一、低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响（论文文献综述）
常宇飞[1]（2021）在《高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的保护作用研究》文中进行了进一步梳理目的:本实验拟探究高压氧预处理与后处理能否有效保护因低压低氧环境所致大鼠认知功能障碍,并探讨Nrf2,HO-1蛋白在其产生保护作用过程中的部分可能机制。方法:预处理组:采用雄性SD大鼠40只（体重180-220g）,随机分为4组:空白对照组（D组）10只（不接受高压氧或低压氧处理）;高压氧对照组（HBO组）10只（只接受每天一次连续五天的高压氧预处理,不接受低压氧处理）;低压低氧组（S组）10只（接受连续2天的低压低氧处理）;高压氧预处理+低压低氧组（Pre HBO组）10只（接受每天一次连续五天的高压氧预处理,处理结束后第二天开始接受连续两天的低压低氧处理）。后处理组:采用雄性SD大鼠40只（体重180-220g）,随机分为4组:空白对照组（D组）10只（不接受高压氧或低压氧处理）;高压氧对照组（HBO组）10只（只接受每天一次连续五天的高压氧预处理,不接受低压氧处理）;低压低氧组（S组）10只（接受连续2天的低压低氧处理）;高压氧后处理+低压低氧组（Post HBO组）10只（先接受连续两天的低压低氧处理,处理结束后接受每天一次连续五天的高压氧后处理）。预处理组与后处理组的高压氧条件为2.5ATA,氧浓度要超过80%,CO2浓度<0.05%;预处理组与后处理组的低压氧条件为350 mm Hg,6%-7%O2。低压低氧处理后第八天开始利用Morris水迷宫及Y迷宫评价大鼠认知功能。低压低氧处理后不同时间点采用ELISA法分别测定各组大鼠血清促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α含量,各组大鼠海马组织Nrf2,HO-1蛋白表达情况。结果:1、低压低氧处理组大鼠处理后Y迷宫实验交替得分率相比对照组明显降低,高压氧预处理+低压低氧处理组大鼠和高压氧后处理+低压低氧处理组大鼠在Y迷宫实验中交替得分率均比低压低氧处理组大鼠明显升高。2、ELISA结果:实验动物经低压低氧处理后定时检测血清促炎因子,在不同时间点完成,明确IL-6、IL-1β、TNF-α含量,结果显示单纯低压低氧处理组高于高压氧预处理和后处理组。3、高压氧预处理和后处理组大鼠海马组织Nrf2,HO-1蛋白表达明显高于单纯低压低氧处理组。4、单独高压氧处理组与空白对照组相比,大鼠认知功能无显着差异。结论:急性低压低氧环境对大鼠可能存在一定伤害性,使得其早期认知功能下降,而进行高压氧预处理和后处理,可以缓解其认知功能下降的程度。对其机制进行探讨,考虑经高压氧处理后促炎因子释放减少,引起适度氧化应激,提高海马组织内Nrf2蛋白的表达,从而产生神经保护作用。
魏琼[2]（2021）在《MCC950对七氟烷所致的新生大鼠大脑神经毒性的保护作用及机制》文中研究指明背景:七氟烷作为临床常用的吸入性麻醉剂,广泛用于婴幼儿麻醉。但近年来研究发现,幼年期动物多次、长时间接受七氟烷麻醉可能会引起发育期大脑神经细胞凋亡、神经炎症以及成年后的认知功能障碍等。七氟烷所致的新生大鼠大脑神经毒性的具体机制尚未阐明,目前尚无有效的预防措施。目的:探究MCC950对七氟烷所致的新生大鼠大脑神经毒性的保护作用及可能机制。方法:动物实验:选取7日龄（P7）SD大鼠,体重约为12-15 g,雌鼠、雄鼠数量各半,按照随机数表法随机分为（1）对照组（Con）、（2）MCC950组（MCC950）、（3）七氟烷组（Sevo）、（4）MCC950+七氟烷组（MCC950+Sevo）（每组n=20）。Con组经腹腔注射与MCC950组等量的无菌PBS溶液,并持续吸入1 L/min氧气6h;MCC950组经腹腔注射MCC950（10 mg/kg）,并持续吸入1 L/min氧气6 h;Sevo组持续吸入2.5%七氟烷6 h;MCC950+Sevo组经腹腔注射MCC950（10 mg/kg）,30min后持续吸入2.5%七氟烷6 h。待P7大鼠恢复翻正反射24 h后,取材进行相关实验。光学显微镜下观察海马HE染色切片;免疫荧光实验检测海马CA1区损伤神经元和总神经元的占比;免疫组织化学实验检测海马CA1区NLRP3炎性小体的激活情况;Western Blot检测海马组织中NLRP3炎性小体、细胞焦亡标志物蛋白的表达量以及p38MAPK和STAT3的磷酸化水平;酶联免疫吸附实验检测海马组织中IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的细胞因子浓度;水迷宫实验检测各组鼠成年后（P33）学习、记忆能力情况。结果:1.用水迷宫实验检测各组鼠成年后（P33）学习和记忆能力的情况。结果显示:在前4天的定位航行实验中,相较于Con组,Sevo组成年鼠在训练第3天（P<0.01）、4天（P<0.05）逃避潜伏期延长;相较于Sevo组,MCC950+Sevo组成年鼠在训练第3天逃避潜伏期缩短（P<0.01）。同样的,在第5天空间探索实验中,Sevo组成年鼠相较于Con组成年鼠在原平台所在象限停留时间缩短（P<0.01）,穿越原平台次数也减少（P<0.001）;而MCC950+Sevo组成年鼠相较于Sevo组在原平台象限的停留时间明显延长（P<0.001）,穿越原平台次数也显着增加（P<0.001）。说明MCC950能够减轻七氟烷所致的新生大鼠成年后学习和记忆能力损伤。2.HE染色显示:相较于Con组,Sevo组新生大鼠海马CA1区可见神经元胞核固缩、胞浆深染以及胞核周围出现大量空泡,神经元损伤评分增加（P<0.01）;而MCC950+Sevo组相较于Sevo组神经元损伤情况明显减轻,神经元损伤评分下降（P<0.05）。在TUNEL和Neun免疫荧光双染实验中,相较于Con组,Sevo组新生大鼠海马CA1区死亡神经元明显增多（P<0.001）;而MCC950+Sevo组新生大鼠相较于Sevo组海马CA1区死亡神经元明显减少（P<0.01）。由此可知MCC950能够减轻七氟烷所致的新生大鼠海马CA1区神经元细胞的病理损伤。3.Western Blot检测海马组织中NLRP3炎性小体表达量。结果显示:相较于Con组,Sevo组鼠海马组织中NLRP3的蛋白表达量明显升高（P<0.01）;而MCC950+Sevo组鼠海马组织中NLRP3的蛋白表达量相较于Sevo组明显下降（P<0.01）。在免疫组化实验中,Sevo组鼠海马CA1区NLRP3阳性细胞的数量相较于Con组明显增多（P<0.01）;而MCC950+Sevo组相较于Sevo组可观察到NLRP3的阳性细胞数明显减少（P<0.05）。由此可知MCC950能够抑制七氟烷所致的新生大鼠海马区的NLRP3炎性小体的激活。4.Western Blot检测海马组织中细胞焦亡标志物蛋白的表达量。结果显示:相较于Con组,Sevo组新生大鼠海马组织中细胞焦亡标志物N-GSDMD（P<0.01）、p20-Caspase-1（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）、IL-18（P<0.01）的蛋白表达量明显升高;而MCC950+Sevo组新生大鼠海马组织中细胞焦亡标志物蛋白N-GSDMD（P<0.01）、p20-Caspase-1（P<0.05）、IL-1β（P<0.01）、IL-18（P<0.01）蛋白表达量相较于Sevo组都有不同程度的下降,而ASC的蛋白表达量在四个组中没有差异性。在ELISA实验中,Sevo组新生大鼠海马组织中IL-1β（P<0.01）、IL-18（P<0.01）、IL-6（P<0.05）、TNF-α（P<0.01）的细胞因子含量与Con组相比明显增多;而MCC950+Sevo组新生大鼠海马组织中IL-1β（P<0.01）、IL-18（P<0.01）、IL-6（P<0.01）、TNF-α（P<0.01）细胞因子的含量相较于Sevo组显着下降。说明MCC950能够抑制七氟烷所致的新生大鼠海马区的细胞焦亡以及促炎性细胞因子的释放,减轻海马区的炎症反应。5.Western Blot检测海马组织中p38MAPK和STAT3的磷酸化水平。结果显示:相较于Con组,Sevo组新生大鼠海马组织中p38MAPK（P<0.001）、STAT3（P<0.01）蛋白发生显着磷酸化,而MCC950+Sevo组p38MAPK（P<0.01）、STAT3（P<0.01）蛋白磷酸化有减弱的趋势。七氟烷可能参与新生大鼠海马区MAPK/STAT3信号通路的激活。结论:MCC950通过抑制由七氟烷长时间麻醉所致的新生大鼠海马区NLRP3炎性小体的激活和抑制细胞焦亡,进而减轻新生大鼠海马CA1区神经元的损伤,最终减轻新生大鼠成年后学习和记忆能力的损伤。
邓福谋[3]（2020）在《右美托咪定通过lncRNA-LOC102546895对老年大鼠术后认知功能障碍的作用机制研究》文中研究说明研究背景及目的:全新的围术期神经认知功能障碍（PND）概念涵盖了术前已经出现、术后三十天之内、术后三十天至术后一年出现的所有的认知功能障碍。术后认知功能障碍（POCD）,是老年患者手术后常见的中枢神经系统的损伤,且发生率随着年龄的增长逐渐增高,尤其是接受过外科大手术的患者。POCD发生后具有以下特点:病情起伏较大且易反复、自身认知能力大幅度下降、记忆功能衰退、生活及工作能力降低和患者情绪性格出现较大的变化,病情严重者可能出现患者人格变动。老年患者发病率明显高于年轻患者,这对处于老龄化的中国来说是一个极大的挑战。POCD患者因上述临床表现往往会增加在医院就诊住院时长、扩大当前相应的医疗资源缺口、增添家庭及社会医疗支出。这不仅严重影响患者日后生活自由和品质,也增添了患者家庭经济压力和社会医疗支出。目前POCD发病机制尚未有准确公认的诠释,并且发病因素复杂多样,主要研究方向是脑部海马组织中枢神经炎症。目前药物治疗POCD主要通过三种途径,分别是抗炎途径、抗氧化途径和保护神经元途径。右美托咪定（Dex）是一种高选择性α2肾上腺素能受体激动剂,手术中用作镇静剂和辅助剂,在重症监护室中用作镇定剂。通过与α2受体的结合使蓝斑神经元超极化抑制去甲肾上腺素释放。Dex治疗POCD的途径主要是保护神经元和抗炎作用。长链非编码RNA（lncRNA）是长度超过200nt的非编码RNA。lncRNA在脑部及神经疾病中发挥不可缺少的作用,参与神经信号传递、脑功能与发育和神经退行性疾病。有研究表明,lncRNA可通过影响Aβ蛋白参与调节阿尔茨海默症;可通过影响神经元突触功能和树突发育调节学习和记忆能力;还可调节促炎因子表达改善脑部海马区的炎症情况。POCD患者出现空间学习和记忆能力的改变,大脑海马区可能存在炎症因子的改变及组织的形态学改变,大脑海马区lncRNA可能也存在着特异性改变。Dex可能通过影响大脑海马区lncRNA表达达到治疗POCD的目的。第一部分右美托咪定对POCD动物模型的影响研究目的:观察右美托咪定对POCD动物模型的治疗作用。研究方法:本实验通过脾切除手术建立老年大鼠POCD模型,水迷宫实验检测大鼠空间记忆和学习能力;HE染色观察大鼠海马组织形态;qRT-PCR检测大鼠海马组织TNF-α和IL-1β的表达。1.POCD动物模型的建造:18月龄SD大鼠经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后进行脾切除术,Dex组术前腹腔注射Dex,其他组为生理盐水。2.水迷宫实验:构建实验平台,训练大鼠探索平台,训练完成后检测相关指标。3.H&E染色:利用苏木精和伊红对大鼠海马组织切片进行染色。4.qRT-PCR:提取大鼠海马组织总RNA后检测海马组织中目的基因的表达。研究结果:1.术前30分钟给与Dex后,降低了POCD大鼠的逃避潜伏期和增加了穿过平台的次数。2.POCD大鼠海马区中更多的神经元具有明显的核仁结构和略微稀疏且相对规则的排列。此外,神经元细胞核染色较浅,但是无明显的核固缩。3.显着下降POCD大鼠海马组织TNF-α和IL-1β。第二部分大鼠海马组织全转录组测序及分析研究目的:观察右美托咪定治疗后大鼠海马组织mRNA和lncRNA表达变化情况。研究方法:本实验通过对大鼠海马组织进行全转录组测序,确立并分析表达量有明显差异的mRNA和lncRNA。并通过GO与KEGG方法分析预测差异表达mRNA和lncRNA功能和信号通路。qRT-PCR在海马组织中验证测序结果。1.全转录组测序:提取Dex和POCD组大鼠海马组织总RNA,去除rRNA后反转录合成cDNA,经过片段分选,PCR富集后上机测序。测序获得的原始数据进行质量检测,GO与KEGG方法分析Dex和POCD组差异表达的mRNA和lncRNA的功能。2.RNA提取及qRT-PCR检测:提取大鼠海马组织总RNA,通过qRT-PCR检测海马组织五个lncRNA（LOC103692676、LOC102546895、LOC100911992、Ncl-ps1和LOC103692397）的表达情况。研究结果:1.Dex与POCD组海马组织mRNA及lncRNA差异表达明显,它们参与生命进程主要依靠NF-κB和p53信号通路。2.PCR表明测序结果数据可靠。第三部分lncRNA-LOC102546895在小胶质细胞中功能研究研究目的:在小胶质细胞中观察LOC102546895承担的细胞功能,主要是观察LOC102546895对细胞增殖、凋亡和记忆关键基因NPAS4表达的影响。研究方法:本实验通过siRNA敲低小胶质细胞中LOC102546895;CCK8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;WB和qRT-PCR技术检测NPAS4蛋白和mRNA表达水平。1.细胞增殖检测:细胞转染后用CCK-8处理,酶标仪检测OD值,观察细胞增殖活力。2.细胞凋亡检测:将对照组细胞与转染细胞收集,加入凋亡染色液后上机流式检测。3.NPAS4表达检测:提取总蛋白,通过WB和qRT-PCR方法检测NPAS4表达水平。研究结果:1.敲低LOC102546895表达后,小胶质细胞的增殖能力显着增强。2.敲低LOC102546895表达后,小胶质细胞细胞凋亡显着减少。3.敲低LOC102546895表达后,小胶质细胞的NPSA4表达明显减少。结论1.Dex可明显改善POCD引起的空间学习记忆障碍,降低海马组织中IL-1β和TNF-α表达。2.测序结果显示,Dex与POCD组海马组织mRNA及lncRNA差异表达明显,主要在NF-κB和p53信号通路上差异明显,表明Dex可能通过NF-κB和p53信号通路达到治疗POCD的目的。3.在敲低LOC102546895的小胶质细胞中,显着提升细胞增殖能力并显着降低细胞凋亡和NPAS4基因的表达。
王萌[4]（2020）在《基于线粒体自噬研究小建中汤抑制NLRP3炎症小体活化治疗抑郁症的机制》文中认为目的:本研究旨在探讨在抑郁症发病过程中,NLRP3炎症小体通路的过度活化是否与其负向调控机制线粒体自噬失活有关;明确小建中汤是否具有抗抑郁作用,能否有效逆转CUMS大鼠抑郁样行为,以及小建中汤治疗抑郁症的药理机制是否与上调抑郁模型大鼠海马线粒体自噬水平,改善线粒体功能,抑制TLR4/NF-κB通路和NLRP3炎症小体活化有关;明确小建中汤对NLRP3炎症小体通路的抑制作用是否依赖于PINK-1/Parkin途径介导的线粒体自噬。进一步探讨小建中汤调摄阴阳、温健脾气、生发肝气之功对抑郁症的作用机理。方法:1.实验一:SD大鼠40只,除空白组大鼠（n=8）外,应用CUMS造模,3周后测试大鼠体重和蔗糖偏好率,判断造模是否成功,造模成功的大鼠随机分为模型组（n=8）、氟西汀组（n=9）和雷帕霉素组（n=9）。分别给予药物治疗3周,同时继续进行CUMS造模。治疗结束后对大鼠实施行为学检测,取海马组织和血清。RT-PCR检测mt DNA拷贝数,线粒体自噬相关m RNA（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NLRP3炎症小体相关m RNA（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;Western-Blot检测线粒体自噬相关蛋白（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NLRP3炎症小体相关蛋白（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;ELISA检测血清IL-1β、IL-18、DA和5-HT变化。2.实验二:SD大鼠60只,除空白组大鼠（n=7）外,应用CUMS造模,3周后测试大鼠体重和蔗糖偏好率,判断造模是否成功,造模成功的大鼠随机分为模型组（n=7）、氟西汀组（n=7）、小建中低剂量组（n=8）、小建中中剂量组（n=8）和小建中高剂量组（n=8）。分别给予药物干预3周,同时继续进行CUMS造模。治疗结束后对大鼠实施行为学检测,继而取海马组织和血清。尼氏染色检测海马CA3区锥体细胞形态,透射电镜观察海马CA3区锥体细胞和线粒体超微结构;RT-PCR检测mt DNA拷贝数,线粒体自噬相关m RNA（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NF-κB信号通路相关m RNA（TLR4、IκB-α、NF-κB1、RELA和TNFα）变化,NLRP3炎症小体相关m RNA（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;Western-Blot检测线粒体自噬相关蛋白（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NF-κB信号通路相关蛋白（TLR4、p-IκB-α、p-p50和p-p65）变化;Western-Blot和免疫荧光检测NLRP3炎症小体相关蛋白（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;ELISA检测血清IL-1β、IL-18、DA、5-HT、SOD和MDA变化。3.实验三:SD大鼠50只,除空白组大鼠（n=7）外,应用CUMS造模,3周后测试大鼠体重和蔗糖偏好率,判断造模是否成功,造模成功的大鼠随机分为模型组（n=8）、氟西汀组（n=8）、小建中组（n=8）和小建中+抑制剂组（n=8）。分别给予药物治疗3周,同时继续进行CUMS造模。治疗结束后对大鼠实施行为学检测,继而取海马组织。RT-PCR检测线粒体自噬相关m RNA（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NLRP3炎症小体相关m RNA（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;Western-Blot检测线粒体自噬相关蛋白（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NLRP3炎症小体相关蛋白（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化。结果:1.CUMS模型大鼠行为学、线粒体自噬和NLRP3炎症小体通路变化1.1.行为学:与空白组相比,模型组大鼠体重和蔗糖偏好率明显下降（P<0.01）;从强迫游泳实验（FST）结果来看,模型组大鼠不动时间明显延长（P<0.01）;从旷场实验（OFT）结果来看,模型组大鼠水平得分、垂直得分、运动总距离、运动总时间均下降（P<0.01）。1.2.线粒体自噬:与空白组比较,模型组大鼠海马PINK-1、Parkinh和Beclin-1的m RNA相对表达量明显减少（P<0.01）,P62的m RNA相对表达量增多（P<0.01）;与空白组比较,模型组大鼠海马PINK-1、Parkin、Beclin-1和LC3B2/1的蛋白表达水平明显下降（P<0.01）,P62蛋白表达明显上升（P<0.01）。CUMS大鼠海马线粒体自噬水平降低。1.3.NLRP3炎症小体通路:与空白组比较,模型组大鼠海马NLRP3（P<0.05）、ASC（P<0.01）、caspase-1（P<0.01）、IL-1β（P<0.05）和IL-18（P<0.01）的m RNA相对表达量明显增多;与空白组比较,模型组大鼠NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。在CUMS大鼠海马出现了NLRP3炎症小体活化和神经炎症反应。2.雷帕霉素对CUMS模型大鼠行为学、线粒体自噬和NLRP3炎症小体通路的作用2.1行为学:与模型组比较,雷帕霉素组大鼠的蔗糖偏好率显着升高（P<0.01）,FST不动时间显着降低（P<0.01）。雷帕霉素逆转了CUMS大鼠的抑郁样行为。2.2线粒体自噬:与模型组比较,雷帕霉素组大鼠海马PINK-1（P<0.01）、Parkin（P<0.05）、Beclin-1（P<0.05）的m RNA相对表达量增多,P62的m RNA相对表达量减少（P<0.01）;与模型组比较,雷帕霉素组大鼠海马PINK-1、Parkin、Beclin-1和LC3B2/1的蛋白表达水平升高（P<0.01）,P62蛋白表达下降（P<0.01）。雷帕霉素上调了CUMS大鼠海马线粒体自噬水平。2.3 NLRP3炎症小体通路:与模型组比较,雷帕霉素组大鼠海马NLRP3（P<0.01）、caspase-1（P<0.05）、ASC（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）和IL-18（P<0.01）的m RNA相对表达量减少;同时,雷帕霉素组大鼠NLRP3、caspase-1 p20、ASC、IL-1β和IL-18的蛋白表达下降（P<0.01）。雷帕霉素抑制了CUMS大鼠海马NLRP3炎症小体活化。3.小建中汤对CUMS模型大鼠行为学的影响与模型组比较,小建中低、中、高剂量组大鼠体重均显着增加（P<0.01）;与模型组比较,小建中低、中、高剂量组大鼠的FST不动时间明显减少（P<0.01）;与模型组比较,低剂量和中剂量组大鼠OFT水平得分也有所增加（P<0.05）,小建中低、中、高剂量组大鼠的垂直得分、运动总距离和运动总时间明显上升（P<0.01）。小建中汤显着逆转了CUMS大鼠抑郁样行为。4.小建中汤对CUMS模型大鼠线粒体自噬的调控与模型组比较,小建中汤低剂量组大鼠海马PINK-1（P<0.01）、Parkin（P<0.05）的m RNA相对表达量增多,P62（P<0.01）的m RNA相对表达量减少;小建中汤中剂量和高剂量组大鼠海马PINK-1（P<0.01）、Parkin（P<0.05）和Beclin-1（P<0.01,P<0.05）的m RNA相对表达量增多,P62的m RNA相对表达量减少（P<0.01）。与模型组比较,小建中汤低剂量组大鼠海马PINK-1、Parkin和Beclin-1的蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,P62的蛋白表达水平下降（P<0.01）;小建中汤中剂量和高剂量组大鼠海马PINK-1、Parkin、Beclin-1和LC3B2/1（P<0.01）的蛋白表达上调,P62的蛋白表达下降（P<0.01）。小建中汤通过PINK-1/Parkin途径上调了CUMS大鼠海马区线粒体自噬水平。5.小建中汤对CUMS模型大鼠mt DNA拷贝数的影响与空白组比较,模型组大鼠海马mt DNA拷贝数增多（P<0.01）。与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠海马mt DNA拷贝数明显增多（P<0.01）。小建中汤明显上调了CUMS大鼠海马神经元的线粒体拷贝数,增加了线粒体数量。6.小建中汤对CUMS模型大鼠血清SOD和MDA的影响与空白组比较,模型组大鼠血清SOD（P<0.01）表达量减少,MDA（P<0.01）表达量明显增多;与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠血清SOD（P<0.05,P<0.01,P<0.01）表达量明显减增多,MDA（P<0.01,P<0.05,P<0.01）表达量明显减少。小建中汤改善了CUMS大鼠脂质过氧化水平。7.小建中汤对CUMS模型大鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响与空白组比较,模型组大鼠海马TLR4、IκB-α、NF-κB1、RELA和TNF-α的m RNA相对表达量增多（P<0.01）;与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠海马TLR4（P<0.01）、IκB-α（P<0.01）、NF-κB1（P<0.01）、RELA（P<0.01）和TNF-α（P<0.01,P<0.01,P<0.05）的m RNA相对表达量减少。与空白组比较,模型组大鼠海马p-p50、p-p65、p-IκB-α和TLR4的蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠海马p-p50、p-p65、p-IκB-α和TLR4的蛋白水平降低（P<0.01）。小建中汤抑制了CUMS大鼠海马TLR4/NF-κB信号通路的激活。8.小建中汤对CUMS模型大鼠NLRP3炎症小体通路的作用与模型组比较,小建中汤低、中、高组大鼠海马NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18的m RNA相对表达量和蛋白表达水平均降低（P<0.01）。小建中汤抑制了CUMS大鼠海马NLRP3炎症小体的活化。9.小建中汤对CUMS模型大鼠血清5-HT和DA的影响与空白组比较,模型组大鼠血清中DA（P<0.01）和5-HT的蛋白水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠血清DA和5-HT的表达上调（P<0.01）。小建中汤增加了CUMS大鼠血清5-HT和DA水平。10.小建中汤+线粒体自噬抑制剂对CUMS模型大鼠线粒体自噬的影响与小建中组相比,小建中+抑制剂组大鼠PINK-1（P<0.01）、Parkin（P<0.05）、Beclin-1（P<0.01）的m RNA相对表达量减少,P62（P<0.01）的m RNA相对表达量增多;与小建中组比较,小建中+抑制剂组大鼠海马PINK-1、Parkin、Beclin-1和LC3B2/1的蛋白表达水平明显下降（P<0.01）,P62蛋白表达明显上升（P<0.01）。线粒体自噬抑制剂减弱了小建中汤对CUMS大鼠线粒体自噬的正向调控作用。11.小建中汤+线粒体自噬抑制剂对CUMS模型大鼠NLRP3炎症小体通路的影响与小建中组相比,小建中+抑制剂组大鼠海马NLRP3（P<0.01）、ASC（P<0.05）、caspase-1（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）和IL-18（P<0.01）的m RNA和蛋白表达均上升。线粒体自噬抑制剂减弱了小建中汤对CUMS大鼠NLRP3炎症小体的抑制作用。结论:1.CUMS抑郁模型大鼠海马区同时存在线粒体自噬水平低下和NLRP3炎症小体通路的过度活化,这可能是抑郁症的重要机制之一。2.线粒体自噬激动剂雷帕霉素改善了CUMS大鼠的抑郁样行为,降低了NLRP3炎症小体各组分和下游炎症因子的表达水平。雷帕霉素通过上调线粒体自噬水平抑制了NLRP3炎症小体的过度活化。进一步验证了在抑郁症发病过程中,NLRP3炎症小体的活化可能与其负向调控机制线粒体自噬失活有关。3.小建中汤通过改善CUMS大鼠自主活动,减少CUMS大鼠强迫游泳不动时间,有效逆转了CUMS大鼠抑郁样行为,具有明确的抗抑郁作用。4.小建中汤治疗抑郁症的药理机制可能与上调CUMS大鼠海马区PINK-1/Parkin途径介导的线粒体自噬水平,增加mt DNA拷贝数,改善线粒体功能,抑制TLR4/NF-κB通路和NLRP3炎症小体活化,减少炎症因子的释放有关。5.小建中汤对NLRP3炎症小体的抑制作用依赖于其对PINK-1/Parkin途径介导的线粒体自噬的调节。
张华朋[5]（2020）在《PI3K/Akt通道在七氟烷后处理脑缺血糖尿病大鼠神经保护作用的研究》文中研究表明研究背景脑卒中（cerebral stroke）是各种诱发因素导致脑内动脉闭塞、破裂而造成脑部血液循环障碍而引起脑组织损伤的一组疾病,分为缺血性、出血性两种。脑卒中作为世界上致死率最高的疾病之一,全球每年新发病例高达1030万,且近来有年轻化的趋势,给社会、家庭和患者带来极大的负担。更严重的是,许多其他疾病会直接或间接导致脑卒中的发生。例如糖尿病就是引起脑血管疾病的独立危险因素,据国外资料显示,有糖尿病史患者同时患脑血管疾病的概率达到了 30～40%,而且糖尿病合并脑卒中的患者已经达到非糖尿病患者的2倍以上。临床上糖尿病合并脑卒中的患者中缺血性脑卒中占到了 80%,糖尿病并发卒中的发病率快速上升。因此如何设计和开发安全有效的脑卒中治疗药物,尤其是糖尿病脑卒中是一个亟待解决的问题。众多研究资料表明,吸入性麻醉药预处理或后处理可以保护神经系统减轻缺血性损伤。有学者发现七氟烷预处理能够减少动脉阻塞导致的脑梗死体积和凋亡细胞。许多脑缺血再灌注损伤动物模型实验证明,七氟烷预处理可以有效减少神经细胞的凋亡、一定程度改善脑梗死体积、神经功能评分、炎性反应等方面从而保护脑神经。但我们并不清楚糖尿病是否会影响七氟烷后处理的神经保护作用,且七氟烷发挥作用的机制也有待研究。有学者发现糖尿病大鼠通过恢复海马突触功能和Na+,K+-ATP酶的活性提高学习和记忆能力,机制可能与PI3K/Akt信号通道有关;Yang和同事发现利拉鲁肽可以激活糖尿病大鼠PI3K/Akt信号通道,促进自噬,最终对慢性2型糖尿病相关的学习记忆障碍提供保护;另有研究已经证实糖尿病大鼠大脑皮层细胞中PI3K/Akt信号通道相关蛋白的表达量明显下降。因此,有必要进行七氟烷对糖尿病大鼠脑缺血后神经损伤影响的研究,以期发现七氟烷后处理对脑缺血再灌注糖尿病大鼠神经功能损害是否有效,以及PI3K/Akt信号通道在七氟烷后处理中的作用机制,为后期降低糖尿病人群脑缺血后神经功能损害及促进脑卒中后神经功能恢复提供理论依据。研究目的本文通过构建脑缺血合并糖尿病大鼠模型,评估七氟烷后处理对合并糖尿病的大鼠在脑缺血再灌注后,脑组织损伤程度及氧化应激和细胞凋亡的影响,以及PI3K/Akt信号通道在七氟烷后处理中的作用机制做初步探究。研究方法1.研究对象及分组:健康Wistar大鼠288只,体重（260±30）g。大鼠饲养于室温20±2℃,相对湿度50%～70%的清洁环境中,自由摄食、摄水,适应性饲养一周后,进行实验分组和脑缺血糖尿病模型制备。首先取其中240只大鼠随机分为6组（每组40只）,正常组（Control）:不做处理;糖尿病组（DM）:选取糖尿病造模成功后大鼠;脑缺血模型组（CI）:采用线栓法将健康大鼠大脑中动脉血流阻断2h后恢复灌注;糖尿病脑缺血模型组（DMCI）:阻断糖尿病大鼠大脑中动脉血流2h后恢复灌注;七氟烷后处理组（SCI）:健康大鼠缺血再灌注开始时立即给予大鼠2.6%的七氟烷吸入,持续30min;糖尿病七氟烷后处理组（SDMCI）:糖尿病大鼠缺血再灌注开始时立即给予大鼠2.6%的七氟烷吸入,持续30min。Control、DM、CI和DMCI组大鼠均在再灌注开始时给予100%氧气,持续30 min,大鼠再灌注24h后进行相应指标检测。2.建立糖尿病和脑缺血大鼠模型:大鼠高脂高糖饮食,喂养5周后,腹腔注射STZ（链脲佐菌素,Streptozotocin,溶解于柠檬酸缓冲液中,25mg/kg）每天一次,连续2d。72h后尾静脉采血测空腹血糖,以血糖≥16.7mmol/L,并出现多食、多尿、多饮为大鼠糖尿病模型成立。脑缺血大鼠模型构建方法:大鼠术前12h禁食。腹腔内注射10%水合氯醛麻醉大鼠,仰卧位固定,手术暴露右颈总动脉,在分叉处分离颈内动脉和颈外动脉,用4/0尼龙线阻断大脑中动脉,2h后抽出尼龙线,开放大脑中动脉,恢复缺血区灌注。模型成功建立的标志是:大鼠手术后清醒,左侧肢体出现偏瘫,以左上肢较为明显;提尾悬挂时左上肢呈现蜷缩屈曲;下地行走时向左侧转圈跌倒,不能正常直行。3.LY294002脑室内注射给药:为了研究七氟烷治疗脑缺血再灌注中PI3K/Akt通道的作用,用PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002预处理七氟烷治疗组大鼠。取其余48只大鼠,将大鼠分为6组（每组8只）,分别构建正常脑缺血加生理盐水组（NS-CI）、糖尿病合并脑缺血加生理盐水组（NS-DMCI）,七氟烷后处理脑缺血加生理盐水组（NS-SCI）、七氟烷后处理糖尿病脑缺血加生理盐水组（NS-SDMCI）、七氟烷后处理脑缺血加抑制剂组（LY-SCI）、七氟烷后处理糖尿病脑缺血加抑制剂组（LY-SDMCI）大鼠模型。术前将LY294002溶于二甲基亚砜（DMSO）和乙醇中,终浓度为10mM。将大鼠用10%水合氯醛（350mg/kg,腹腔给药）麻醉。LY-SCI组和LY-SDMCI组在建立缺血模型术前30min,在缺血侧脑室注射10μl LY294002溶液,其他组大鼠麻醉后侧脑室注射10μl生理盐水作为对照。NS-SCI组、NS-SDMCI组、LY-SCI组、LY-SDMCI组缺血2h后恢复灌注时给予给予大鼠2.6%的七氟烷吸入,持续30min:NS-CI组、NS-DMCI组再灌注开始时给予100%氧气,持续30min。4.指标检测:对于神经功能评估,采用Longa的5级4分法,在动物麻醉清醒后24h进行评分并记录神经功能缺失症状;对于脑梗塞体积评估,采用TTC染色法并利用ImageJ软件进行计算;通过计算脑组织干/湿重比值评估大鼠脑水肿程度;对于大鼠大脑组织形态学变化,采用HE染色在光学显微镜下进行观察;对于大鼠神经学习能力的检测,采用Morris水迷宫实验进行测定;对于大鼠血清中的 S100B、Bcl-2、Bax、GSH-PX、Caspase-3 和 SOD 的含量,采用 ELISA试剂盒进行检测;对于大鼠血清中NOS活性和NO含量,采用比色法进行检测;western blot检测脑组织中PI3K/Akt通道相关蛋白的磷酸化水平。5.统计学方法分析:应用SPSS19.0统计学软件对各项检测数据进行数据分析,所有分析数据结果均以均数±标准差（mean±SD）表示,两组间数据分析采用t检验,多组间数据分析采用单因素方差分析（ANOVA）,事后分析采用LSD-t检验,两组间数据采用双变量Pearson进行相关性分析,以P<0.05表示差异具有统计学意义。研究结果1.七氟烷后处理可以减弱大鼠缺血性脑损伤。各脑缺血组大鼠与Control组相比脑梗死体积、Longa神经缺陷评分和脑含水量均增加（P<0.05）,且DMCI组大鼠的上述指标较CI和DM组大鼠有进一步增加（P<0.05）。七氟烷治疗降低了 SCI和SDMCI组的脑梗死体积、Longa分值和脑含水量（P<0.05）。结果表明七氟烷后处理减弱了 SCI和SDMCI组大鼠的缺血性脑损伤,对神经系统有保护作用。2.七氟烷后处理能改善脑缺血糖尿病大鼠的空间学习和记忆能力。利用Morris水迷宫来评估大鼠的空间学习和记忆功能,结果显示与Control组相比,其他脑缺血组别的大鼠逃避潜伏期时间明显延长,穿越平台次数显着降低（P<0.05）。而相比于CI和DMCI组,再灌注开始时吸入七氟烷的大鼠（SCI组和SDMCI组）逃避潜伏期时间明显减少,穿越平台次数显着增加（P<0.05）,并且可以在更短的时间内在导航测试中找到平台（P<0.05）。这些结果表明:七氟烷后处理改善了脑缺血糖尿病大鼠的空间学习和记忆能力。3.七氟烷后处理减轻了脑缺血糖尿病大鼠的脑组织形态学损伤。HE染色结果显示,对照组的大鼠脑组织由健康神经细胞组成,没有细胞肿胀、膜起泡、核浓缩、破碎溶解。与Control组和DM组相比,CI组的大鼠脑组织切片显示出坏死,神经元丢失,核固缩,神经元收缩和星形细胞肿胀。此外,与CI组相比,DMCI组显示出更严重的损伤。经过七氟烷后处理后,SCI组和SDMCI组的大鼠的组织损伤有明显的改善。4.七氟烷后处理减少脑缺血糖尿病大鼠的氧化应激反应。为了探究七氟烷的神经保护作用是否与其抗氧化特性有关,我们检测了内源性抗氧化酶SOD和GSH-PX的活性,以及NOS和NO的水平。与Control组相比,CI组的SOD和GSH-PX水平降低（P<0.05）,而DMCI组中二者表达水平进一步降低（P<0.05）。与CI和DMCI组相比,SCI和SDMCI组中SOD和GSH-PX含量明显增加（P<0.05）。七氟烷可以显着增加SCI和SDMCI组的大鼠的SOD和GSH-PX的表达。另一方面,NOS和NO的表达水平在CI组中有所增加（P<0.05）,并在DMCI组中进一步增加（P<0.05）,但经七氟烷后处理二者的表达水平显着降低（P<0.05）,这些结果表明七氟烷可以防御SCI和SDMCI组中大鼠的氧化损伤。5.七氟烷后处理可减弱脑缺血糖尿病大鼠脑组织的细胞凋亡。缺血再灌注后,血清中促凋亡因子Bax和Caspase-3在CI和DMCI组中的表达上调（P<0.05）,但在七氟烷治疗组中表达下调（P<0.05）。另一方面,抗凋亡因子Bcl-2的表达水平在CI组相比于Control组有所降低（P<0.05）,在DMCI组中Bcl-2的表达水平进一步降低（P<0.05）。与CI和DMCI组相比,七氟烷可以显着提高Bcl-2的表达（P<0.05）。这些结果表明:七氟烷通过在脑缺血大鼠脑组织中抑制细胞凋亡来减轻缺血性脑损伤。6.七氟烷后处理组大鼠的S100B蛋白水平显着降低。相比与对照组,各脑缺血组大鼠血清中S100B的浓度显着升高（P<0.05）,且DMCI组S100B的含量高于CI组和DM两组（P<0.05）,表明合并糖尿病可以加重大鼠缺血后再灌注造成的脑损伤。经七氟烷吸入治疗后,与CI和DMCI组相比,SCI和SDMCI组的S100B水平明显降低（P<0.05）。7.S100B蛋白水平与氧化损伤指标的相关性分析显示:S100B蛋白表达量与Longa神经功能缺陷评分、脑梗死体积、含水量、NOS、NO、Bax和Caspase-3呈正相关（P<0.01）,与SOD、GSH-PX和Bcl-2呈负相关（P<0.01）。说明血清S100B可以作为评价大鼠脑缺血损伤的可靠指标,提示七氟烷后处理可以减轻大鼠脑缺血引起的脑损伤程度。8.七氟烷后处理显着增加PI3K/Akt通道活性。Western blot实验结果显示脑缺血大鼠中PI3K和Akt蛋白的磷酸化水平与Control组相比明显降低（P<0.05）,DMCI组大鼠p-PI3K、p-Akt的含量低于CI组和DM组（P<0.05）。而与CI和DMCI组相比,用七氟烷后处理后,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的比例明显增加（P<0.05）。表明七氟烷可能通过PI3K/Akt信号通道的激活来发挥作用。9.阻断PI3K/Akt信号通道可以减弱七氟烷对氧化应激和凋亡的保护作用。用PI3K/Akt通道抑制剂LY294002注射大鼠,检测血清中氧化应激和细胞凋亡相关因子水平的变化。七氟烷可以使脑缺血和糖尿病合并脑缺血的大鼠血清促凋亡因子Bax、Caspase-3水平降低（P<0.05）,并可以使凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白含量升高（P<0.05）;当同时用LY294002处理大鼠后,七氟烷的作用变得不明显,血清Bax、Caspase-3、Bcl-2的含量与处理前变化不大（P<0.05）。类似地,脑缺血与糖尿病合并脑缺血的大鼠再灌注开始时吸入七氟烷可以改善缺血引起的抗氧化因子SOD和GSH-PX水平下降（P<0.05）,使它们的表达量大幅度升高;且代表氧化程度的NOS和NO水平与未经七氟烷处理的大鼠相比较也有所下降（P<0.05）。而LY294002的引入减弱了七氟烷的这种治疗效果,使血清SOD、GSH-PX、NOS和NO的含量均接近未吸入七氟烷治疗的缺血再灌注大鼠（P<0.05）。说明阻断PI3K/Akt信号通道可以抑制七氟烷的治疗效果,进一步验证了七氟烷是通过激活PI3K/Akt通道发挥保护作用。结论七氟烷后处理可显着改善糖尿病大鼠缺血再灌注时造成的脑损伤并很可能通过激活PI3K/Akt信号通道,抑制脑神经元细胞内的氧化应激反应和细胞凋亡从而发挥对大鼠脑缺血性神经损伤的保护作用。
张晓岩[6]（2020）在《西红花苷预处理保护急性高原缺氧大鼠脑海马神经元的SIRT1/PGC-1a机制研究》文中认为背景及目的:青藏高原,平均海拔4000米以上,号称“世界屋脊”。但是由于空气稀薄、大气压低、紫外线强等因素导致大部分高原地区自然环境十分恶劣。而急性暴露于高原低压低氧环境下,存在着的发生高原疾病风险。人体在高原急性低氧等环境因素影响下会发生一系列的生理病理改变,其中急性低氧环境是导致这些改变的最主要因素。脑是机体最主要的耗氧器官之一,在急性缺氧状态下对缺氧损害具有很高的敏感性,尤其是脑海马结构和功能的损伤最明显。因此如何通过药物预防这种病理性损伤是高原医学脑科学的研究热点。沉默调节蛋白1（Silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1）为依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的去乙酰化酶。SIRT1通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助因1α（peroxisome proliferators activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α）等相关因子在细胞线粒体生物合成、细胞的凋亡、组织细胞抗氧化以及在延长细胞寿命方面都起到了非常重要的调控作用。西红花苷是传统药材藏红花（Saffron,Crocus sativus L）的有效活性成分。现代医学研究发现西红花苷具有抗氧化、抗凋亡、抗癌、神经保护及防治心血管疾病等广泛的药理作用。基于课题组前期研究发现西红花苷可以上调高海拔急性低氧条件下大鼠脑海马SIRT1表达。所以针对性提出假设:在急性高海拔低氧条件下西红花苷预处理能否对海马神经元发挥保护作用,以及与SIRT1/PGC-1α通路调节有何联系?为回答以上问题,课题进行了四方面的研究（1）在海拔4200m现场建立大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型;（2）通过西红花苷不同剂量（25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d）预处理对大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型低氧72小时的作用,明确保护作用及SIRT1/PGC-1α通路分子保护机制和西红花苷最佳有效浓度;（3）验证西红花苷最佳浓度预处理对大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型在高海拔急性低氧1、3、5、7天的保护作用及SIRT1/PGC-1α通路分子保护机制;（4）在整体动物层面阐明西红花苷通过SIRT1/PGC-1α通路调节对大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型的保护机制,同时以HT22细胞为研究对象,在细胞层面验证西红花苷对低氧条件下HT22细胞的保护作用,及通过相关通路发挥抗线粒体损伤、抗氧化应激、抗凋亡分子保护机制。方法:1.模型构建:雄性SD大鼠,从海拔2250m通过5小时急进海拔4200m现场建立大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型。通Morris水迷宫实验检测学习和记忆能力;通过HE染色、Nissl染色观察海马组织病理学变化;透射电镜观察海马神经元超微结构的变化;检测脑海马SOD、GSH-Px和MDA表达;TUNEL法检测大鼠脑海马神经元凋亡率。2.西红花苷预处理通过SIRT1/PGC-1α通路调节对大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型保护机制及最佳剂量筛选:雄性SD大鼠随机分为5组,低海拔对照组（2250m）、急性高海拔低氧组（4200m）、西红花苷低剂量+急性低氧组（25mg/kg/d）、西红花苷中剂量+急性低氧组（50mg/kg/d）、西红花苷高剂量+急性低氧组（100mg/kg/d）。用药组每天肌肉注射西红花苷1次,对照组每天肌肉注射相同体积的0.9%Nacl,连续给药3天后运至高海拔低氧环境（青海省果洛州甘德县,海拔4200米）72小时;Morris水迷宫实验检测学习和记忆能力;HE染色、Nissl染色、透射电镜观察海马组织病理学变化;免疫组织化学法、RT-PCR、Western blot检测脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、caspases-3、Bcl-2、Bax表达;检测脑海马SOD、GSH-Px和MDA表达及TUNEL法检测大鼠脑海马神经元凋亡率。3.验证西红花苷（100mg/kg/d）预处理对模型大鼠在高海拔急性低氧1、3、5、7天的保护作用及相关分子机制:设立低氧模型组和西红花苷组（100mg/kg/d）,利用Morris水迷宫实验检测高海拔低氧1、3、5、7天学习和记忆能力;HE染色、Nissl染色和透射电镜观察海马组织病理学变化;用免疫组织化学法、RT-PCR、Western blot检测低氧1、3、5、7天各组脑海马组织SIRT1、PGC-1α和TFAM、caspases-3、Bcl-2、Bax因子表达;检测高海拔低氧1、3、5、7天各组脑海马SOD、GSH-Px、MDA的水平;TUNEL法检测高海拔低氧1、3、5、7天各组脑海马神经元凋亡水平。4.验证西红花苷对低氧条件下HT22细胞的保护作用及通过SIRT1/PGC-1α通路分子机制:（1）建立（1%O2）低氧HT22细胞损伤模型;（2）通过CCK-8法检测西红花苷（0.001、0.01、0.1、1、10、100μmol/L）对HT22低氧（1%O2）12、24小时细胞活力影响,明确最佳剂量范围;（3）西红花苷对低氧条件下HT22细胞的保护分子机制:设常氧对照组、低氧（1%O2）组、SIRT1抑制剂（EX-527,100μmol/L）+低氧（1%O2）组、西红花苷25μmol/L+低氧（1%O2）组、西红花苷50μmol/L+低氧（1%O2）组、西红花苷100μmol/L+低氧（1%O2）组,通过透射电镜观察HT22细胞的超微结构变化,通过Western-blot、RT-PCR检测各组的SIRT1、PGC-1α和TFAM、caspases-3、Bcl-2、Bax表达,通过试剂盒检测各组SOD、GSH-Px、MDA的表达及流式细胞技术检测各组细胞调亡率。结果:1.高海拔急性低氧大鼠海马损伤模型构建成功。行为学Morris水迷宫实验显示,模型组寻台潜伏期和行进距离显着增加（P<0.05）,而目标象限百分比下降（P<0.05）;组织病理学结果显示模型组大鼠海马神经元细胞排列紊乱,核皱缩,局部有溶解性坏死（嗜酸性神经元）而且海马CA1区神经元Nissl染色IOD值明显减低（P<0.05）;透射电镜观察发现,模型组大鼠海马CA1区神经元结构欠清晰,线粒体数量明显减少,线粒体高度肿胀并见嵴破坏严重;模型组大鼠脑海马GSHPx和SOD活性明显下降（P<0.05）,MDA含量显着升高（P<0.05）,TUNEL染色结果显示,急性高海拔低氧组海马CA1区TUNEL凋亡阳性细胞数明显高于对照组（P<0.05）.2.西红花苷（25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d）预处理通过SIRT1/PGC-1α通路对模型组大鼠发挥了保护作用,且呈剂量依赖效应。行为学Morris水迷宫实验显示,西红花预处理组的寻台潜伏期和行进距离显着降低（P<0.05）,而目标象限百分比升高（P<0.05）,呈剂量依赖性效应（P<0.05）;组织病理学结果显示,HE染色显示西红花苷预处理各组均能明显减轻急性高海拔低氧72小时大鼠脑海马神经元病理损伤,Nissl染色显示大鼠海马CA1区神经元IOD值明显升高（P<0.05）,透射电镜显示,西红花苷预处理各组大鼠海马CA1区神经元核结构恢复正常,线粒体肿胀减轻,线粒体脊结构均趋于正常,呈剂量依赖性效应;西红花苷预处理能显着提高大鼠脑海马GSHPx和SOD表达,降低MDA含量（P<0.05）同时西红花苷预处理减少凋亡阳性细胞的数量（P<0.05）,呈剂量依赖性效应（P<0.05）;西红花苷预处理能上调脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2m RNA和蛋白表达,下调Bax和Caspase-3的表达（P<0.05）,呈剂量依赖性效应（P<0.05）;结果显示西红花苷（100mg/kg/d）效果最佳。3.西红花苷（100mg/kg/d）对高海拔急性低氧1,3,5天大鼠脑海马神经元的保护作用明显,与SIRT1/PGC-1α通路分子保护机制相关。通过Morris水迷宫实验检测,与低氧模型组比较西红花苷预处理组大鼠急性高海拔低氧第1、3、5天的学习和记忆能力明显提高（P<0.05）;通过形态学观察发现急性高海拔低氧环境导致大鼠脑海马区神经细胞排列紊乱,局部有溶解性坏死,线粒体水肿及结构损伤,尤其在第1、3、5天损伤明显,通过西红花苷干预处理也明显减轻神经元及线粒体损伤;西红花苷预处理组能显着提高急性高海拔低氧1、3、5天大鼠脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2在m RNA和蛋白水平相对表达量（P<0.05）,而下调Bax、Caspase-3表达（P<0.05）,同时西红花苷预处理能显着提高急性高海拔低氧组1、3、5天大鼠脑海马GSH-Px和SOD活性,降低MDA含量;西红花苷预处理明显降低急性高海拔低氧1、3、5天大鼠脑海马神经元的凋亡（P<0.05）。4.西红花苷预处理对低氧条件下HT22细胞有明显保护作用与SIRT1/PGC-1α通路分子保护机制相关。透射电镜发现,HT22细胞O2%低氧模型组12、24小时胞质结构松散,核膜皱缩,线粒体肿胀明显,线粒体脊消失,24小时比12小时损伤严重且SIRT1抑制剂+低氧组损伤更明显;西红花苷（25、50、100μmol/L）+低氧组HT22细胞核结构逐渐恢复正常,线粒体和内质网肿胀减轻,线粒体脊结构均趋于正常,呈剂量依赖效应;与对照组相比,低氧组和SIRT1抑制剂+低氧组12、24小时SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2蛋白及m RNA水平表达显着降低（P<0.05）,而Bax、Caspase-3蛋白及m RNA表达明显升高（P<0.05）,抑制剂+低氧组比低氧组抑制作用更明显（P<0.05）;而各西红花苷（25、50、100μmol/L）+低氧组SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2蛋白及m RNA表达显着降低上调,而Bax、Caspase-3蛋白及m RNA表达明显下调（P<0.05）,呈剂量依赖表达（P<0.05）;与对照组比较低氧组和抑制剂+低氧组12、24小时SOD、GSH-Px活性下降、MDA的表达升高（P<0.05）,抑制剂+低氧组比低氧组抑制作用更明显（P<0.05）,而各西红花苷（25、50、100μmol/L）+低氧组中SOD、GSH-Px活性明显增强,MDA的下降,呈剂量依赖表达（P<0.05）;与对照组比较低氧组和抑制剂+低氧（1%O2）组12、24小时凋亡率明显升高（P<0.05）,抑制剂+低氧组比低氧组凋亡率更高（P<0.05）,而各西红花苷+低氧组凋亡率明显下降（P<0.05）,呈剂量依赖表达（P<0.05）。结论:1.成功构建高海拔急性低氧大鼠海马损伤模型。2.西红花苷（25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d）预处理能明显改善高海拔急性低氧脑海马损伤模型大鼠认知功能障碍,改善脑海马神经元病理损伤,通过调控SIRT1/PGC-1α通路相关因子表达发挥抗线粒体损伤、抗氧化应激、抗凋亡中的作用,呈剂量依赖性效应。3.西红花苷（100mg/kg/d）预处理明显改善高海拔急性低氧第1、3、5天大鼠的学习和记忆能力,明显减轻脑海马神经元病理性损伤,也通过调控SIRT1/PGC-1α通路发挥抗线粒体损伤、抗氧化应激、抗凋亡的作用。4.西红花苷通过调控SIRT1/PGC-1α通路相关因子表达减轻HT22细胞在1%O2条件下12和24小时线粒体结构损伤,发挥抗氧化应激、抗凋亡作用。
黄海金[7]（2020）在《氟比洛芬酯对烧伤SD大鼠早期认知功能的影响及其机制研究》文中研究指明研究背景:烧伤是毁灭性的伤害,通常会导致高发病率、情绪低落以及生活质量的下降。除了紧张的即时护理外,烧伤通常还需要进行长期治疗、多次门诊就诊（换药等）以及多次重建性外科手术和住院治疗,这些与烧伤有关的健康后果通常会给烧伤受害者及其家人带来额外的社会经济负担。热损伤促进组织炎症和疼痛,这是很难控制的。已有研究表明,麻醉和镇痛可以影响大鼠烧伤模型的结果。不同的外周机制似乎与烧伤疼痛有关,但仍需进一步研究。大量的临床前期研究和一些回顾性临床证据表明,麻醉可能损害认知能力。越来越多的临床前期研究证据表明麻醉剂是神经元发育和功能强大的调制器,可能导致有害的作用。本研究旨在探究氟比洛芬酯是否足以减少烧伤引起的痛觉和炎症,以及对早期认知的影响,阐明氟比洛芬酯治疗大鼠热损伤模型、减轻早期认知功能损伤的分子机理。研究目的:POD是老年患者常见的术后并发症,在非心脏手术后的老年患者中,POD的发生率为3.6%-28.3%。氟比洛芬酯理论上通过抑制烧伤局部的炎症反应及中枢神经系统的炎症反应、减轻疼痛,减少认知功能损伤的发生。因此,本研究的目的是通过研究氟比洛芬酯对老年SD大鼠烧伤后早期认知功能的影响,并探讨其可能的机制,为临床烧伤患者术后认知功能损伤的防治提供可靠的实验依据。实验一:氟比洛芬酯对烧伤大鼠早期认知和炎症的影响研究方法:通过构建老年大鼠烧伤模型,利用HE染色判断模型是否成功,实验分组为:1)正常对照组（Contro1）;2)烧伤模型组（Model）;3)氟比洛芬酯低剂量处理组（5mg/kg）;4)氟比洛芬酯中剂量处理组（10mg/kg）;5)氟比洛芬酯高剂量处理组（15mg/kg）。将各组大鼠（n=6）按上述分组处理,正常对照组不做烧伤处理。建模前30分钟/建模后24h给药,第3天处死大鼠。利用Von Frey法测量各组大鼠在烧伤后12、24、36、48、60、72h的机械痛阈值,评价大鼠疼痛行为学;通过Morris水迷宫实验观察大鼠的空间记忆和学习能力;HE染色检测各组皮肤和海马组织的病理结果;ELISA检测各组血清中TNF-α、CINC-1、IL-6和IL-1β表达水平;TUNEL染色检测各组海马组织凋亡的结果。研究结果:模型建造成功。烧伤SD大鼠经氟比洛芬酯处理治疗后,烧伤引起的游滞区组织的表皮层变薄、真皮层结构肿胀、胶原结构改变、局部炎症浸润、组织破坏等损伤倾向有所减轻,并随剂量增加,这一作用更加明显。给予氟比洛芬酯处理治疗后,大鼠机械痛阈值较模型组显着升高（P<0.05）,各剂量处理组组间差异不显着。Morris水迷宫实验显示,烧伤使大鼠空间记忆和学习能力下降,而氟比洛芬酯处理治疗后,大鼠的空间记忆和学习能力有所改善。海马HE染色结果显示烧伤使大鼠海马组织出现病理改变,经氟比洛芬酯处理治疗后,海马病理学改变有所改善,但各剂量处理组组间差异不明显。与正常对照组相比,模型组的TNF-α、CINC-1、IL-6和IL-1β含量都明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,各氟比洛芬酯处理组的TNF-α、CINC-1、IL-6和IL-1β含量都明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）,各剂量处理组组间差异不显着。与正常对照组相比,模型组的大鼠海马组织凋亡明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,氟比洛芬酯处理治疗组的大鼠海马组织凋亡明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;并且氟比洛芬酯高剂量处理组（15mg/kg）下降最为明显。研究结论:氟比洛芬酯处理后抑制了炎症因子TNF-α、CINC-1、IL-6和IL-1β的表达,缓解痛觉过敏,减轻大鼠早期认知功能损伤。实验二:氟比洛芬酯影响烧伤大鼠早期认知的分子机制研究方法:通过构建老年大鼠烧伤模型,利用HE染色判断模型是否成功,实验分组为:1)正常对照组（Control）;2)烧伤模型组（Model）;3)氟比洛芬酯低剂量处理组（5mg/kg）;4)氟比洛芬酯中剂量处理组（10mg/kg）;5)氟比洛芬酯高剂量处理组（15mg/kg）。建模前30分钟/建模后24h给药,根据实验一中机械痛阈值的结果,选择造模后48h处死各组大鼠（n=6）。HE染色检测各组皮肤和海马组织的病理结果;qPCR检测各组BDNF、Caspase3、GFAP和MMP9的mRNA表达水平;免疫组化染色检测各组BDNF的表达和定位情况;Westernblot检测各组BDNF、Caspase3、p38和p-p38蛋白表达水平。研究结果:模型建造成功。与正常对照组相比,模型组大鼠海马组织的BDNF、Caspase3、GFAP和MMP9的mRNA表达水平显着升高,并且BDNF、caspase3和p-p38的蛋白表达明显升高,差异均具有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,各氟比洛芬酯处理治疗组海马组织的BDNF、Caspase3、GFAP和MMP9的mRNA表达水平显着下降,并且BDNF、caspase3和p-p38的蛋白表达明显下降,差异均具有统计学意义（P<0.05）,各剂量处理组组间的BDNF、Caspase3、GFAP和MMP9的mRNA表达水平及BDNF、caspase3和p-p38的蛋白表达水平差异不显着。研究结论:氟比洛芬酯通过抑制烧伤SD大鼠p38信号通路,使BDNF、Caspase3、GFAP和MMP9的mRNA表达及BDNF、caspase3和p-p38的蛋白表达下降,从而减轻大鼠早期认知功能损伤。
王道合[8]（2020）在《低氧预处理和七氟醚预处理对成年大鼠短暂性全脑缺血的保护作用及对Jun-B mRNA表达的影响》文中研究表明目的:观察低氧预处理和七氟醚预处理对成年大鼠短暂性全脑缺血（Transient global cerebral ischemia,tGCI）的保护作用及对Jun-B mRNA表达的影响。方法:成年健康雄性（Sprague Dawley,SD）大鼠,48只,体重240～250g,随机分4组:全脑缺血再灌注组（tGCI组）,低氧预处理（Hypoxic preconditioning,HPC）组,七氟醚预处理（Sevoflurane,SEV）组,低氧+七氟醚预处理组（H+S组）,每组大鼠12只。tGCI组:用Pulsinelli四血管闭塞法（4VO）建立10 min tGCI大鼠模型;HPC组:反复暴露于减压舱内模拟海拔4000m,每天1 h,连续5 d;SEV组:大鼠接受2.4%七氟醚与100%氧气混合气体的预处理,1h/d,连续5d;H+S组:低氧预处理联合七氟醚预处理,连续5天,1 h/d。缺血再灌注4 h（T1）、24 h（T2）、7 d（T3）分别处死大鼠,制作海马组织冰冻切片,行（Fluoro-Jade B,FJB）荧光染色,观察海马组织神经细胞凋亡,通过Trizol提取海马组织RNA,使用q PCR方法检测分析海马组织中Jun-B mRNA相对表达含量,最后采用统计软件进行数据分析。结果:（1）FJB荧光染色结果:HPC组、SEV组、H+S组与tGCI组比较:T1、T2、T3时间点,HPC组、SEV组、H+S组FJB阳性细胞数目均明显减少,差异有显着性（P<0.01）;H+S组与HPC组比较:T1、T2、T3时间点,H+S组FJB阳性细胞数目明显减少,有差异显着性（P<0.05）;H+S组与SEV组比较:在T1、T2时间点,FJB阳性细胞数目均无明显变化,差异无显着性（P>0.05）,在T3时间点,H+S组FJB阳性细胞数目有明显减少,差异有显着性（P<0.05）。（2）q PCR检测结果:HPC组、SEV组、H+S组与tGCI组相比:T1、T2、T3时间点,HPC组、SEV组、H+S组Jun-B mRNA相对表达量均显着降低,差异有显着性（P<0.01）;H+S组与HPC组比较:T1、T2、T3时间点,H+S组Jun-B mRNA相对表达量均明显下降,差异有显着性（P<0.05）;H+S组与SEV组比较:T1、T2时间点,H+S组Jun-B mRNA相对表达量均明显下降,差异有显着性（P<0.05）;T3时间点,H+S组Jun-B mRNA相对表达量无明显变化,差异无显着性（P>0.05）。结论:（1）低氧预处理、七氟醚预处理和低氧预处理+七氟醚预处理均对tGCI大鼠模型后海马组织神经细胞有保护作用,且低氧预处理+七氟醚预处理的保护作用可能强于低氧预处理、七氟醚预处理保护作用;（2）低氧预处理、七氟醚预处理对tGCI大鼠模型后海马组织神经细胞保护作用的机制可能是通过调控Jun-B mRNA的表达。
梁克山[9]（2019）在《P38MAPK抑制剂、雌二醇和TPX2对痴呆鼠模型海马神经细胞损害的保护作用及认知功能的影响》文中认为引言痴呆是以认知功能进行性减退为特征的综合征,是一种渐进的、退化的脑部疾病,导致认知和情感功能的丧失,最常见于记忆,而其他功能如语言、行为以及最显着的执行功能也常常受损。据估计,全世界约有2400万人患有痴呆症,到2040年,这一数字将增加3至4倍。大约60%是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）,10%～20%为血管性痴呆（vascular dementia,VaD）,分别占痴呆的第一、二位,其发病机制尚未完全明了。AD特征性病理改变为颞叶海马出现β淀粉样蛋白沉积形成的细胞外老年斑和tau蛋白过度磷酸化形成的神经细胞内神经原纤维缠结,VaD是由于缺血、出血、低灌注、栓塞、小血管病等血管因素及事件致认知领域损害。在影像学方面,AD是以海马、颞、顶叶皮质萎缩为主的弥漫性萎缩,VaD表现为认知相关区（额叶、颞叶、海马、顶叶、角回、丘脑等）的血管事件（梗死、出血、脑白质病变、腔隙性梗死）。除家族史和一些躯体疾病外,导致痴呆的危险因素主要有:年龄、性别、较低教育、经济水平等。两者在临床表现上各有特点。但在临床实际工作中常难以鉴别。有证据表明,相当部分的AD具有脑血管方面的病理改变,这可能是老龄化的表现之一,也有可能是AD与VaD混合状态的表现之一。同样地,VaD患者脑组织病理检查可以发现诸如老年斑之类AD改变,这可能是混合性痴呆的结果,与正常的老年化进程有关。这就导致人们对这两种疾病的关系和鉴别产生了浓厚的兴趣,这些问题的研究有助于对痴呆发生的病理机制有更加深人的了解,对临床干预策略的制定有很大的推动作用。海马是神经系统中与人类的学习与记忆关系密切的重要功能区,大脑的海马体不但是老年痴呆最早最重要的病变区域,而且也是血管性痴呆的重要受损部位,以往的研究表明,海马神经元凋亡在AD和VaD的发病中均起着重要的作用,并且对缺血低灌注损伤具有明显的易感性。阿尔茨海默氏病（阿尔茨海默病）是一种进行性神经退行性疾病,最终导致神经元不可逆性损伤以及各种智力缺陷,包括认知和记忆。AD已成为重要的公共卫生问题,其症状主要包括躯体、认知、情绪功能的障碍,以及长期的认知和感觉功能退化,这些均明显影响患者的生活质量。当前已有大量有关AD发生和发展方面的研究,并已取得显着成绩,但是这些研究仍然无法提供有效的疾病诊断和治疗技术。这种紧迫的需求激发了神经科学界及医疗行业对AD治疗方法发展的兴趣。根据经典的淀粉样蛋白假说,相对于其他各种淀粉衍生物,Aβ1-42在AD的发病中起着重要的作用。Aβ1-42是由淀粉样前体蛋白（APP）裂解产生的β-分泌酶和γ-分泌酶。Aβ蛋白过量导致淀粉样斑块的形成和各种神经功能障碍包括炎性级联反应的激活启动,tau蛋白磷酸化的推广,氧化应激的增加,细胞内的信号转导通路的管制,突触可塑性的损伤及诱导神经元的凋亡和细胞死亡。越来越多的证据表明,雌二醇可能既促进又会损害记忆相关的过程,因此,雌激素在AD病理过程中所扮演的确切的角色仍然是难以捉摸的。目前,通过向脑内立体定向注射Aβ1-42建立AD小鼠模型。切除小鼠双侧卵巢来观察17β-雌二醇（E2）对AD不同阶段的治疗（早期和晚期）的影响,国内外少见报道,对这一课题的进一步研究无疑具有重要意义。充分证据表明,妇女绝经后循环系统中雌激素水平会突然下降,造成氧化应激风险加大和神经退行过程加快,尤其是那些AD的高危人群。另一方面,实验研究表明,雌性动物（OVX）切除卵巢后的雌激素治疗可改善其学习和记忆过程,提高其在旋臂迷宫和对象识别中的认知能力。在临床情况下,绝经后5年内保持较高雌二醇水平的女性与保持稳定低雌二醇水平的女性相比,前者表现出更优的行为能力。此外,具有较高内源性雌激素水平的绝经后妇女在斯特鲁普任务和空间工作记忆,延迟回忆和数字排序测试方面的能力更为出色。同样,正在服用激素替代疗法的妇女在非空间工作记忆和空间工作记忆任务有更好的反应。然而,也有报道指出雌激素对绝经后妇女认知能力的负面影响。旨在了解这些差异的研究结果表明,若提前应用雌二醇,暴露于Aβ蛋白的神经元所受损伤会显着减少,而若同时或于暴露Aβ蛋白5天后应用雌二醇,神经元则无法获得雌二醇所带来的保护,甚至所受损伤会转而加剧。总之,在阿尔茨海默病的病理过程中雌激素起着微妙又重要的作用,可在不同阶段施加积极或消极的影响。因此,本实验通过研究AD不同病理阶段的17β-雌二醇（E2）治疗（早期和晚期）,全面了解E2在AD病理过程中的角色和评估E2作为预防药物的意义。海马是神经系统中与人类的学习与记忆关系密切的重要功能区,大脑的海马体不但是老年痴呆最先最重要的病变区域,而且也是血管性痴呆的重要受损部位,以往的研究表明,海马神经元凋亡在AD和VaD的发病中均起着重要的作用,但SB202190和SB203580对海马神经元凋亡因子表达和学习记忆能力的影响却少有报道,特别是SB202190和SB203580对海马神经元凋亡和Bcl-2、Caspase-3表达影响的研究国内外未见有报道。为了探讨海马神经元凋亡在AD和VaD中的致病机制以及对认知功能的影响,历时6年课题组做了以下3项课题:1.应用雌二醇对AD痴呆小鼠模型海马神经细胞元凋亡的保护作用机制和认知功能影响进行了研究,本研究利用切除双侧卵巢的小鼠,经侧脑室内注射Aβ1-42的方法建立阿尔茨海默病（AD）模型,并给予雌二醇（E2）治疗,研究Aβ1-42诱导的海马神经毒性及分子机制,评价E2拮抗Aβ1-42诱导的海马神经毒性的效果和分子机制。2.应用p38MAPK抑制剂对VaD痴呆大鼠模型海马神经细胞凋亡的保护作用机制和认知功能影响进行了研究,在这项研究中,我们研究了 SB203580、SB202190对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡和学习记忆能力的影响。观察了 p38 MAPK抑制剂对脑细胞凋亡的保护作用,并借助海马依赖性水迷宫试验检测了大鼠的空间参考学习和记忆能力。3.应用TPX2研究对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用机制。借助海马依赖性水迷宫试验检测了大鼠的空间参考学习和记忆能力。TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡,H E染色观察各组脑组织细胞,Western blot检测ERK和p38 MAPK的表达,采用RT-PCR方法检测MAPK、ERK和p21中mRNA的表达水平。观察了 TPX2对经β1-42处理脑组织的细胞凋亡有保护作用,进一步通过抑制MAPK、ERK和p38蛋白的表达而探讨了其作用机理。总之,课题组通过以上3项研究,旨在进一步阐明p38MAPK抑制剂和雌二醇对痴呆鼠模型海马神经元凋亡的保护作用机制以及对痴呆模型认知功能的影响。第一部分 雌二醇治疗对小鼠阿尔茨海默病模型海马神经元发生及认知功能障碍的早期保护作用目的:本研究利用切除双侧卵巢的小鼠,经侧脑室内注射Aβ1-442的方法建立阿尔茨海默病（AD）模型,并给予雌二醇（E2）治疗。检测Aβ1-42诱导的神经毒性及分子机制;评价E2拮抗Aβ1-42诱导的神经毒性的效果和分子机制。方法:1.双侧卵巢切除术:所有小鼠双侧卵巢切除并立即皮下植入药物,可以持续释放药物60天,内含有E2 0.18毫克。2.动物模型的制备:AD模型组小鼠Aβ1-42（4μg/mouse）,缓慢注射（0.5μl/min）;安慰剂组小鼠注射等量生理盐水（4μg/mouse）。3.BrdU注射:BrdU连续3次腹腔注射,间隔6小时,给药剂量为50mg/kg。4.雌二醇治疗:（1）早期E2治疗:注射BrdU后第7天双侧海马注射Aβ1-42,后给予7天雌二醇皮下注射,3 μg/day。（2）后期E2治疗:注射BrdU后第7天双侧海马注射Aβ1-42,7天后再给予7天雌二醇皮下注射,3 μ g/day。5.Morris水迷宫实验:计算每组小鼠平均游泳速度、延迟时间。在实验的第8天,撤去隐蔽的水面下平台,观察并记录小鼠的游泳速度及登台潜伏期。6.免疫染色:采用NeuN和BrdU免疫染色检测海马神经的生成。7.ELISA检测:检测促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、雌激素（Estrogen）、孕酮（Progesterone）血清水平。8.RT-PCR:从大脑样本中取出海马组织,在冰上用剪刀将其剪碎。总mRNA采用Trizol试剂提取和RNA反转录与PrimeScriptTMRT试剂盒。9.Western blotting检测信号通路蛋白的表达:从大脑样本中取出海马组织,在冰上用剪刀将其剪碎。蛋白样品的提取采用放射免疫沉淀试验（RIPA）缓冲液。10.cAMP浓度测定:海马组织,在冰上用剪刀将其剪碎。组织颗粒在裂解缓冲液中裂解10分钟,在4℃、14000 rpm离心10分钟,收集上清液并用LANCETM cAMP 384试剂盒测定环磷酸腺苷（cAMP）浓度。11.透射电子显微镜:腹腔麻醉后小鼠,经心脏用2.5%戊二醛灌注并取出海马组织,海马组织继续用2.5%戊二醛固定过夜,在4℃,四氧化锇固定2小时后制作超薄切片（60 nm）,用丙酮脱水和醋酸铀染色。结果:1.小鼠海马注射Aβ1-42后,进行Morris水迷宫测试评,估认知功能,特别是空间学习和记忆能力（图1A）。在培训第1-2天,接受Aβ1-42注射的“老年”鼠在发现可见平台的游泳速度或时间延迟上与对照组相比没有差异,这表明空间学习能力不是在Aβ1-42注射后立即受到影响（P>0.05,n=10;见图1A）。相反,改为隐藏平台培训的第3-7天,Aβ1-42小鼠比对照组小鼠时间延迟更长,这些差异在5-7天显着,这表明记忆功能是在Aβ1-42注射后5天开始明显受损（P<0.01,n=10;见图 1A）。从迷宫中去掉平台后,观察小鼠在每个象限停留的时间比例（图1B）。Aβ1-42小鼠在象限虚拟平台的位置所花费的时间百分比明显减少。在本研究中,通过NeuN和BrdU染色标记海马神经元（图1C）,染色结果显示Aβ1-42模型组小鼠BrdU注射后21到28天,NeuN、BrdU 阳性细胞数量均显着减少（P<0.01,n=10;图1D）。这些结果表明,小鼠海马神经元在接受Aβ1-42注射后发生严重损害。2.为评估E2对AD小鼠病理过程中早期阶段的影响,在造模后立即给予E2治疗（图2C）。与单纯对照组相比,接受E2治疗的对照组海马神经元再生无明显变化,而Aβ1-42小鼠接受E2治疗与未接受E2治疗比较,NeuN和BrdU 阳性细胞显着增加（P<0.01,n=3;图2D）。此外,给予E2治疗后,AD小鼠找到隐藏平台的潜伏期显着降低（P<0.01,n=10;图2A）,在撤出平台的象限所停留的时间比例明显升高（P<0.01,n=10;图2B）。这些研究结果表明,在Aβ1-42小鼠AD病理过程的早期阶段,雌激素治疗增加海马元神经再生并促进认知功能的恢复。3.为评估E2对AD小鼠病理过程中后期阶段的影响,在造模后第7天开始给予E2治疗（图2C）。无论是对照组还是模型组,E2治疗均没有改善海马神经元再生,NeuN和BrdU阳性细胞没有明显变化（P>0.05,n=3;见图3D）。此外,给予E2治疗,并没有降低AD小鼠找到隐藏平台的潜伏期（P>0.05,n=10;见图3A）。在撤出平台的象限停留时间比例没有明显升高（P>0.05,n=10;见图3B）。4.通过测定LH、FSH、雌激素和孕激素的血清水平,确认E2的效果。在E2治疗前FSH,LH,雌激素或孕激素水平没有显着差异（P>0.05,n=6;图4A-D）,但在E2治疗后LH、FSH、雌激素水平显着增加,而孕酮水平明显下降（P<0.01,n=6;图 4A-D）。在早期给与雌二醇的Aβ1-42小鼠,TrkB、BDNF的mRNA及蛋白水平显着上调,而P75NTR表达水平减少（P<0.01,n=3;图4E,F）。这些结果表明,E2诱导的神经发生,至少部分通过BDNF/TrkB通路。对这一途径的下游因子进行了检测（图4E,F）和结果与以前的研究结果相一致,STAT3/CREB/ERK信号通路的激活明显增加（P<0.01,n=3;图4E,F）。本研究还对cAMP水平进行评估,以确认BDNF/TrkB下游信号通路的活化（图4D）。5.与后期E2治疗及未给予E2治疗比较,在早期给与雌二醇的A β 1-42小鼠,NO和ROS的水平明显降低（P<0.01,n=3;图5A）。相应的细胞死亡相关的Cytochrome-c/Bax/Bcl-2/acspase-3 信号通路因子活化下调（P<0.01,n=3;图5B-C）。这些结果表明,E2降低AD病理过程早期阶段海马区的细胞的氧化应激及死亡通路相关因子的活化,促进认知功能的恢复。6.与后期E2治疗及未给予E2治疗比较,在早期给与雌二醇的Aβ1-42小鼠,胶质细胞增生显着降低（P<0.01,n=3:图6A,B）。E2介导的炎症反应,上调抗炎信号通路的因子活化（CD206,FIZZ1,1、TGFβ）并下调促炎信号通路因子的活化（IL-1β,TNF 和 IL-6。P<0.01,n=3;图 6C-E）。7.在本研究中,使用透射电镜观察海马突触的超微结构。与后期E2治疗及未给与E2治疗比较,发现在早期给与雌二醇的Aβ1-42小鼠,突触的数量显着增加（P<0.01,n=3;图7A）。为了进一步探讨E2对不同类型突触的作用,采用Western blot对海马NMDA受体和AMPAR受体水平进行分析。NMDA受体（GluN1和GluN2）水平没有明显影响,而AMPAR受体水平（GluA1 GluA2）明显增加（P<0.01,n=3;图7B,C）。此外,还有重要的突触后蛋白Hevin和SPARC表达明显增加（P<0.01,n=3;图7B,C）,这两种蛋白在突触的生成及功能方面起着重要作用。结论:1.Aβ1-42小鼠认知功能减退与海马区神经元发生有关。小鼠海马神经元在接受Aβ1-42注射后发生严重损害,海马神经元损害在认知功能障碍方面起到重要作用。2.AD早期阶段E2可增加海马神经元再生并促进认知功能的恢复,而后期阶段E2治疗对的海马神经元再生及认知功能无改善。3.AD早期阶段E2治疗上调Aβ1-42小鼠海马神经元再生相关信号通路。4.AD早期阶段E2治疗可减少氧化应激、下调细胞死亡相关的信号通路活性。5.AD早期阶段E2治疗抑制Aβ1-42小鼠海马小胶质细胞过度增生。6.AD早期阶段E2治疗可增加海马神经元突触受体数量。第二部分 P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡的保护作用及学习记忆能力的影响目的:本研究利用应用双侧颈总动脉结扎法（2-VO法）制作血管性痴呆（VaD）大鼠模型,经侧脑室内注射SB202190和SB203580的方法对VaD大鼠学习记忆能力进行研究,观察p38MAPK抑制剂对VaD大鼠海马依赖的Morris水迷宫的认知功能所起的作用,并通过研究海马神经元凋亡、海马区P38MAPK磷酸化变化及Bcl-2和Caspase-3表达,研究SB202190和SB203580对血管性痴呆大鼠海马区的神经保护机制,探讨海马神经元凋亡在血管性痴呆的发病机制中所起的作用。方法:利用应用双侧颈总动脉结扎法（2-VO法）制作血管性痴呆（VaD）大鼠模型,随机分为SB202190治疗组、SB203580治疗组、对照组和假手术组。假手术组只分离出双侧颈总动脉并不对其结扎,作为两血管法VaD模型的正常对比。治疗组采用侧脑室注射给药方式分别给予P38MAPK抑制剂SB202190、SB203580,对照组和假手术组采用侧脑室注射给药方式给予等量二甲基亚矾（DMSO）,注射药物2周后用Morris水迷宫法测试各组大鼠的学习记忆能力的变化。注射药物后应用TUNEL法检测海马区神经元凋亡,应用蛋白印迹（Western blot）法检测大鼠海马区P38MAPK磷酸化变化,免疫荧光法和激光共聚焦显微镜观察大鼠海马区Bcl-2和Caspase-3表达,以探讨SB202190和SB203580对血管性痴呆大鼠海马区的神经保护机制。结果:1.本研究对平台逃避潜伏期、空间学习、大鼠的SB203580或SB202190治疗效果均进行了研究。结果表明,SB203580和SB202190治疗组平台逃避潜伏期与假手术组和对照组相比明显缩短（**P<0.01）,说明大鼠的空间学习能力得以提高。2.给予SB203580和SB202190治疗5天后我们还观察到海马磷酸化激活P38 MAPK表达水平在各治疗组间差异显着（**P<0.01,SB203580治疗组或SB202190组治疗VS假手术组和对照组）。结果显示,SB203580或SB202190治疗后p38MAPK的表达显着降低。SB203580和SB202190治疗组间无显着差异。3.SB203580和SB202190有助于海马神经元抵抗慢性缺血诱导的细胞凋亡。为了探索SB203580和SB202190是否对血管性痴呆大鼠体外海马细胞凋亡和学习记忆能力有效,本实验用HT22细胞测试SB203580和SB202190的治疗效果。与对照组相比,用SB203580或SB202190治疗后实验组海马神经元凋亡减少。实验也证实了在体内SB203580、SB202190对海马细胞凋亡和血管性痴呆大鼠学习记忆能力是有疗效的。侧脑室注射SB203580和SB202190治疗五天后,处死大鼠,与对照组、SB203580和SB202190组相比,假手术组TUNEL阳性细胞数（脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记,绿色荧光）显着下降（**P<0.01）。然而,SB203580和SB202190组与对照组相比,前者TUNEL阳性细胞数目显着降低;而且SB203580组与SB202190组相比,前者TUNEL 阳性细胞较少。总之,SB203580和SB202190有助于海马神经元抵抗慢性缺血诱导的细胞凋亡。4.本实验研究了 SB203580和SB202190对VaD大鼠海马区施加的抗凋亡能力。脑室注射五天后,处死大鼠获取VaD大鼠海马标本。SB203580或SB202190培养48小时后,进行实验计算实验组凋亡细胞的数量（n=3）。P38MAKA培养后,HT22细胞出现皱缩,碎裂成膜结合凋亡小体,很快被邻近细胞吞噬。P38MAKA能够减少HT22细胞的凋亡。而SB203580或SB202190治疗组凋亡的HT22细胞数量均显着低于对照组。5.在VaD大鼠模型的海马标本上进行了 P38 MAKA和凋亡相关基因之间的关系研究。我们对P38MAKA诱导细胞凋亡相关的mRNA的表达水平进行了分析。与假手术组和对照组相比,细胞凋亡抑制基因BAX和Bcl-2在VaD大鼠海马经SB203580 或 SB202190 治疗后表达增加。caspase-8、caspase-3 和 caspase-9 的表达在SB202190或SB203580治疗组比对照组均显着降低。但SB202190治疗组细胞凋亡抑制基因Bax和Bcl-2的表达比SB203580组略高,这表明SB202190可通过抑制P38 MAKA的活性而减少细胞凋亡,依赖线粒体的凋亡途径可以由慢性缺血激活。6.大鼠经SB203580和SB202190治疗存活时间延长 实验组其余VaD大鼠模型继续存活以观察治疗的远期疗效。假手术组和对照组大鼠在第30天处死。相反,约30%SB202190组和60%SB203580组的动物最后需要处死（**P<0.01）。这说明与SB203580相比,SB202190治疗可进一步延长大鼠的存活时间。其中,相对于SB203580,SB202190较好的治疗效果体现在VaD大鼠显着的生存优势（**P<0.05）结论1.P38MAPK抑制剂SB202190和SB203580,能提高或改善VaD大鼠的学习记忆能力。2.本研究给予VaD大鼠P38MAPK抑制剂治疗后p38MAPK的表达显着降低,有效减少海马神经元细胞凋亡,促进记忆障碍重建,且耐受性良好。3.SB203580和SB202190通过抑制P38 MAKA的活性而减少细胞凋亡,有助于海马神经元抵抗慢性缺血诱导的细胞凋亡,依赖线粒体的凋亡途径可以由慢性缺血激活。4.大鼠经SB203580和SB202190治疗存活时间延长,与SB203580相比,SB202190治疗可进一步延长大鼠的存活时间。第三部分 TPX2对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用机制的研究目的:研究TPX2对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用机制。方法:将90只大鼠随机分为药物组、对照组和空白组,每组30只。在药物治疗组和空白组大鼠用1 0%水合氯醛麻醉（0.5ml/100g剂量）,在大鼠双侧海马区域的准确位置注入Aβ1-425ul（浓度1μg/ul）建立模型。将配置的TPX2抑制剂制成溶液。模型建立后,各组大鼠分别给予不同的治疗方法;药物组大鼠将TPX2-siRNA溶液连接10μl微量注射器给予侧脑室注射10μl,对照组大鼠给予侧脑室注射等量1%DMSO溶液。空白组为正常健康组,本组大鼠未作任何手术或药物治疗。大鼠脑组织分为两个部分,一部分是固定、脱水、石蜡包埋、制成约5um厚度的切片。TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡,HE染色观察各组脑组织细胞,Western blot检测ERK、MAPK和p38的表达水平,采用RT-PCR方法检测MAPK、ERK和p38中mRNA的表达水平。结果:一周后,TUNEL染色显示在药物组脑组织细胞凋亡率明显高于对照组和空白组,差异具有统计学意义（P<0.05）;使用TPX2抑制剂后,药物组TPX2的mRNA表达水平显着低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）,分别检测MAPK和p38蛋白的mRNA表达水平,药物组MAPK水平显着高于对照组及空白组,差异具有统计学意义（P<0.05）;Western blot灰度值比较中发现,MAPK和p38的表达水平无显着差异,其差异不具有统计学意义（P>0.05）。然而,在药物组中,MAPK、p38表达水平明显高于对照组,空白组MAPK灰度值则明显下降,其差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:因此,TPX2通过抑制MAPK、ERK和p38蛋白的表达抑制经Aβ1-42处理的脑组织细胞发生凋亡,对其有保护作用。
姚鹏[10]（2019）在《星状神经节阻滞通过SIRT1/NF-κB信号通路改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍的研究》文中研究指明目的:研究星状神经节阻滞对血管性痴呆大鼠认知功能障碍的保护作用及对SIRT1/NF-κB信号通路的影响,并探讨SIRT1/NF-κB信号通路在体外培养的海马神经元缺血再灌注损伤中的作用。方法:（1）动物实验:60只SPF级雄性SD大鼠采用随机数表法分为5组:假手术组（Sham）、血管性痴呆模型组（VD）、星状神经节阻滞处理组（VD+SGB）、EX527处理组（VD+EX）、星状神经节阻滞+EX527处理组（VD+SGB+EX）。分别采用颈交感神经离断法、双侧颈总动脉结扎法建立星状神经节阻滞（SGB）模型和血管性痴呆（VD）模型。VD模型建立8w后,使用Morris水迷宫评估各组大鼠空间学习和记忆能力;脑组织切片苏木素-伊红染色观察大鼠海马CA1区神经元形态学变化;免疫组织化学染色检测海马SIRT1蛋白表达;ELISA法测定外周血IL-6、IL-8及TNF-α水平;化学比色法检测海马区SOD、MDA水平;Western blot检测海马区SIRT1、NF-κB、IκBα、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达量。（2）细胞实验:体外培养海马神经元细胞系（HT22）,采用氧糖剥夺9h再灌注24h处理构建脑缺血再灌注损伤模型。实验随机分为5组:对照组（Con）、氧糖剥夺再灌注组（OGD）、SIRT1抑制剂EX527（1μg/ml）预处理组（OGD+EX）、SIRT1激动剂SRT1720（10μg/ml）预处理组（OGD+SRT1720）、SRT1720+EX527预处理组（VD+EX+SRT）。各组相应处理结束后采用CCK-8法检测细胞活力;化学比色法检测LDH释放量;流式细胞学测定神经元凋亡率;Western blot检测SIRT1、NF-κB、IκBα、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达量。结果:（1）动物实验:与Sham组相比,VD组大鼠海马区SOD活性降低、MDA含量明显升高,外周血IL-6、IL-8水平明显升高,海马区SIRT1、IκBα、Bcl-2蛋白表达降低,NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,大鼠空间学习和记忆能力显着降低;与VD组相比,SGB处理组海马区SOD活性升高、MDA含量降低,血清IL-6、IL-8水平明显降低,SIRT1、IκBα、Bcl-2蛋白表达升高,NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,大鼠空间学习和记忆能力明显改善;与VD+SGB组相比,VD+SGB+EX527组海马区SOD活性降低、MDA含量升高,血清IL-6、IL-8水平明显升高,SIRT1、IκBα、Bcl-2蛋白表达降低,NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,大鼠空间学习和记忆能力明显降低。（2）细胞实验:与Con组相比,OGD组神经元活力降低,LDH释放量、神经元凋亡率明显升高,SIRT1、IκBα、Bcl-2蛋白表达降低,NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高;与OGD组相比,SRT组神经元活力升高,LDH释放量、神经元凋亡率明显降低,SIRT1、IκBα、Bcl-2蛋白表达增加,NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低;与OGD组相比,EX组神经元活力降低,LDH释放量、神经元凋亡率明显升高,SIRT1、IκBα、Bcl-2蛋白表达降低,NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高。结论:星状神经节阻滞通过激活SIRT1/NF-κB信号通路改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍;激活SIRT1/NF-κB信号通路可减轻氧糖剥夺再灌注处理诱导的海马神经元损伤、抑制神经元凋亡。
二、低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响（论文提纲范文）
（1）高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分:高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的保护作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 预处理实验结果 |
| 2.2 后处理实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分:高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的改善作用机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 预处理实验结果 |
| 2.2 后处理实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 高压氧治疗神经外科疾病及认知功能障碍的研究现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）MCC950对七氟烷所致的新生大鼠大脑神经毒性的保护作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词表 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 常用实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 动物实验 |
| 三、结果 |
| 1.MCC950可能抑制七氟烷所致的新生大鼠大脑神经毒性 |
| 1.1 新生大鼠在麻醉过程中血氧饱和度和血气分析的变化 |
| 1.2 MCC950可能减轻七氟烷所致的新生大鼠成年后的学习和记忆能力的损伤 |
| 1.3 MCC950可能减轻七氟烷所致的新生大鼠海马CA1区神经元损伤 |
| 2.MCC950抑制七氟烷所致的新生大鼠大脑神经毒性可能机制 |
| 2.1 MCC950可能抑制经七氟烷暴露后新生大鼠海马区NLRP3炎性小体的激活 |
| 2.2 MCC950可能抑制经七氟烷暴露后新生大鼠海马区的细胞焦亡 |
| 2.3 MCC950可能抑制经七氟烷暴露后新生大鼠海马区炎性细胞因子的释放 |
| 2.4 七氟烷暴露可能引起新生大鼠海马区MAPK/STAT3信号通路的激活 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 六、参考文献 |
| 文献综述 全身麻醉药对发育期大脑的神经毒性影响因素、机制及干预措施 |
| 2.参考文献 |
| 附录 攻读硕士研究生期间的科研成果 |
| 致谢 |
（3）右美托咪定通过lncRNA-LOC102546895对老年大鼠术后认知功能障碍的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1 术后认知功能障碍概述 |
| 1.1 术后认知功能障碍的影响 |
| 1.2 术后认知功能障碍发病机制 |
| 1.3 术后认知功能障碍的治疗方法 |
| 2 右美托咪定概述 |
| 3 lncRNA概述 |
| 3.1 lncRNA对神经发育及功能的影响 |
| 3.2 lncRNA与术后认知功能障碍的关系 |
| 4 本课题研究目的及内容 |
| 第一部分 右美托咪定对POCD动物模型的影响 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠空间学习和记忆能力变化 |
| 3.2 大鼠海马组织形态学变化 |
| 3.3 炎症因子表达结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 大鼠海马组织转录组测序及分析 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 RNA质量 |
| 3.2 测序数据的质量评估及序列比对 |
| 3.3 Dex与 POCD差异表达的mRNA及功能预测 |
| 3.4 Dex与 POCD差异表达的lncRNA及功能预测 |
| 3.5 ce RNA分析结果 |
| 3.6 qRT-PCR验证测序数据 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 lncRNA-LOC102546895 在小胶质细胞中功能研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 敲低LOC102546895 后对小胶质细胞增殖的影响 |
| 3.2 小胶质细胞敲低LOC102546895 后细胞凋亡情况 |
| 3.3 小胶质细胞敲低LOC102546895后NPSA4 表达情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（4）基于线粒体自噬研究小建中汤抑制NLRP3炎症小体活化治疗抑郁症的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究目的 |
| 3 研究思路 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.中医郁病理论的源流与发展 |
| 1.1 秦汉时期 |
| 1.1.1 《黄帝内经》 |
| 1.1.2 《伤寒杂病论》 |
| 1.2 魏晋南北朝隋唐时期 |
| 1.3 宋金元时期 |
| 1.4 明清时期 |
| 1.5 近现代 |
| 2.抑郁症的病因病机 |
| 2.1 病因病机 |
| 2.1.1 五脏精气虚弱 |
| 2.1.2 体质偏颇 |
| 2.1.3 情志刺激 |
| 2.1.4 劳神过度 |
| 2.2 各家论点 |
| 2.2.1 肝气郁结 |
| 2.2.2 肺气郁结 |
| 2.2.3 脾虚 |
| 2.2.4 肝郁脾虚 |
| 2.2.5 胆失决断 |
| 2.2.6 肾阳虚 |
| 2.2.7 肝阳气虚 |
| 2.2.8 肾精不足 |
| 2.2.9 肝肾不足 |
| 2.2.10 “脑神”不用 |
| 3.抑郁症的发病机制 |
| 3.1 单胺类神经递质 |
| 3.2 下丘脑-垂体-肾上腺轴 |
| 3.3 神经可塑性 |
| 3.4 谷氨酸能失衡 |
| 3.5 线粒体假说 |
| 3.6 神经炎症反应 |
| 3.7 Micro RNA |
| 3.8 肠道微生态 |
| 4.本研究立题依据 |
| 4.1 抑郁症与神经炎症反应密切相关 |
| 4.2 NLRP3炎症小体活化是抑郁症的重要机制之一 |
| 4.3 线粒体自噬是调控NLRP3炎症小体的关键 |
| 4.4 抑郁症发病机制的线粒体自噬假说 |
| 4.5 抑郁症与脾虚密切相关 |
| 4.5.1 脾之生理为神志活动提供基础 |
| 4.5.2 抑郁症与脾虚 |
| 4.5.3 线粒体自噬水平低下可能为脾虚气化不足的生物学基础 |
| 4.6 肝脾不和是抑郁症的重要病机 |
| 4.6.1 脾虚肝郁 |
| 4.6.2 脾虚肝虚 |
| 4.7 小建中汤的选方依据 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 线粒体自噬对抑郁模型大鼠海马NLRP3炎症小体的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品及试剂 |
| 1.2.1 药品 |
| 1.2.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 糖水训练和蔗糖偏好率测试 |
| 2.2 CUMS大鼠抑郁模型制备 |
| 2.3 实验分组及给药 |
| 2.4 标本采集及制作 |
| 2.5 指标检测方法 |
| 2.5.1 行为学检测 |
| 2.5.2 ELISA检测 |
| 2.5.3 RT-PCR检测 |
| 2.5.4 Western-blot检测 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 行为学变化 |
| 3.1.1 体重变化 |
| 3.1.2 SPT变化 |
| 3.1.3 FST不动时间变化 |
| 3.2 MtDNA拷贝数变化 |
| 3.3 线粒体自噬相关指标含量的变化 |
| 3.3.1 线粒体自噬相关mRNA表达变化 |
| 3.3.2 线粒体自噬相关蛋白变化 |
| 3.4 NLRP3炎症小体相关指标变化 |
| 3.4.1 NLRP3 炎症小体m RNA表达变化 |
| 3.4.2 炎症因子mRNA表达变化 |
| 3.4.3 NLRP3炎症小体以及下游炎症因子蛋白水平变化 |
| 3.5 血清炎症因子变化 |
| 3.6 血清DA和5-HT水平变化 |
| 实验二 小建中汤抗抑郁研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品及试剂 |
| 1.2.1 药品 |
| 1.2.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 糖水训练和蔗糖偏好率测试 |
| 2.2 CUMS大鼠抑郁模型制备 |
| 2.3 实验分组及给药 |
| 2.4 标本采集及制作 |
| 2.5 指标检测方法 |
| 2.5.1 行为学检测 |
| 2.5.2 ELISA检测 |
| 2.5.3 SOD和 MDA检测 |
| 2.5.4 尼氏染色 |
| 2.5.5 透射电镜观察海马CA3区细胞超微结构 |
| 2.5.6 RT-PCR检测 |
| 2.5.7 Western-blot检测 |
| 2.5.8 免疫荧光 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 行为学变化 |
| 3.1.1 体重变化 |
| 3.1.2 SPT基线 |
| 3.1.3 OFT变化 |
| 3.1.4 FST变化 |
| 3.2 MtDNA拷贝数变化 |
| 3.3 海马区神经元形态学变化(附图1.1) |
| 3.4 海马区神经元超微结构变化(附图1.2) |
| 3.5 血清SOD和 MDA变化 |
| 3.6 线粒体自噬相关指标变化 |
| 3.6.1 线粒体自噬相关mRNA表达变化 |
| 3.6.2 线粒体自噬相关蛋白表达变化 |
| 3.7 NF-κB信号通路相关指标变化 |
| 3.7.1 NF-κB信号通路相关m RNA表达变化 |
| 3.7.2 NF-κB信号通路相关蛋白表达变化 |
| 3.8 NLRP3炎症小体相关指标变化 |
| 3.8.1 NLRP3 炎症小体相关m RNA表达变化 |
| 3.8.2 NLRP3炎症小体相关蛋白表达变化 |
| 3.9 血清炎症因子变化 |
| 3.10 血清DA、5-HT变化 |
| 实验三 小建中汤介导线粒体自噬抑制NLRP3炎症小体活化研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品及试剂 |
| 1.2.1 药品 |
| 1.2.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 糖水训练和蔗糖偏好率测试 |
| 2.2 CUMS大鼠抑郁模型制备 |
| 2.3 实验分组及给药 |
| 2.4 标本采集及制作 |
| 2.5 指标检测方法 |
| 2.5.1 行为学检测 |
| 2.5.2 RT-PCR检测 |
| 2.5.3 Western-blot检测 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 行为学变化 |
| 3.1.1 体重变化 |
| 3.1.2 FST变化 |
| 3.2 线粒体自噬相关指标变化 |
| 3.2.1 线粒体自噬相关mRNA表达变化 |
| 3.2.2 线粒体自噬相关蛋白表达变化 |
| 3.3 NLRP3炎症小体相关指标变化 |
| 3.3.1 NLRP3 炎症小体相关m RNA表达变化 |
| 3.3.2 NLRP3炎症小体相关蛋白表达变化 |
| 讨论 |
| 1.CUMS模型的选择 |
| 2.对照药氟西汀和激动剂雷帕霉素的选择 |
| 3.上调线粒体自噬对CUMS大鼠的作用 |
| 3.1 RAPA上调了CUMS大鼠线粒体自噬水平 |
| 3.2 上调线粒体自噬对CUMS大鼠行为学影响 |
| 3.3 上调线粒体自噬对CUMS大鼠线粒体DNA拷贝数的影响 |
| 3.4 上调线粒体自噬对CUMS大鼠NLRP3 炎症小体及炎症因子的影响. |
| 3.5 上调线粒体自噬对CUMS大鼠5-HT和 DA的影响 |
| 4.小建中汤治疗抑郁症的机制探讨 |
| 4.1 小建中汤对CUMS大鼠行为学影响 |
| 4.2 小建中汤对CUMS大鼠海马神经元形态的影响 |
| 4.2.1 尼氏染色 |
| 4.2.2 超微结构 |
| 4.3 小建中汤对CUMS大鼠线粒体自噬的影响 |
| 4.3.1 小建中汤对CUMS大鼠海马mt DNA拷贝数影响 |
| 4.3.2 小建中汤对CUMS大鼠血清SOD和 MDA的影响 |
| 4.3.3 小建中汤上调CUMS大鼠海马线粒体自噬水平 |
| 4.4 小建中汤对CUMS大鼠海马炎症的影响 |
| 4.4.1 小建中汤抑制CUMS大鼠TLR4/NF-κB信号通路活化 |
| 4.4.2 小建中汤抑制CUMS大鼠NLRP3 炎症小体通路活化 |
| 4.5 小建中汤对CUMS大鼠5-HT和 DA的影响 |
| 4.6 小建中汤通过介导线粒体自噬抑制NLRP3炎症小体活化 |
| 5.小建中汤健脾调肝治疗抑郁症作用探讨 |
| 5.1 小建中汤温健脾气、调摄阴阳 |
| 5.2 小建中汤生发肝气 |
| 5.3 小建中汤健脾调肝的生物学基础 |
| 结论 |
| 特色与创新性 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1 附图 |
| 1.1 实验二海马尼氏染色(200×) |
| 1.2 实验二海马超微结构 |
| 1.3 实验二NLRP3炎症小体通路蛋白表达(免疫荧光) |
| 2 动物实验伦理审查意见表 |
| 3 综述 NF-κB/NLRP3 信号通路在抑郁症及中药作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（5）PI3K/Akt通道在七氟烷后处理脑缺血糖尿病大鼠神经保护作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表文章 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| English Paper One |
| English Paper Two |
（6）西红花苷预处理保护急性高原缺氧大鼠脑海马神经元的SIRT1/PGC-1a机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1 高原低氧对脑神经影响 |
| 2 SIRT1/PGC-1A通路调控机制及低氧条件下的脑保护作用 |
| 3 西红花苷对脑神经的影响 |
| 4 科学问题及研究内容 |
| 5 研究流程图 |
| 6 研究内容及目标 |
| 第二章 西红花苷对急性高海拔低氧脑海马损伤模型的保护作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.2.2.1 Morris水迷宫检测 |
| 2.2.2.2 HE染色 |
| 2.2.2.3 透射电镜检测 |
| 2.2.2.4 Nissl染色 |
| 2.2.2.5 抗氧化指标 SOD, GSHPx, MDA 检测 |
| 2.2.2.6 免疫组织化学检测 |
| 2.2.2.7 Western Blot 实验检测蛋白表达 |
| 2.2.2.8 qRTPCR检测结果 |
| 2.2.2.9 TUNEL 凋亡检测 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 Morris水迷宫检测结果 |
| 2.3.2 HE染色结果 |
| 2.3.3 透射电镜观察海马细胞超微结构 |
| 2.3.4 Nissl染色结果 |
| 2.3.5 抗氧化SOD,GSHPx,MDA水平 |
| 2.3.6 Western blot检测结果 |
| 2.3.7 qRTPCR检测结果 |
| 2.3.8 免疫组织化学检测结果 |
| 2.3.9 TUNEL检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 西红花苷最佳剂量预处理急性高海拔低氧大鼠脑海马相关因子及凋亡的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 药物及试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 方法 |
| 3.2.4.1 Morris水迷宫检测 |
| 3.2.4.2 HE染色观察大鼠脑海马CA1神经元形态 |
| 3.2.4.3 Nissl染色观察 |
| 3.2.4.4 透射电镜观察大鼠脑海马超微结构 |
| 3.2.4.5 抗氧化指标SOD、GSHPx、MDA检测 |
| 3.2.4.6 RT-PCR检测两组脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 因子在m RNA水平表达 |
| 3.2.4.7 Western Blot检测两组脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 因子蛋白表达 |
| 3.2.4.8 用TUNEL法观察脑海马神经元凋亡 |
| 3.2.5 统计学分析方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 Morris水迷宫检测 |
| 3.3.2 HE染色观察大鼠脑海马CA1神经元病理变化 |
| 3.3.3 Nissl染色观察大鼠脑海马CA1 神经元病理变化 |
| 3.3.4 透射观察大鼠脑海马神经元超微结构 |
| 3.3.5 抗氧化指标SOD、GSHPx、MDA检测结果 |
| 3.3.6 RT-PCR检测两组脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 因子在mRNA水平表达 |
| 3.3.7 Wester blot检测两组脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 因子在蛋白水平表达 |
| 3.3.8 TUNTL检测各组大鼠脑海马CA1 区凋亡细胞结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 西红花苷对急性低氧条件下HT22细胞保护作用的研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 研究对象及主要试剂 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.3 研究方法 |
| 4.3.1 HT22细胞传代培养 |
| 4.3.2 西红花苷对HT22细胞在低氧条件存活率的测定 |
| 4.3.3 通过透射电镜检测西红花苷对HT22细胞在低氧条件下形态结构变化 |
| 4.3.4 WesternBlot检测西红花苷对HT22 细胞在低氧条件下SIRT1、PGC-1a、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白的表达 |
| 4.3.5 RTPCR检测西红花苷对HT22细胞在低氧条件下 SIRT1、PGC-1a、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白的表达 |
| 4.3.6 西红花苷对 HT22 细胞在低氧条件下 SOD、GSHPx、MDA 水平的检测 |
| 4.3.7 西红花苷对HT22细胞低氧条件凋亡的影响 |
| 4.3.8 统计学处理 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 西红花苷对低氧 HT22 细胞存活率的检测 |
| 4.4.2 透射电镜示各组HT22细胞超微结构 |
| 4.4.3 Wester blot 检测西红花苷对低氧刺激12小时 HT22 细胞相关蛋白表达影响 |
| 4.4.4 Wester blot 检测西红花苷对低氧刺激 24 小时 HT22相关蛋白表达影响 |
| 4.4.5 qRT-PCR检测西红花苷对低氧12 小时HT22 细胞SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3m RNA水平表达影响 |
| 4.4.6 qRT-PCR检测西红花苷对低氧24 小时HT22 细胞SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA水平表达影响 |
| 4.4.7 西红花苷对低氧12 小时HT22 细胞抗氧化指标SOD、GSHPX、MDA检测结果 |
| 4.4.8 西红花苷对低氧24 小时HT22 细胞抗氧化指标SOD、GSHPX、MDA检测结果 |
| 4.4.9 西红花苷对低氧12小时HT22细胞凋亡结果 |
| 4.4.10 西红花苷对低氧 24 小时HT22细胞凋亡检测 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 全文讨论 |
| 参考文献 |
| 博士学位期间科研成果简介 |
| 致谢 |
| 附录 A(综述1)藏红花活性成分对神经系统疾病的作用 |
| 参考文献 |
（7）氟比洛芬酯对烧伤SD大鼠早期认知功能的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 研究背景 |
| 研究意义 |
| 研究内容及方法 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.1 烧伤 |
| 1.2 严重烧伤对认知的影响 |
| 1.2.1 烧伤治疗过程中麻醉对认知障碍的影响 |
| 1.2.2 烧伤引起的炎症对认知障碍的影响 |
| 1.3 烧伤疼痛管理 |
| 1.3.1 疼痛管理的问题 |
| 1.3.2 烧伤疼痛的治疗 |
| 1.3.3 未来的疼痛目标和考虑因素 |
| 1.4 本研究选择氟比洛芬酯的原因 |
| 第二部分 氟比洛芬酯对烧伤大鼠早期认知和炎症的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 材料与方法 |
| 2.3.1 实验试剂与仪器 |
| 2.3.2 实验动物 |
| 2.4 实验数据统计 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 HE染色判断模型 |
| 2.5.2 疼痛行为学改变 |
| 2.5.3 Morris水迷宫结果 |
| 2.5.4 各组大鼠皮肤组织病理结果 |
| 2.5.5 各组TNF-α、CINC-1、IL-6和IL-1β表达结果 |
| 2.5.6 各组大鼠海马组织病理结果 |
| 2.5.7 各组大鼠海马组织凋亡结果 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 结论 |
| 第三部分 氟比洛芬酯影响烧伤大鼠早期认知的分子机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 技术路线图 |
| 3.3 材料与方法 |
| 3.3.1 实验试剂与仪器 |
| 3.3.2 实验动物 |
| 3.4 实验数据统计 |
| 3.5 结果 |
| 3.5.1 HE染色判断模型 |
| 3.5.2 各组大鼠海马组织基因mRNA表达水平 |
| 3.5.3 各组大鼠海马组织BDNF蛋白的表达 |
| 3.5.4 各组大鼠海马组织caspase3、p38和p-p38蛋白的表达 |
| 3.6 讨论 |
| 3.7 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 术后认知功能障碍的研究进展 |
| 1. POCD的临床诊断 |
| 2. POCD的发病机制与相关学说 |
| 2.1 炎症反应 |
| 2.2 中枢胆碱能系统功能降低 |
| 2.3 突触修饰假说 |
| 2.4 蛋白异常学说 |
| 3. POCD与循环标致物 |
| 3.1 炎性因子 |
| 3.2 S-100蛋白 |
| 3.3 神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE) |
| 3.4 脑源性神经营养因子(Brain-derived neuron factor, BDNF) |
| 3.5 C反应蛋白(C-reaction protein, CRP) |
| 3.6 载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)等位基因 |
| 3.7 微RNA(microRNA, miRNA) |
| 3.8 神经胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP) |
| 3.9 胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1.IGF-1) |
| POCD的影响因素 |
| 1. 疼痛与镇痛 |
| 2. 麻醉药 |
| 3. 麻醉方式 |
| 4. 年龄 |
| 5. 手术因素 |
| 6. 麻醉深度 |
| 7. 其他因素 |
| 治疗与预防 |
| 1. 右美托咪定 |
| 2. 利多卡因 |
| 3. 乌司他丁 |
| 4. 磷酸肌酸钠 |
| 5. 环氧酶抑制剂 |
| 6. 中医药方面 |
| 小结 |
| 参考文献 |
（8）低氧预处理和七氟醚预处理对成年大鼠短暂性全脑缺血的保护作用及对Jun-B mRNA表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文对照 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 缺血再灌注损伤 |
| 1.2 预处理 |
| 1.3 细胞凋亡与基因转录 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验动物分组与模型制作 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 大鼠的存活率 |
| 3.2 FJB荧光染色 |
| 3.3 qPCR检测 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 低氧预处理对tGCI大鼠海马神经细胞有保护作用 |
| 4.2 七氟醚预处理对tGCI大鼠海马神经细胞有保护作用 |
| 4.3 低氧预处理+七氟醚预处理增强了神经保护作用 |
| 4.4 探讨三种预处理方式发挥神经保护作用的机制 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 脑缺血再灌注损伤的防治方法、机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）P38MAPK抑制剂、雌二醇和TPX2对痴呆鼠模型海马神经细胞损害的保护作用及认知功能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 中文部分 |
| 第一部分 雌二醇治疗对小鼠阿尔茨海默病模型海马神经元发生及认知功能障碍的早期保护作用 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第二部分 P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡的保护作用及学习记忆能力的影响 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第三部分 TPX2对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用机制的研究 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文部分 |
| Chronic estradiol administration during the early stage ofAlzheimer's disease pathology rescues adult hippocampalneurogenesis and ameliorates cognitive deficits in Ap"2 mice |
| Introduction |
| Materials and Methods |
| Results |
| Discussion |
| Summary |
| Reference |
| Figure legends |
| The Effect of P38MAPK Inhibitors on Hippocampus Apoptosisand Learning Memory Ability in Vascular Dementia Rat |
| 1. Introduction |
| 2. Materials and Methods |
| 3. Results |
| 4. Discussion |
| Conflict of Interests |
| Authors, Contribution |
| Reference |
| Figure legend |
| Protective Effects and Mechanism Researches of TPX2 onNeurocytes Apoptosis of Rats with Alzheimer's Disease Model |
| Introduction |
| Materials and methods |
| Results |
| Discussion |
| References |
（10）星状神经节阻滞通过SIRT1/NF-κB信号通路改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词简表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要试剂和药品 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 |
| 2.2 实验方法和步骤 |
| 2.2.1 动物实验 |
| 2.2.2 细胞实验 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 动物实验 |
| 3.1.1 星状神经节阻滞对血管性痴呆大鼠空间学习和记忆能力的影响. |
| 3.1.2 星状神经节阻滞对血管性痴呆大鼠海马CA1 区神经元形态学变化的影响 |
| 3.1.3 星状神经节阻滞对血管性痴呆大鼠海马区氧化应激水平及外周血炎性细胞因子水平的影响 |
| 3.1.4 星状神经节阻滞对血管性痴呆大鼠海马区SIRT1 蛋白表达的影响 |
| 3.1.5 星状神经节阻滞对血管性痴呆大鼠海马区NF-κB及凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.2 细胞实验 |
| 3.2.1 氧糖剥夺再灌注处理不同时间对海马神经元的影响 |
| 3.2.2 SIRT1 抑制剂EX527 及激动剂SRT1720 预处理对海马神经元活力、LDH释放量及凋亡率的影响 |
| 3.2.3 SIRT1 抑制剂EX527 及激动剂SRT1720 预处理对海马神经元SIRT1蛋白及凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
四、低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响（论文参考文献）
- [1]高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的保护作用研究[D]. 常宇飞. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]MCC950对七氟烷所致的新生大鼠大脑神经毒性的保护作用及机制[D]. 魏琼. 湖北医药学院, 2021(01)
- [3]右美托咪定通过lncRNA-LOC102546895对老年大鼠术后认知功能障碍的作用机制研究[D]. 邓福谋. 南昌大学, 2020(08)
- [4]基于线粒体自噬研究小建中汤抑制NLRP3炎症小体活化治疗抑郁症的机制[D]. 王萌. 成都中医药大学, 2020(02)
- [5]PI3K/Akt通道在七氟烷后处理脑缺血糖尿病大鼠神经保护作用的研究[D]. 张华朋. 山东大学, 2020(10)
- [6]西红花苷预处理保护急性高原缺氧大鼠脑海马神经元的SIRT1/PGC-1a机制研究[D]. 张晓岩. 青海大学, 2020(01)
- [7]氟比洛芬酯对烧伤SD大鼠早期认知功能的影响及其机制研究[D]. 黄海金. 南昌大学, 2020(08)
- [8]低氧预处理和七氟醚预处理对成年大鼠短暂性全脑缺血的保护作用及对Jun-B mRNA表达的影响[D]. 王道合. 青海大学, 2020(02)
- [9]P38MAPK抑制剂、雌二醇和TPX2对痴呆鼠模型海马神经细胞损害的保护作用及认知功能的影响[D]. 梁克山. 山东大学, 2019(02)
- [10]星状神经节阻滞通过SIRT1/NF-κB信号通路改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍的研究[D]. 姚鹏. 南昌大学, 2019(01)