发表的资料表明,Tα1可能调节微小兴奋性突触后电位（miniature excitatory postsynaptic potential,m EPSP）,提示Tα1可能调节神经系统功能。TBI或b TBI伴随着严重的后遗症,如认知功能障碍和神经炎症反应。然而,Tα1是否能改善b TBI后的认知功能障碍和Tau蛋白功能障碍仍不清楚,针对此方面的研究具有较强的创新性和实用性。本研究拟建立一种新型基于压缩空气爆炸的单纯颅脑暴露、模拟真实世界的b TBI模型,并利用该模型研究Tα1治疗能否改善颅脑爆炸伤所致神经和认知功能障碍,并探讨了其可能的机制。本研究有望为研究颅脑爆炸伤提供一种可靠的动物模型,并为研究颅脑爆炸伤机制以及新的药物或靶点提供新的学术见解。研究目的:1.本课题旨在研究一种新的具有高度生物力学和生物医学稳定性的基于压缩空气单纯颅脑暴露的b TBI模型,并探讨爆炸伤导致认知功能障碍的具体机制以及进一步研究颅脑爆炸伤的病理生理学机制。2.阐明Tα1能否改善颅脑创伤后认知功能障碍以及可能的机制,为研究颅脑爆炸伤机制以及新的药物或靶点提供新的学术见解。研究方法:1.压缩气体驱动冲击波发生器的设计。1.1结合课题组的工作基础与现有颅脑爆炸伤动物模型的文献进行创新性设计。1.2探索建立一种更接近战场环境的大鼠b TBI动物模型。在河北省某大型露天环境中进行了TNT介导b TBI模型的初步探索实验。整个爆炸过程都是用高速摄影机拍摄的。PCB传感器被放置在同一高度和圆周上采用DEWESoft冲击波记录仪以测量冲击波特性。1.3设计压缩气体驱动的b TBI模型并完成生物力学指标的验证以及相应的操作说明。重视解决爆破片的稳定性问题。探讨不同凹槽厚度铝片爆破片的稳定性和一致性。采用PCB传感器结合DEWESoft冲击波记录仪检测冲击波发生装置的冲击波超压特性。记录了峰值超压、上升时间、持续时间和正冲量。对b TBI模型进行了可行性分析。根据铝片凹槽厚度的不同,将冲击波发生器的冲击波超压特性分为0.5mm、0.6mm、0.7mm和0.8mm组分别记录。根据距爆炸源距离的不同,将其分为20cm、35cm、50cm、65cm、80cm和95cm组分别记录。2.一种新的大鼠颅脑爆炸伤动物模型的建立。2.1计算距爆炸源不同距离下大鼠的24小时死亡率,同时用PCB传感器结合DEWESoft冲击波记录仪检测不同距离下的冲击波超压,用线性回归的方法建立用冲击波超压去预测大鼠爆炸伤后24小时死亡率的ROC曲线模型,同时评估其预测效能。2.2冲击波损伤的剂量效应:采用0.6mm厚凹槽铝片做为爆破片,分为4组:假爆炸组（除不接受爆炸冲击,剩余的与其他组相同）;低强度水平爆炸组（距爆炸源距离为80cm）;中强度水平爆炸组（距爆炸源距离为50cm）;高强度水平爆炸组（距爆炸源距离为20cm）。2.3冲击波损伤的时间效应:采用0.6mm厚凹槽铝片做为爆破片,固定大鼠的位置为距离爆炸源20cm,分为6组:假爆炸组（除不接受爆炸冲击,剩余的与其他组相同）;爆炸伤后2h组;爆炸伤后12h组;爆炸伤后24h组;爆炸伤后3d组;爆炸伤后7d组。2.4采用水迷宫实验研究冲击波损伤对爆炸伤后大鼠认知功能的影响,并分成4组:假爆炸组（除不接受爆炸冲击,剩余的与其他组相同）;低强度水平爆炸组（距爆炸源距离为80cm）;中强度水平爆炸组（距爆炸源距离为50cm）;高强度水平爆炸组（距爆炸源距离为20cm）。2.5采用Western blot技术检测单次冲击波损伤对大鼠爆炸伤后海马tau蛋白表达和磷酸化的影响。2.6采用HE染色观察单次冲击波损伤对大鼠脑组织显微病理的影响,并按照剂量效应和时间效应分别观察。2.7采用流式细胞术检测单次冲击波损伤对大鼠血液中CD4+T细胞、CD4+T细胞以及调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）等的影响,并观察其时程变化规律。2.8采用血常规自动分析仪检测单次冲击波损伤对大鼠血液中淋巴细胞和中性粒细胞百分比的影响。2.9采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA）技术检测单次冲击波损伤对大鼠血液中炎症因子IL-6的影响。2.9采用称重法检测单次冲击波损伤对大鼠颅脑爆炸伤后脑组织水含量的影响。3.Tα1对大鼠颅脑爆炸伤后认知功能障碍的作用和机制。3.1为探讨Tα1对大鼠b TBI后2 4小时死亡率的影响。大鼠接受Tα1治疗（浓度为200μg/kg,溶于1ml生理盐水,每日2次）或相同频次和体积的生理盐水治疗。根据实验设计分成4组:假爆炸组（除不接受爆炸冲击,剩余的与其他组相同）;爆炸组（距爆炸源距离为20cm）;爆炸+生理盐水（normal saline,NS）治疗组（距爆炸源距离为20cm）;爆炸+Tα1治疗组（距爆炸源距离为20cm）,分别计算各组24小时死亡率,明确Tα1对大鼠颅脑爆炸伤有无保护作用。3.2采用水迷宫实验研究Tα1对爆炸伤后大鼠认知功能的影响,并分成4组:假爆炸组（除不接受爆炸冲击,剩余的与其他组相同）;爆炸组（距爆炸源距离为20cm）;爆炸+NS治疗组（距爆炸源距离为20cm）;爆炸+Tα1治疗组（距爆炸源距离为20cm）。3.3采用Western blot技术检测Tα1对大鼠颅脑爆炸伤后海马tau蛋白表达和磷酸化的影响。3.4采用HE染色观察Tα1对大鼠颅脑爆炸伤后脑组织显微病理的影响。3.5采用流式细胞术检测Tα1对大鼠颅脑爆炸伤后血液中Treg细胞等的影响。3.6采用ELISA技术检测Tα1对大鼠颅脑爆炸伤后血液中炎症因子IL-6的影响。3.7采用称重法检测Tα1对颅脑爆炸伤大鼠脑组织水含量的影响。结果:1.高压氮气驱动的基于带有凹槽的铝片做为爆破片可以稳定的产生可重复性的冲击波。2.本研究成功的建立了一种新的基于压缩气体爆炸的大鼠颅脑爆炸伤动物模型。2.1将SD大鼠暴露在距爆炸源不同距离处,接受单次冲击波（0.6 mm厚的V型槽铝板做为爆破片）。随着距离由20 cm增加到95 cm,冲击波超压由136.44k Pa降至26.77k Pa,24小时死亡率由19.6%降至0。建立剂量-反应线性回归模型,预测模型为P=1/1+e（5.5-0.026X）（P:24小时死亡率;X:冲击波超压）,通过冲击波超压去预测大鼠颅脑爆炸伤后24小时死亡率。该模型的受试者工作特征曲线具有较好的预测效能,表现为受试者工作特征曲线下面积为0.833（P<0.001）。2.2单次冲击波暴露导致大鼠学习记忆能力下降,具体表现为在定速巡航期潜伏期延长,在空间探索期穿台次数减少。2.3单次冲击波作用于大鼠头部伤后2h～7d,未见明显的挫伤、坏死、血肿、出血等显微脑组织损伤征象。此外,从低强度到高强度不同程度的冲击伤均未引起明显的神经病理改变、缺血性神经元或组织损伤。2.4单次冲击波暴露显着增加大鼠颅脑爆炸伤后海马Thr205表位tau蛋白磷酸化,且呈剂量和时间依赖性。而在伤后2h、12h、24h、3d和7d,不同程度的冲击波（由低强度到高强度）或相同的高强度冲击波暴露对大鼠海马组织中tau蛋白Ser404和Ser262表位的磷酸化和总tau表达无明显影响。2.5单次冲击伤后7d、2h、3d和12h,CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg T细胞和淋巴细胞的百分率均显着下降,而中性粒细胞百分率在单次冲击伤后12h显着升高。2.6单次冲击伤大鼠血浆中炎性细胞因子IL-6水平的变化呈时间依赖性。冲击伤后12h、24h以及3d大鼠血浆IL-6水平显着升高。2.7单次冲击波暴露可导致大鼠颅脑爆炸伤后2h、12h、24h和3d脑组织含水量增加。随着冲击波强度的增加,脑组织含水量明显增加。3.Tα1对颅脑爆炸伤后认知功能障碍的作用和机制。3.1 Tα1治疗可明显改善大鼠颅脑爆炸伤后认知功能障碍,具体表现为导致定速巡航期潜伏期减少,以及空间探索期穿台次数增多,在此过程中各个时间段Tα1并未显着影响整个实验中每天大鼠游泳速度。3.2 Tα1有降低大鼠爆炸伤后24小时死亡率的趋势,但无统计学意义。3.3 Tα1不显着改变颅脑爆炸伤后大鼠大脑的组织病理学。3.4 Tα1显着抑制大鼠颅脑爆炸伤后tau蛋白Thr205表位的磷酸化,但对tau蛋白Ser404和Ser262表位的磷酸化无明显影响。3.5 Tα1增加大鼠颅脑爆炸伤后3d的Treg细胞百分率。3.6 Tα1抑制大鼠颅脑爆炸伤后血浆IL-6的产生。3.7 Tα1可抑制大鼠颅脑爆炸伤后脑水肿,表现为降低脑组织含水量。结论:1.本研究建立了一种新的基于压缩气体爆炸的大鼠单纯颅脑暴露的b TBI模型,表现为以持续认知障碍、tau蛋白Thr205位点磷酸化增加、Treg细胞减少、炎症反应增加和脑水肿。2.Tα1改善了b TBI后大鼠的学习记忆能力下降,抑制了tau蛋白Thr205表位的磷酸化,增加了Treg细胞,并抑制了炎症反应和脑水肿,而不影响大鼠脑组织显微病理学。Tα1有望成为治疗一种新的有前景的治疗颅脑爆炸伤的药物。
谭强[9]（2020）在《中性粒细胞胞外诱捕网及托伐普坦在大鼠脑出血中作用及机制研究》文中研究表明在我国,脑出血的发病率呈上升趋势,其死残率居各类卒中首位,严重影响了患者生命健康。由于脑出血致病机制复杂,且目前缺乏明确的循证医学指导,其治疗手段十分有限,疗效亦不令人满意。有效清除血肿以减轻血块直接机械作用造成的原发性脑损伤是脑出血治疗的关键。目前清除血肿主要靠外科手段,然而传统的开颅手术在清除血肿的同时,常常带来二次损伤,疗效并不明确。微创手术结合组织纤溶酶原激活剂（tissue-plasminogen activator,t PA）纤溶治疗脑出血,操作简易,对周围正常脑组织损伤小,具有广大前景。但其血肿清除效力不佳,纤溶效率亟待提高。有文献报道,在脑缺血血栓中发现中性粒细胞胞外诱捕网（Neutrophil extracellular traps,NETs）,其可通过网状结构粘附纤维蛋白,增强血栓对t PA的纤溶抵抗,影响溶栓疗效。而脑出血后是否有NETs存在、NETs是否干扰脑出血后t PA纤溶、降解NETs是否可提高纤溶疗效以使脑出血患者受益均不清楚,有待实验验证。除了原发性损伤,脑出血后继发性损伤的防治也是其治疗的重点。脑水肿作为脑出血后最常见的继发性损伤,可引起患者颅内压增高、加重缺血缺氧反应,严重影响患者预后。目前针对脑出血后脑水肿的治疗主要依靠药物脱水及辅助治疗,其疗效并不明确。对于药物治疗无效的顽固性脑水肿,手术减压可获得一定疗效,但手术本身往往又可造成二次损伤。脑出血后脑水肿治疗至今仍是难题。临床中发现,一旦患者下丘脑受损,其脑水肿往往持续而严重,提示神经内分泌系统参与了脑水肿的发生和发展。下丘脑作为神经内分泌的中枢环节,可释放多种激素,发挥多种作用,其中精氨酸加压素（Arginine vasopressin,AVP）可调节体内水和电解质稳态。有研究发现,脑出血后患者血浆中AVP水平与其脑水肿程度呈正相关,提示AVP参与了脑出血后脑水肿形成。有临床个案报道,给予颅脑外伤患者AVP拮抗剂托伐普坦（tolvaptan）口服,可显着减轻其脑水肿进展,改善预后。tolvaptan有望成为治疗脑水肿的新选择。于是,课题组设计动物实验以验证tolvaptan在脑出血后脑水肿的疗效,一旦动物实验疗效确切,或可开展临床试验,为脑出血后脑水肿提供新的治疗选择。本课题组分别针对清除血肿和减轻脑水肿两个方面,以动物模型为基础,探索脑出血后NETs的分布及其对t PA纤溶的影响,观察tolvaptan对脑出血后脑水肿的疗效,并研究机制,旨在为临床治疗做出参考。一、中性粒细胞胞外诱捕网在大鼠脑出血后纤溶治疗中的作用目的采用大鼠自体血诱导脑出血模型,观察中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,NETs）的分布情况,并探索NETs对组织纤溶酶原激活剂（tissue-plasminogen activator,t PA）纤溶治疗脑出血的影响,为提高t PA纤溶效力提供新的靶点。方法本研究分为三个部分。第一部分,分别在脑出血后0.5 h、1 h、1.5 h,取大鼠脑组织标本通过免疫荧光法检测脑出血后NETs的分布情况。第二部分,大鼠随机分为5组:sham组、vehicle组、DNAse 1组、t PA组、t PA+DNAse1组。sham组为假手术组,其余四组分别在脑出血术后1 h给予5μl的生理盐水、DNAse1（400 IE/μl）、t PA（4μg/μl）、t PA+DNAse 1（t PA,4μg/μl,DNAse 1,400 IE/μl）血肿内纤溶治疗。3天后,行MRI及行为学检测,以评价纤溶疗效,并取脑组织标本,通过TUNEL染色,观察血肿周围细胞坏死情况。第三部分,脑出血大鼠随机分为4组:vehicle组、DNAse 1组、t PA组、t PA+DNAse1组。在脑出血造模3天后,取颅内血肿,进行体外纤溶检测。结果1.免疫荧光结果显示,脑出血后1 h即可在血块及血肿周围观察到NETs存在。2.分析磁共振成像图片,发现:t PA纤溶治疗显着促进了血肿清除、降低了脑肿胀指数（t PA vs vehicle,p<0.05）;单独使用DNAse1降解NETs并未对血肿体积及脑肿胀指数产生明显影响,但将DNAse1与t PA联合使用,可显着提高t PA的纤溶疗效,进一步促进了血肿清除、缓解了脑组织肿胀（t PA vs t PA+DNAse1,p<0.05）。3.行为学结果显示,t PA纤溶治疗有效缓解了脑出血引起的前肢放置缺陷,改善了动物神经功能预后,而联合使用DNAse1可进一步促进功能改善。4.脑出血3天后血肿旁坏死细胞（TUNEL阳性）明显增多,给予t PA纤溶后,坏死细胞数量呈下降趋势（t PA vs vehicle,p>0.05）,而t PA与DNAse1联合治疗进一步减少了血肿旁细胞坏死（t PA+DNAse 1vs vehicle,p<0.05）。5.称重法和分光光度计法均发现,t PA有效地促进了颅内血块体外纤溶,尽管单独使用DNAse 1对体外纤溶无明显影响（DNAse 1vs vehicle,p>0.05）,DNAse 1与t PA联合使用可进一步促进t PA体外纤溶效力（t PA+DNAse 1 vs t PA,p<0.01）。结论大鼠脑出血后NETs的存在干扰了t PA纤溶效力,利用DNAse 1降解NETs可增强t PA纤溶疗效:促进血肿清除、减轻脑肿胀、减少血肿周围细胞坏死、改善大鼠功能预后。二、中性粒细胞胞外诱捕网增加t PA纤溶抵抗的机制研究目的采用大鼠自体血诱导脑室出血模型,验证细胞游离脱氧核糖核酸（Cell-free DNA,cf DNA）是中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,NETs）增加组织纤溶酶原激活剂（tissue-plasminogen activator,t PA）纤溶抵抗的关键原因。方法本研究分为四个部分。第一部分,通过免疫荧光法检测脑室出血后血块中cf DNA的时空分布情况。第二部分,大鼠随机分为4组:sham组、Blood组、cf DNA组、Blood+cf DNA组。sham组为假手术组,其余3组分别于侧脑室注射等体积（200μl）动脉全血、cf DNA溶液（2μg）、全血+cf DNA（2μg）混合物。术后检测脑室扩张程度、动物行为学变化及患侧脑室周围星形胶质细胞增生情况,以评估外源性cf DNA对大鼠脑室出血的影响。第三部分,大鼠随机分为5组:sham组、vehicle组、t PA组、t PA+DNAse 1组、t PA+cf DNA组。vehicle组、t PA组和t PA+DNAse 1组在自体全血诱导脑室出血1 h后分别给予2μl生理盐水、t PA（10μg/μl）、t PA+DNAse 1（t PA,10μg/μl,DNAse 1,1000IE/μl）脑室内纤溶治疗。t PA+cf DNA组采用自体血+cf DNA（2μg）混合液诱导脑室出血,1 h后给予2μl t PA（10μg/μl）脑室内纤溶治疗。观察指标同上,以评估cf DNA对脑室出血后t PA纤溶治疗的影响。第四部分,脑室内注射全血或全血+cf DNA（2μg）混合液,3天后取颅内血肿,进行体外纤溶实验,以进一步体外验证cf DNA对t PA纤溶作用的影响。结果1.免疫荧光结果显示,脑室出血后1 h即可观察到血块中有cf DNA结构。2.单纯cf DNA（2μg）脑室内注射对大鼠脑室体积（磁共振）、行为功能（m NSS、前肢放置试验）及脑室周围星形胶质细胞增生（免疫荧光）无明显影响（sham vs cf DNA,p>0.05）,而将cf DNA（2μg）混入全血中脑室内注射可造成血肿清除延缓、加重大鼠脑室出血损伤（Blood vs Blood+cf DNA,p<0.05）。3.t PA纤溶可显着缓解脑室扩张（磁共振）、改善大鼠神经功能缺损（m NSS、前肢放置试验）、减少脑室周围星形胶质细胞增生（免疫荧光）（t PA vs vehicle,p<0.05）,而加入cf DNA或DNAse 1（以降解cf DNA）可分别减弱或增强t PA纤溶疗效,提示cf DNA阻碍了大鼠脑室出血后t PA纤溶。4.将全血或全血+cf DNA混合物脑室内注射,发现混入cf DNA可延缓血块降解（Blood vs Blood+cf DNA,p<0.05）,且在体外纤溶实验中表现出明显的纤溶抵抗（Blood+t PA vs Blood+cf DNA+t PA,p<0.05）。结论实验性脑室出血中,cf DNA是NETs增加t PA纤溶抵抗的关键,使用DNAse 1降解cf DNA可增强t PA的纤溶疗效,改善脑室出血大鼠的预后。三、托伐普坦对大鼠脑水肿的作用及机制研究目的利用大鼠胶原酶诱导脑出血模型,观察给予口服托伐普坦（tolvaptan）治疗后,大鼠脑水肿、行为学及血脑屏障相关指标变化情况,明确tolvaptan的疗效,并在大鼠颅脑外伤模型上进一步验证tolvaptan对脑水肿的作用。方法本研究分为三个部分。第一部分,建立大鼠胶原酶诱导脑出血模型,观察tolvaptan的安全性及其对大鼠脑水肿、行为学的影响:SD大鼠随机分为sham组（假手术组）、vehicle组和tolvaptan组。术后12 h、36 h、60 h,对照组和给药分别给予1.5 ml饮用水或tolvaptan药液（10 mg/kg）灌胃处理。利用磁共振及脑水含量（brain water content,BWC）检测药物对脑水肿的影响,并对动物进行改良的大鼠神经功能缺损评分（m NSS）、前肢放置试验及转角试验,以评价动物神经功能预后。第二部分,建立大鼠胶原酶诱脑出血模型,观察tolvaptan对大鼠血脑屏障的保护作用:分组及药物处理同上,术后利用伊文斯蓝（Evans blue,EB）渗透试验观察血脑屏障通透性,并对血脑屏障相关蛋白的表达进行定量分析。第三部分,建立大鼠颅脑外伤模型,观察tolvaptan对大鼠颅脑外伤后脑水肿及行为学改善的作用:分组、药物处理及观察指标同第一部分。结果1.通过检测给药前后大鼠生命体征,发现tolvaptan对正常（假手术组）及脑出血大鼠体重及平均动脉压无明显影响。2.通过磁共振图像分析及BWC测定,发现tolvaptan可显着减轻脑出血后脑肿胀指数及患侧半球BWC（vehicle vs tolvaptan,p<0.05）,提示tolvaptan有效减轻了脑出血后脑水肿程度。此外,通过m NSS、前肢放置试验及转角试验评分,发现tolvaptan可显着改善脑出血大鼠神经功能缺损。3.Tolvaptan可减轻脑出血导致的EB染料经微血管外渗出,增加血脑屏障相关紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达,同时下调脑出血后MMP-9的表达（vehicle vs tolvaptan,p<0.05）,提示tolvaptan对脑出血后血脑屏障具有一定保护作用。4.Tolvaptan显着减轻了颅脑外伤后大鼠脑肿胀指数及患侧半球BWC,改善了动物m NSS评分（vehicle vs tolvaptan,p<0.05）,提示tolvaptan对颅脑外伤后脑水肿同样有效。结论托伐普坦可有效减轻脑出血及颅脑外伤后脑水肿,改善大鼠神经功能,机制可能与其对血脑屏障的保护作用有关。
谭丽[10]（2020）在《基于Orexin对丘脑皮层的作用探索电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠的促醒作用》文中研究说明目的:探讨电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠意识水平和皮层脑电的影响,并研究电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠Orexin-1（OX1）及其受体Orexin-1-Receptor（OX1R）的影响,从电生理和分子生物方面探索电针促醒的机制。方法:实验一电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠意识水平及皮层脑电的影响SD大鼠26只,雄性,10%水合氯醛麻醉后,埋置皮层电极,深度以触及硬脑膜为度;大鼠恢复1-2周后采用SPSS软件生成随机序列将植入电极后恢复正常的大鼠随机分为:假手术组、TBI组、电针组和拮抗剂组;采用控制性皮层撞击法建立TBI大鼠模型,造模后1小时后根据大鼠的感觉和运动功能划分其意识水平,选择符合意识障碍水平的大鼠进行记录;意识状态评估后电针组电针“水沟穴”15min,拮抗剂组腹腔注射拮抗剂OXR（SB334867,30mg/kg）,注射完后即刻进行电针;电针结束后持续采集脑电24小时;将脑电数据导入Neuro Explorer分析6、12、24小时三个时间点各段ECoG中δ、θ、α、β波频段构成比,采用SPSS 23.0对数据进行分析。实验二电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠OX1及受体OX1R的影响选用成年SD大鼠144只,采用SPSS软件生成随机序列随机分为:假手术组TBI组、电针组、拮抗剂组;采用控制性皮层撞击法建立TBI大鼠模型,造模后1小时后根据大鼠的感觉和运动功能划分其意识水平,意识状态评估后电针组电针“水沟穴”15min,拮抗剂组腹腔注射拮抗剂OX1R（SB334867,30mg/kg）,注射完后即刻进行电针;分别于治疗结束后6、12、24小时三个时间段分批取材,一部分取组织冻存用于检测外侧下丘脑OX1含量和内侧前额叶OX1R表达;另一部分灌注后包埋,最后进行免疫组化实验,以观察外侧下丘脑Orexin神经元情况和mPFC区OX1R表达。结果:1.实验一电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠意识水平及皮层脑电的影响（1）电针“水沟穴”可以缩短TBI大鼠意识障碍时间（P<0.05）,注射拮抗剂后,电针促醒效应被抑制;（2）电针“水沟穴”对TBI大鼠ECoG的影响:①低频段（δ、θ、δ+θ）δ波:左侧6、24小时电针组、假手术组δ波低于拮抗剂组和TBI组（P<0.05）,拮抗剂组δ波占比高于TBI组（P<0.05）;12小时假手术组δ波占比均低于拮抗剂组和TBI组（P<0.05）,拮抗剂组δ波占比高于TBI组（P<0.05）;右侧:6、12小时电针组、假手术组δ波低于拮抗剂组和TBI组（P<0.05）,电针组δ波占比高于假手术组（P<0.05）;24小时:拮抗剂组和TBI组δ波高于假手术组（P<0.05）,电针组δ波占比高于假手术组、低于拮抗剂组（P<0.05）;假手术组左、右侧脑电各时间点均无差异,TBI组、电针组、拮抗剂组左侧δ波占比均低于右侧（P<0.05）。θ波:各组个时间点组内、组间比较无统计学差异;假手术组12、24小时右侧θ波占比均高于左侧（P<0.05）;TBI组、拮抗剂组左、右侧脑电个时间点均无差异,电针组24小时右侧脑电θ波占比高于左侧（P<0.05）。δ+θ:左侧6小时拮抗剂组、TBI组δ+θ波占比高于假手术组（P<0.05）,电针组δ+θ波占比低于拮抗剂组（P<0.05）;12小时拮抗剂组δ+θ波占比高于TBI组、电针组、假手术组（P<0.05）;24小时:拮抗剂组δ+θ波高于电针组、假手术组（P<0.05）;右侧6小时拮抗剂组、TBI组δ+θ波均高于电针组、假手术组（P<0.05）,电针组δ+θ波占比高于假手术组（P<0.05）;12小时拮抗剂组和TBI组δ+θ波高于假手术组（P<0.05）;24小时:假手术组δ+θ波占比与拮抗剂组、TBI组、电针组有差异（P<0.05）。假手术组6、24小时左侧δ+θ波占比低于右侧（P<0.05）;TBI组、电针组、拮抗剂组各时间点左侧δ+θ波占均低于右侧（P<0.05）。②高频段（α、β、α+β）α:左侧6小时假手术组α波占比高于TBI组、拮抗剂组（P<0.05）,12、24小时拮抗剂组α波占比低于假手术组（P<0.05）,右侧各时间点组间α波占比变化无差异（P>0.05）;左、右两侧组内α波占比变化无差异（P>0.05）;假手术组、TBI组、电针组在6、12、24小时点左侧脑电α波占比高于右侧（P<0.05）;拮抗剂组6、12小时点左侧脑电α波占比高于右侧（P<0.05）;β:左侧6小时假手术组β波占比高于TBI组、拮抗剂组（P<0.05）,12、24小时,假手术组β波占比高于拮抗剂组（P<0.05）,右侧6、12小时假手术组、电针组β波占比高于TBI组、拮抗剂组（P<0.05）;24小时假手术组β波高于拮抗剂组（P<0.05）;各组组内比较无差异;假手术组、拮抗剂组12、24小时左侧β波占比高于右侧（P<0.05）;TBI组各时间点左侧β波占比高于均右侧（P<0.05）;电针组6、24小时左侧β波占比高于右侧（P<0.05）。α+β:左侧6小时假手术组α+β波占比高于TBI组、拮抗剂组（P<0.05）,电针组α+β波占比高于拮抗剂组（P<0.05）,12小时假手术组、电针组α+β波占比高于拮抗剂组（P<0.05）;24小时拮抗剂组α+β波低于电针组、TBI组及假手术组（P<0.05）,右侧6、24小时假手术组α+β波占比与TBI组、拮抗剂组、电针组有差异（P<0.05）,6小时电针组α+β波占比高于TBI组（P<0.05）;12小时假手术组α+β波占比高于TBI组、拮抗剂组（P<0.05）,电针组α+β波占比高于拮抗剂组（P<0.05）。2.实验二“水沟穴”对TBI大鼠OX1及受体OXIR的影响（1）电针“水沟穴”对TBI大鼠LHA区Orexin阳性神经元的影响组间比较:24小时假手术组、电针组阳性神经元计数均高于TBI组、拮抗剂组（P<0.05）;组内比较:TBI组12小时Orexin神经元计数高于6小时（P<0.05）,拮抗剂组12时Orexin神经元计数高于6、24小时（P<0.05）。（2）电针“水沟穴”对TBI大鼠LHA区OX1的影响组间比较6小时TBI组、拮抗剂组低于假手术组（P<0.05）,12、24小时TBI组、拮抗剂组低于假手术组、电针组（P<0.05）;组内比较:TBI组24小时OX1浓度低于12小时（P<0.05）。（3）电针“水沟穴”对TBI大鼠mPFC区OX1R蛋白WB表达的影响组间比较:各组外侧下丘脑Orexin-1的表达水平在6h、12h、24h三个时间点均呈现为“拮抗剂组、TBI组、空白、电针组”依次递增趋势,6小时假手术组、电针组均高于TBI组（P<0.05）;12小时假手术组、电针组高于TBI组、拮抗剂组（P<0.05）;24小时假手术组高于TBI组、拮抗剂组,电针组高于拮抗剂组（P<0.05）;组内比较无差异。（4）电针“水沟穴”对TBI大鼠mPFC区OX1R蛋白免疫组化表达的影响组间比较:6小时拮抗剂组OX1R表达量较假手术组、电针组降低（P<0.05）;12小时TBI组OX1R表达量低于假手术组、拮抗剂组低于假手术组、电针组组;24小时假手术组、电针组OX1R表达量高于TBI组、拮抗剂组,电针组低于假手术组（P<0.05）,组内比较无差异。结论:1.电针“水沟穴”可以有效改善TBI大鼠意识水平,缩短昏迷时间,促进觉醒;2.电针“水沟穴”可以降低TBI大鼠ECoG功率谱中低频频段（δ波、θ波）占比,增加高频波频（α、β）占比,改善丘脑—皮层网络功能连接,提高大脑皮层神经元的兴奋性;3.注射OX1R受体拮抗剂后,一定程度上可以抑制电针“水沟穴”的促醒作用,提示Orexin可能通过其受体OX1R参与电针“水沟穴”对意识障碍的调节;4.电针“水沟穴”可以减少TBI大鼠外侧下丘脑的Orexin丢失,上调外侧下丘脑OX1及mPFC区OX1R表达,注射OX1R受体拮抗剂后,电针“水沟穴”上调OX1作用被抑制,提示Orexin是调节电针“水沟穴”促醒作用的重要神经递质。
二、动物外伤的观察治疗（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、动物外伤的观察治疗（论文提纲范文）
（1）青盲一号方对视神经损伤大鼠RGCs细胞的影响及其调控Bcl-2/Beclin-1自噬通路的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照表 |
| 综述一 外伤性视神经损伤研究进展 |
| 1. 流行病学 |
| 2. 临床诊断手段 |
| 2.1 瞳孔反射 |
| 2.2 视力检查 |
| 2.3 眼底检查 |
| 2.4 视觉诱发电位检查 |
| 2.5 光学相干断层扫描技术 |
| 2.6 动态视野检查 |
| 3. 损伤机制 |
| 3.1 解剖学损伤机制 |
| 3.2 物理作用力损伤机制 |
| 3.3 病理学改变 |
| 3.4 细胞损伤机制 |
| 4. 青盲的中医研究进展 |
| 4.1 中医对青盲的认识 |
| 4.2 病因病机 |
| 4.3 中药复方及中西医结合治疗 |
| 参考文献 |
| 综述二 自噬与神经损伤的研究进展 |
| 1. 自噬的分类 |
| 2. 自噬的功能 |
| 3. 自噬的发生过程 |
| 4. 自噬的检测方法 |
| 5. 自噬的分子调控机制 |
| 6. 自噬与神经损伤 |
| 6.1 自噬与脑损伤 |
| 6.2 自噬与脊髓损伤 |
| 7. 自噬与RGCs凋亡 |
| 参考文献 |
| 技术路线图 |
| 研究一 青盲一号方对视神经牵拉损伤模型大鼠的视神经保护作用 |
| 前言 |
| 1. 实验材料和仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要耗材 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 1.5 主要试剂配制 |
| 2. 实验准备 |
| 2.1 青盲一号方中药液制备 |
| 2.2 Wistar大鼠中药液灌胃药量计算 |
| 3. 实验分组及模型建立 |
| 3.1 实验分组 |
| 3.2 脑立体定位仪注射荧光金逆行标记RGCs |
| 3.3 建立大鼠视神经牵拉损伤模型 |
| 4. 实验指标检测及取材 |
| 4.1 拍摄大鼠眼底彩照 |
| 4.2 检测大鼠视觉电生理变化 |
| 4.3 显微镜下观察大鼠视网膜组织结构 |
| 4.4 荧光金标记视网膜RGCs计数 |
| 5. 统计 |
| 6. 实验结果 |
| 6.1 青盲一号方干预对视神经损伤大鼠眼底改变的影响 |
| 6.2 青盲一号方干预对视神经损伤大鼠视觉电生理变化的影响 |
| 6.3 青盲一号方干预对视神经损伤大鼠视网膜组织病理变化的影响 |
| 6.4 青盲一号方干预对视神经损伤大鼠视网膜铺片RGCs存活率的影响 |
| 7. 小结 |
| 研究二 青盲一号方对视神经牵拉损伤大鼠RGCs自噬激活的影响 |
| 前言 |
| 1. 实验材料和仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 主要试剂配置 |
| 2. 实验准备 |
| 2.1 青盲一号方中药液制备 |
| 2.2 Wistar大鼠中药液灌胃药量计算 |
| 3. 实验分组及模型建立 |
| 3.1 实验分组 |
| 3.2 建立大鼠视神经牵拉损伤模型 |
| 4. 实验指标检测及取材 |
| 4.1 电子显微镜下观察大鼠RGCs内超微结构及自噬小体 |
| 4.2 Western-blot法检测视神经损伤大鼠RGCs中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ和p62的表达 |
| 5. 统计 |
| 6. 实验结果 |
| 6.1 青盲一号方干预对视神经损伤大鼠RGCs内自噬小体生成的影响 |
| 6.2 青盲一号方干预对大鼠视神经损伤后视网膜组织中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ和p62表达程度的影响 |
| 7. 小结 |
| 研究三 青盲一号方对视神经牵拉损伤大鼠RGCs中Bcl-2/Beclin-1自噬通路的调控 |
| 前言 |
| 1. 实验材料和仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 主要试剂配置 |
| 2. 实验准备 |
| 2.1 青盲一号方中药液制备 |
| 2.2 Wistar大鼠中药液灌胃药量计算 |
| 3. 实验分组及模型建立 |
| 3.1 实验分组 |
| 3.2 建立大鼠视神经牵拉损伤模型 |
| 4. 实验指标检测及取材 |
| 4.1 免疫荧光染色检测TUNEL阳性和NeuN阳性细胞 |
| 4.2 自噬通路相关蛋白JNK1,Bcl-2,p-Bcl-2,Beclin-1和PI3KC3的表达测定 |
| 5. 统计 |
| 6. 实验结果 |
| 6.1 青盲一号方干预对视神经损伤大鼠RGCs凋亡情况的影响 |
| 6.2 青盲一号方干预对大鼠视神经损伤后视网膜组织中Bcl-2/Beclin-1自噬通路蛋白JNK1,Bcl-2,p-Bcl-2,Beclin-1和PI3KC3表达程度的影响 |
| 7. 小结 |
| 讨论 |
| 1. 研究意义 |
| 2. TON视神经损伤后组织病理学改变 |
| 3. 细胞自噬在损伤后RGCs进行性死亡中的分子调控机制 |
| 3.1 多种视神经病变的发生发展与自噬密切相关 |
| 3.2 Beclin-1/ PI3K Class Ⅲ复合体调控自噬的分子机制 |
| 3.3 Bcl-2在Beclin 1自噬调控通路中的作用 |
| 4. 中医对于外伤性视神经病变的认识 |
| 5. 青盲一号方研究进展 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）颅内静脉循环障碍加重TBI后脑损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分:基于LSCI、MRV观察SD大鼠脑静脉回流及其受阻后皮层血流变化 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂及仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 LSCI观测正常SD大鼠脑皮层静脉血液循环 |
| 2.2 MRI平扫及MRV重建SD大鼠头部及颈部静脉 |
| 2.3 基于LSCI观察CVO大鼠脑静脉回流 |
| 3 结果 |
| 3.1 LSCI显示正常SD大鼠脑皮层静脉回流 |
| 3.2 MRI血管成像及三维重建大鼠脑静脉窦及颈部静脉 |
| 3.3 CVO干预后大鼠脑皮层静脉血流动态变化 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分:ASDH大鼠脑皮层静脉血流变化 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂及耗材 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 改良Miller法制作大鼠ASDH模型及实验分组 |
| 2.2 激光散斑成像系统记录观察窗的皮层血流值 |
| 2.3 MRI平扫及SWI序列扫描 |
| 2.4 心脏灌注及留取脑组织标本 |
| 2.5 HE染色病理观察 |
| 2.6 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 激光散斑衬比成像显示ASDH大鼠脑皮层血流动力学变化 |
| 3.2 MRI 扫描结果 |
| 3.3 HE 染色结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分:基于激光散斑观察ASDH大鼠开颅术中脑皮层血流动力学变化 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 试剂及仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大鼠术前基础脑皮层血流监测 |
| 2.2 大鼠ASDH模型制作及模拟手术 |
| 2.3 激光散斑监测数据处理 |
| 2.4 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 硬膜下血肿清除术中生命体征及颅内压变化情况 |
| 3.2 开颅术中显微镜下观察脑皮层血管 |
| 3.3 基于LSCI观察皮层脑血流速度变化 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四部分:颅内静脉回流障碍加重颅脑损伤大鼠炎症反应及脑水肿的机制研究 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂及耗材 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物实验模型制作及分组 |
| 2.2 实验标本的获取 |
| 2.3 神经功能学评分 |
| 2.4 脑水含量测定 |
| 2.5 Nissl染色评估神经元损伤情况 |
| 2.6 脑组织Evans blue染色及含量测定 |
| 2.7 透射电子显微镜检测观察内皮细胞间紧密连接蛋白结构变化 |
| 2.8 免疫荧光双标染色分析大鼠皮层中ADAM17、小胶质细胞特异性标志物Iba-1、星形细胞特异性标志物GFAP共定位监测以及p-65、MMP-9在皮层细胞中的表达 |
| 2.9 大鼠脑组织内TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10 以及HMGB1的ELISA检测 |
| 2.10 Western blot检测脑皮层蛋白水平表达 |
| 2.11 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 CVO加重ASDH大鼠神经功能障及脑组织水肿 |
| 3.2 CVO干预后加重血管内皮细胞间紧密连接蛋白的破坏 |
| 3.3 ADAM17在CVO干预后ASDH大鼠损伤脑皮层细胞定位 |
| 3.4 CVO干预后促进ASDH大鼠炎性因子的表达 |
| 3.5 特异性抑制solTNF-α抑制 CVO干预后TNFR/NF-κB通路 |
| 3.6 XPro1595 干预对ASDH+CVO大鼠脑皮层MMP-9 表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 创伤性颅脑损伤术中急性脑膨出的发生机制及处理策略进展 |
| 参考文献 |
| 学术论文发表情况 |
| 致谢 |
（3）基于数据挖掘和网络药理学探讨中药治疗TON的用药规律及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照表 |
| 文献综述一 外伤性视神经病变的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 红花治疗神经系统疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 研究一 基于数据挖掘探究中药治疗外伤性视神经病变的用药规律 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献来源 |
| 1.2 检索方法 |
| 1.3 文献纳入标准 |
| 1.4 文献排除标准 |
| 1.5 资料录入及处理 |
| 1.6 处方数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献筛选结果及基本信息 |
| 2.2 处方中药频次分析 |
| 2.3 处方中药归经频次分布 |
| 2.4 处方中药药性频次分布 |
| 2.5 处方中药药味频次分布 |
| 2.6 处方中药功效类别频次分布 |
| 2.7 处方高频中药关联规则分析结果 |
| 2.8 处方高频中药聚类分析结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 中医对TON的认识 |
| 3.2 治疗TON的常用处方分析 |
| 3.3 纳入处方中高频中药的分析 |
| 3.4 处方中药的药性、药味、归经、功效分析 |
| 3.5 治疗TON处方中药的关联规则分析 |
| 3.6 治疗TON处方中药的聚类分析 |
| 3.7 本研究的创新性 |
| 参考文献 |
| 研究二 基于网络药理学探究红花治疗外伤性视神经病变的机制 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 高频中药活性成分及作用靶点筛选 |
| 1.2 TON表达谱芯片数据下载及数据整理 |
| 1.3 视神经挤压5天后的C57BL/6J小鼠与正常对照组的差异表达基因筛选 |
| 1.4 红花治疗TON靶点的PPI网络构建 |
| 1.5 红花作用靶点与筛选出的TON差异表达基因的韦恩分析 |
| 1.6 关键靶点基因功能注释和通路富集分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 红花活性成分筛选结果 |
| 2.2 红花活性成分作用靶点 |
| 2.3 TON芯片差异表达基因结果 |
| 2.4 红花治疗TON靶点的PPI网络构建 |
| 2.5 红花活性成分对应靶点与TON差异基因交集靶点筛选 |
| 2.6 红花治疗TON核心靶点基因的GO富集分析 |
| 2.7 红花治疗TON核心靶点基因的KEGG通路富集分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 本研究的意义和创新性 |
| 3.2 选择红花作为该研究主要对象的原因 |
| 3.3 红花治疗TON的作用靶点分析 |
| 3.4 红花治疗TON靶点的PPI网络分析 |
| 3.5 红花治疗TON潜在机制分析 |
| 参考文献 |
| 研究三 红花注射液对L-谷氨酸钠诱导的RGC-5细胞TNF凋亡信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验设备与耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞复苏 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 细胞传代 |
| 2.4 细胞冻存 |
| 2.5 细胞计数 |
| 2.6 免疫荧光检测转录因子Brn3a的表达 |
| 2.7 筛选STSN诱导RGC-5分化的最佳浓度 |
| 2.8 CCK-8法筛选RGC-5谷氨酸损伤模型最佳浓度及时间 |
| 2.9 CCK-8法筛选红花注射液干预RGC-5谷氨酸损伤模型的最佳浓度及时间 |
| 2.10 CCK-8法检测红花注射液对STSN诱导后RGC-5细胞谷氨酸损伤模型细胞存活率 |
| 2.11 流式细胞术检测红花注射液对STSN诱导后RGC-5细胞谷氨酸损伤模型细胞凋亡率 |
| 2.12 Western-blot检测L-谷氨酸钠诱导的RGC-5损伤模型相关凋亡通路中各蛋白的表达 |
| 2.13 数据处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 RGC-5细胞的体外培养 |
| 3.2 RGC-5的鉴定 |
| 3.3 STSN诱导RGC-5分化 |
| 3.4 L-谷氨酸钠诱导RGC-5细胞凋亡损伤模型 |
| 3.5 红花注射液干预RGC-5细胞浓度的筛选结果 |
| 3.6 红花注射液对L-谷氨酸钠诱导后RGC-5细胞存活率的影响 |
| 3.7 红花注射液对各组RGC-5细胞凋亡率的影响 |
| 3.8 红花注射液通过TNFR1/FADD/Caspase-8/Caspase-3通路调控RGC-5的凋亡 |
| 4 讨论 |
| 4.1 红花及其有效成分保护RGCs的相关研究 |
| 4.2 红花及其有效成分对细胞凋亡相关通路的调控 |
| 4.3 在视神经损伤中,细胞凋亡对RGCs的存活起重要作用 |
| 4.4 TNFR/FADD/Caspase-8/Caspase-3凋亡信号通路 |
| 4.5 使用STSN分化RGC-5细胞的意义 |
| 4.6 红花注射液对L-谷氨酸钠诱导后RGC-5细胞凋亡通路的调控及分析 |
| 4.7 本研究的创新性 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录1 红花活性成分对应靶点的基本信息 |
| 附录2 TON差异基因 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）脱细胞基质材料在动物模型中增强腹壁薄弱强度的应用机制及临床疗效观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 79例腹壁薄弱患者临床资料回顾性分析 |
| 前言 |
| 资料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 脱细胞基质在动物模型中增强腹壁薄弱的应用机制 |
| 背景 |
| 动物实验一 腹壁薄弱动物模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 动物实验二 聚丙烯材料和脱细胞基质材料修复动物腹壁薄弱模型的对照研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述: 腹壁薄弱诊疗相关进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文文章1 |
| 英文文章2 |
（5）人脐带间充质干细胞联合改良视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的临床转化研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及其明胶海绵支架修复材料的构建 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 人脐带间充质干细胞对大鼠视神经半横断损伤模型影响的研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 CT后处理技术辅助视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 临床资料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 人脐带间充质干细胞联合改良视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的临床研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 间充质干细胞临床应用的前景及挑战 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 学位论文自评表 |
| 致谢 |
（6）大鼠急性硬膜下血肿对脑表面血流影响的激光散斑技术研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分:大鼠急性硬膜下血肿改良模型的构建 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本部分研究不足 |
| 本研究创新点 |
| 第二部分:大鼠急性硬膜下血肿对脑表面血流的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本部分研究不足 |
| 本研究创新点 |
| 第三部分:大鼠急性脑膨出时脑表面血流的改变及机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本部分研究不足 |
| 本研究创新点 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 A 缩略词表 |
| 附录 B 学术成果 |
| 附录 C 综述 脑损伤术中急性脑膨出相关研究进展 |
| 参考文献 |
（7）降钙素基因相关肽（CGRP）通过调控Akt/mTOR信号通路介导的凋亡和自噬减轻创伤性颅脑损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 创伤性颅脑损伤患者血清CGRP水平及与预后的关系 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 降钙素基因相关肽(CGRP)对创伤性颅脑损伤模型小鼠的神经功能保护作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 降钙素基因相关肽(CGRP)对创伤性颅脑损伤后神经元细胞自噬和凋亡的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 AKT/mTOR信号通路参与了外源性CGRP对神经元细胞自噬和凋亡的调控 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述一 自噬和凋亡在颅脑创伤治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 降钙素基因相关肽CGRP在神经系统疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）胸腺肽α1对颅脑爆炸伤后认知功能障碍的作用和机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 研究背景与意义 |
| 1.2 本研究拟开展的工作 |
| 第二章 一种新的冲击波发生装置的设计 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 小结与讨论 |
| 第三章 一种新的大鼠颅脑爆炸伤模型的建立 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.3 小结与讨论 |
| 第四章 胸腺肽α1对颅脑创伤后认知功能障碍的作用和机制 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.3 小结与讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 胸腺肽α1与创伤性脑损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间科研成果 |
| 致谢 |
（9）中性粒细胞胞外诱捕网及托伐普坦在大鼠脑出血中作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 中性粒细胞胞外诱捕网在大鼠脑出血后纤溶治疗中的作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 中性粒细胞胞外诱捕网增加tPA纤溶抵抗的机制研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 托伐普坦对大鼠脑水肿的作用及机制研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 脑出血治疗现状及进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表论文 |
| 致谢 |
（10）基于Orexin对丘脑皮层的作用探索电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠的促醒作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1 现代医学对TBI后意识障碍的研究 |
| 2 中医对TBI后意识障碍的研究 |
| 3 针刺治疗颅脑损伤后意识障碍的用穴规律分析 |
| 4 总结 |
| 第二章 实验研究 |
| 实验一 电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠皮层脑电的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 数据处理及统计学分析 |
| 4 结果 |
| 5 分析和讨论 |
| 实验二 电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠Orexin及受体Orexin-receptor1的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 数据统计 |
| 4 结果 |
| 5 讨论与分析 |
| 第三章 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
四、动物外伤的观察治疗（论文参考文献）
- [1]青盲一号方对视神经损伤大鼠RGCs细胞的影响及其调控Bcl-2/Beclin-1自噬通路的研究[D]. 周晓昱. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]颅内静脉循环障碍加重TBI后脑损伤的实验研究[D]. 王成. 福建医科大学, 2021(02)
- [3]基于数据挖掘和网络药理学探讨中药治疗TON的用药规律及机制[D]. 吴琼. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]脱细胞基质材料在动物模型中增强腹壁薄弱强度的应用机制及临床疗效观察[D]. 王明刚. 山东大学, 2021(11)
- [5]人脐带间充质干细胞联合改良视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的临床转化研究[D]. 李佳. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [6]大鼠急性硬膜下血肿对脑表面血流影响的激光散斑技术研究[D]. 鲜亮. 蚌埠医学院, 2021(01)
- [7]降钙素基因相关肽（CGRP）通过调控Akt/mTOR信号通路介导的凋亡和自噬减轻创伤性颅脑损伤的实验研究[D]. 田军. 河北医科大学, 2021(02)
- [8]胸腺肽α1对颅脑爆炸伤后认知功能障碍的作用和机制[D]. 时全星. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(07)
- [9]中性粒细胞胞外诱捕网及托伐普坦在大鼠脑出血中作用及机制研究[D]. 谭强. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020
- [10]基于Orexin对丘脑皮层的作用探索电针“水沟穴”对TBI后意识障碍大鼠的促醒作用[D]. 谭丽. 广州中医药大学, 2020