一、蛙皮素对新生兔胃肠形态及细胞增殖的调节研究（论文文献综述）
付华霞[1]（2021）在《177Lu标记寡聚苯乙炔修饰RM26的体内外性质研究》文中研究说明目的:胃泌素释放肽受体（GRPR）在多种恶性肿瘤中过表达,常见的包括前列腺癌和肺癌。据研究报道,GRPR拮抗剂的生物学性质优于激动剂,因此GRPR拮抗剂成为GRPR阳性肿瘤的研究热点。然而由于拮抗剂的细胞内化水平较低,可能降低药物的治疗效果。本研究引入了可增强内化能力的穿透性寡聚苯乙炔（OPE）,通过联合靶向GRPR的拮抗剂RM26,以实现肿瘤细胞内化及细胞靶向。再通过连接螯合剂NOTA实现放射性核素177Lu及68Ga的标记。本项目进一步研究了放射性药物177Lu-NOTA-OPEs-RM26的体外稳定性,其与GRPR阳性肿瘤细胞的相互作用情况,该药物在荷瘤鼠中的肿瘤摄取和体内分布情况,其对荷瘤鼠的治疗作用。同时,本项目利用Micro-PET/CT探索了68Ga标记NOTA-OPE-2-RM26在荷瘤鼠中的肿瘤摄取及体内分布情况。方法:（1）多步合成NOTA-OPEs-RM26,然后使用超高效液相色谱-质谱（UPLC-MS）表征、HPLC纯化目标产物。（2）利用放射性核素177Lu标记NOTA-OPEs-RM26,探索其最优标记条件,并测定177Lu-NOTA-OPEs-RM26在新生牛血清（NBCS）、DMEM-H细胞培养基（无血清）和生理盐水中的稳定性。（3）研究人前列腺癌细胞PC3对177Lu-NOTA-OPEs-RM26的摄取、内化和特异性结合能力;研究人肺腺癌细胞A549和人肺癌淋巴结转移细胞H292对177Lu-NOTA-OPEs-RM26的结合能力。（4）采用SPF级别BALB/c裸鼠建立PC3荷瘤鼠模型,将3.7 MBq的68Ga-NOTA-OPE-2-RM26经尾静脉注入PC3荷瘤鼠体内（n=1）,1小时后行Micro-PET/CT显像。（5）将0.37 MBq的177Lu-NOTA-OPE-1-RM26和177Lu-NOTA-OPE-2-RM26分别沿尾静脉注入PC3荷瘤鼠体内（n=2）,于2小时和24小时行生物分布;将0.37 MBq的177Lu-NOTA-OPE-1-RM26和177Lu-NOTA-OPE-2-RM26分别经尾静脉注入A549荷瘤鼠体内（n=1）,于4小时和50小时行生物分布。（6）将3.7 MBq的177LuCl3和177Lu-NOTA-OPE-2-RM26分别原位注射入PC3荷瘤鼠的肿瘤内（n=5）,研究此放射性药物的治疗作用。结果:（1）采用多步合成方法成功合成了NOTA-OPEs-RM26,使用HPLC成功分离纯化目标产物,并用UPLC-MS表征确定其为正确的目标产物。（2）确定了177Lu-NOTA-OPEs-RM26的最佳标记反应条件:醋酸钠（0.5 M,p H 5.5）缓冲体系、温度80℃、时间1小时;通过薄层层析（TLC）检测放射性化学纯度均超过99%。上诉放射性标记物于室温下放置72小时后,在NBCS、DMEM-H细胞培养基（无血清）和生理盐水中的放射性化学纯度均大于99%。（3）177Lu-NOTA-OPEs-RM26的PC3细胞摄取实验:（1）细胞膜表面结合均先达到最大值,然后随着时间增加而降低;（2）细胞内化剂量随着时间增加逐渐增加;（3）细胞总摄取量在6小时达到最大值,并基本保持不变,此时主要是细胞膜表面结合转化为细胞内化。PC3细胞内化实验:24小时后,没有引入OPE的对照组177Lu-NOTA-RM26的细胞内化达到了28%,而177Lu-NOTA-OPE-1-RM26和177Lu-NOTA-OPE-2-RM26的细胞内化分别达到了30%和39%,表明引入OPE分子提高了化合物的细胞内化能力。PC3细胞特异性结合实验:使用1000倍量的标准人GRPR激动剂蛙皮素（BBN）多肽作为封闭剂,实验结果表明引入OPE分子并没有改变化合物的特异性结合能力。肺癌细胞结合实验:A549细胞对177Lu-NOTA-OPEs-RM26具有较高的细胞结合,而H292细胞对其具有较低的细胞结合。（4）68Ga-NOTA-OPE-2-RM26在PC3荷瘤鼠中的Micro-PET/CT显像表明放射性剂量主要集中于肝,而在肿瘤部位没有富集。（5）PC3和A549荷瘤鼠生物分布显示:177Lu-NOTA-OPE-1-RM26主要富集于肝、脾、肺,而177Lu-NOTA-OPE-2-RM26主要富集于肺,两者均未在肿瘤处富集。（6）PC3荷瘤鼠的177Lu-NOTA-OPE-2-RM26治疗实验表明:177Lu-NOTA-OPE-2-RM26具有一定的治疗作用。结论:本研究成功合成了两种NOTA-OPEs-RM26化合物并实现177Lu和68Ga的标记。体外细胞实验表明引入OPE分子可以增加化合物的内化量,同时保持化合物的特异性结合能力。体内动物实验表明引入OPE分子降低了标记化合物的溶解度,一定程度上影响了其对目标肿瘤的体内特异性靶向。本研究的设计思路有利于帮助开发具有高亲和力、高内化的拮抗剂类诊断及治疗一体化的新型靶向放射性药物。
何晓芳[2]（2019）在《慢性热应激对肉鸡采食调节机制的影响及牛磺酸缓解作用研究》文中提出全球气候变化对农业和畜牧业生产的影响在全球都有目共睹,尤其在发展中国家影响更加突出。温热环境因素包括温度、湿度、太阳辐射、风速等,这些因素以多种方式影响动物生产;其中,高环境温度,高太阳辐射形成的热应激对散热性能差的肉鸡生长、生殖、代谢、和免疫应答等不利影响最为严重。尤其在热带及亚热带地区,热应激已成为肉鸡生产的主要限制因素,给当地畜牧业造成巨大的经济损失。食欲下降、采食量降低是热应激条件下肉鸡的最主要的不利作用,但对其机制尚不完全清楚。牛磺酸具有多种生物学功能,在水产饲料中常用作诱食剂,并有报道证明可用于缓解动物热应激,但牛磺酸对热应激条件下肉鸡采食行为的影响机制尚未明确。因此,研究慢性热应激对肉鸡采食调节的影响及牛磺酸缓解作用具有重要意义。1.慢性热应激对肉鸡生产性能和消化器官发育的影响试验一:选取144只体重相近（1.28±0.05 kg）的28日龄肉鸡随机分为3个处理组:对照组（NC,22℃）、热应激组（HS,32℃）和采食配对组（PF,22℃,采食量与热应激等同）。每组6个重复,每个重复8只鸡。试验期间从28 d-42 d,持续14 d,结果显示,HS组肉鸡的泄殖腔温度在28 d、30d、35d及42 d四个时间点均显着升高（P<0.05）,HS组28-35 d、35-42 d、28-42 d的平均采食量（ADFI）和平均日增重（ADG）均显着下降（P<0.05）,28-35 d和28-42 d的料重比（F/G）上升（P<0.05）。此外,与HS相比,PF组28-42 d的ADG显着增加（P<0.001）,35-42 d的F/G呈显着下降趋势（P=0.062）。和NC组相比,热应激7 d显着降低了十二指肠和回肠的相对重量,但对肠道相对长度无显着影响;热应激14 d显着增加了腺胃和十二指肠的相对重量（P<0.05）,同时十二指肠、空肠及回肠的相对长度均显着增加（P<0.05）。与HS组相比,热应激7 d时,PF组的回肠相对重量显着增加（P<0.05）;热应激14 d时,PF组十二指肠的相对重量显着降低（P<0.05）,而十二指肠、空肠及回肠的相对长度均显着降低（P<0.05）。和NC组相比,热应激7d显着降低了十二指肠的VH/CD、空肠及回肠的VH和VH/CD,显着增加空肠和回肠的CD;热应激14 d显着降低空肠的VH/CD。与HS组相比,热应激7d时,PF组显着增加了十二指肠、空肠及回肠的VH/CD,显着降低了空肠的CD;热应激14 d时,PF组显着增加空肠的VH和CD显着增加。结果表明,慢性热应激造成肉鸡的肠道形态受损,降低肠道绒毛高度,增加隐窝深度,从而影响肠道功能正常发挥,降低其生产性能。2.慢性热应激对肉鸡胃肠激素、采食相关基因、味觉受体及AMPK通路表达的影响试验设计同试验一。结果显示,相比于NC组,热应激7 d显着提高了（P<0.05）肉鸡血清中CCK和ghrelin的含量水平。与HS组相比,PF组血清胃肠激素CCK和ghrelin分泌的影响不显着。相比于NC组,热应激7 d显着提高了（P<0.05）肉鸡十二指肠黏膜SS、ghrelin、CCK和PYY的分泌,空肠黏膜SS和ghrelin的分泌,回肠黏膜ghrelin和CCK的分泌;热应激14 d显着提高了（P<0.05）肉鸡十二指肠黏膜SS和PYY的分泌,空肠黏膜上SS和ghrelin的分泌,回肠黏膜上SS和PYY的分泌。热应激7d显着降低了（P<0.05）胰腺中胰蛋白酶的活性,增加了（P<0.05）空肠食糜中胰蛋白酶的活性,降低了（P<0.05）空肠食糜中脂肪酶的活性;热应激14 d显着降低了（P<0.05）胰腺中淀粉酶和脂肪酶,显着增加了（P<0.05）十二指肠和空肠食糜上胰蛋白酶的活性。热应激7 d降低了（P<0.05）十二指肠黏膜上的麦芽糖酶活性和空肠黏膜上的淀粉酶活性;热应激14 d升高了（P<0.05）空肠黏膜上Na+/K+-ATP酶等活性。热应激14 d提高（P<0.05）了肉鸡血浆中Val和Ile支链氨基酸水平。热应激14 d降低了空肠中PCNA的数量（P<0.05）。相比于NC组,热应激7 d显着上调了（P<0.05）十二指肠,空肠及回肠黏膜ghrelin的mRNA表达量,显着上调了（P<0.05）空肠黏膜CCK的mRNA表达量;热应激14 d显着上调了（P<0.05）十二指肠黏膜CCK,ghrelin,T1R1和T1R3的mRNA表达量,显着提高了（P<0.05）空肠黏膜T1R1和T1R3的mRNA表达量,以及回肠黏膜CCK的mRNA表达量。相比NC组,在热应激14 d时,PF组显着下调了（P<0.05）空肠黏膜CCK的mRNA表达量。与HS组相比,热应激7 d时,PF组空肠黏膜CCK和ghrelin及回肠黏膜的ghrelin的mRNA表达量显着下调（P<0.05）;热应激14 d时,PF组十二指肠黏膜ghrelin和T1R1,空肠黏膜T1R3及回肠黏膜CCK的mRNA表达量显着下调（P<0.05）。热应激7d对肠道黏膜AMPKα1、LKB1和HIF-1α的mRNA的表达量无显着影响;热应激14 d显着上调了（P<0.05）十二指肠和回肠黏膜HIF-1α的mRNA表达量,以及空肠黏膜AMPKα1、LKB1和HIF-1α的mRNA表达量。与HS组相比,热应激7 d时,PF组十二指肠黏膜LKB1的mRNA表达量显着增加（P<0.05）;热应激14 d时,PF组十二指肠和回肠黏膜HIF-1α及空肠黏膜LKB1和HIF-1α的mRNA表达量显着下降。WB结果显示,相比NC组,热应激7 d显着上调空肠黏膜p-AMPKα和p-LKB1的磷酸化水平;热应激14 d上调空肠黏膜p-LKB1的磷酸化水平（P<0.05）。与HS组相比,热应激7 d时,PF组空肠黏膜p-AMPKα的磷酸化水平上调（P<0.05）;热应激14 d时,PF组空肠黏膜p-LKB1的磷酸化水平上调（P<0.05）。结果表明,热应激导致肠道内饱感激素过多分泌,饱感激素基因及味觉受体基因过度表达,PCNA数量降低,细胞凋亡数量增多,机体内氨基酸稳态破坏,肠道内缺氧导致低氧诱导因子上调,营养物质缺乏,能量负平衡,激活AMPK通路。3.慢性热应激对肉鸡下丘脑采食相关基因及转录组水平差异基因的影响试验设计同试验一。结果显示,热应激7 d显着升高了血清中CORT水平（P<0.05）;热应激14 d则显着提高了肉鸡头部表面温度（P<0.05）,热应激14 d对下丘脑的ROS水平无显着影响。热应激14 d显着增加了（P<0.05）血清中FT4和FT3的水平,显着下调了（P<0.05）促食欲基因NPY mRNA的表达水平。此外,相比对照组,PF组提高了（P<0.05）AgRP和POMC mRNA的表达水平。热应激14 d对下丘脑AMPKα1和LKB1 mRNA的表达水平无显着影响。热应激14 d降低了促食欲基因NPY蛋白表达水平,同时与NC组相比,PF组增加了厌食基因POMC蛋白表达水平。基于转录组学技术发现,热应激14d显着下调了钠离子转运载体、神经元细胞分化、中枢神经系统发育等相关基因的下调,同时上调厌食基因的表达,综合上述因素,使得肉鸡食欲减弱。4.饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡生产性能、胃肠激素及采食相关基因表达的影响试验二:选取144只体重相近（1.10±0.02 kg）的28日龄肉鸡随机分为3个处理组:对照组（NC）,饲养温度22℃,饲喂基础日粮;热应激（HS）组,饲养温度32℃,饲喂基础日粮;热应激+牛磺酸（HT）组,饲喂基础日粮+0.5%牛磺酸,每组6个重复,每个重复8只鸡。试验时间从28-42 d,持续时间14 d。结果显示:相比NC组,热应激显着降低了肉鸡28-35 d,35-42 d和28-42 d的ADFI（P<0.05）,显着降低了肉鸡28-35 d和28-42 d的ADG（P<0.05）,同时显着增加了 28-35 d和35-42 d的F/G（P<0.05）。与HS组相比,HT组的ADFI、ADG及F/G无显着差异。与NC 组相比,HT 组的 28-35 d,35-42 d 和 28-42 d 的 ADFI 和 28-35 d 和 28-42 d 的ADG显着下降（P<0.05）。热应激显着升高了肉鸡28 d、35 d及42 d的泄殖腔温度。热应激7d降低了肉鸡肌胃、十二指肠和回肠的相对重量（P<0.05）;增加了空肠和回肠的相对长度（P<0.05）;热应激14 d显着增加了肉鸡腺胃和十二指肠的相对重量（P<0.05）,增加了十二指肠、空肠和回肠的相对长度（P<0.05）。热应激7d显着降低了（P<0.05）十二指肠和空肠中的VH和VH/CD、回肠的VH/CD,增加了（P<0.05）空肠和回肠的CD;热应激14 d显着降低了（P<0.05）空肠的VH和VH/CD、回肠的VH和CD,增加了（P<0.05）十二指肠的CD。与HS组相比,热应激7 d时,HT组显着提高了（P<0.05）十二指肠VH和VH/CD、空肠的VH/CD、降低了（P<0.05）空肠和回肠的CD;热应激14 d时,HT组增加了（P<0.05）空肠的VH和VH/CD、降低了（P<0.05）十二指肠的VH/CD及回肠的VH。热应激7d增加了血清中饱感激素CCK、ghrelin及PYY的水平（P<0.05）;热应激14 d显着增加了血清中饱感激素PYY的水平（P<0.05）。热应激7 d显着增加了（P<0.05）肉鸡十二指肠黏膜中SS、CCK和PYY及回肠中ghrelin的分泌;热应激14 d显着增加了肉鸡十二指肠黏膜上ghrelin和PYY,空肠和回肠中SS的分泌（P<0.05）。相比NC组,热应激7 d显着上调了十二指肠黏膜CCK、空肠T1R1和T1R3及回肠黏膜CCK、ghrelin和T1R3 mRNA的表达水平（P<0.05）;热应激14 d上调了十二指肠黏膜CCK和ghrelin,空肠黏膜CCK和T1R1 mRNA的表达水平（P<0.05）。与HS组相比,在热应激7 d时,HT组显着下调空肠黏膜T1R3及回肠黏膜ghrelin和T1R1 mRNA的表达水平（P<0.05）;热应激14 d时,HT组下调了十二指肠和空肠黏膜CCK mRNA的表达水平（P<0.05）,上调了回肠黏膜ghrelin mRNA的表达水平（P<0.05）。热应激7 d显着上调了空肠黏膜LKB1和HIF-1α,回肠黏膜AMPKα1、LKB1和HIF-1αmRNA的表达水平（P<0.05）。与HS组相比,热应激7 d时,HT组显着上调了十二指肠黏膜AMPKα1和LKB1 mRNA的表达水平（P<0.05）;热应激14 d时,HT组显着上调了十二指肠黏膜AMPKα1 mRNA的表达水平（P<0.05）。结果表明,热应激造成肉鸡生产性能下降,肠道形态受损,饱感激素过度分泌,饱感激素的基因表达上调,添加牛磺酸对于生产性能无显着缓解效果,对损伤肠道形态有一定程度的改善作用,对采食相关基因和味觉受体的表达无明显下调作用。5.饲粮中添加牛磺酸对热应激肉鸡的血清内分泌激素水平、下丘脑形态及采食相关基因表达的影响试验设计同试验二。结果显示,相比NC组,热应激7 d显着升高（P<0.05）血清中CORT、NE和T4水平;热应激14 d显着增加了（P<0.05）血清中NE水平。与HS组相比,热应激7d时,HT组降低了血清中leptin水平,增加了 T3水平（P<0.05）。和NC组相比,热应激7 d显着下调了（P<0.05）促食欲基因AgRP mRNA的表达水平,上调了（P<0.05）厌食基因POMC mRNA的表达水平;热应激14d上调了（P<0.05）LEPR mRNA的表达水平,对NPY、AgRP、POMC mRNA无显着影响。与HS组相比,HT组在热应激7 d和14 d时分别下调了 POMC和LEPR mRNA的表达水平。总之,热应激导致肉鸡血清内分泌激素变化,促食欲基因下调,厌食基因上调,添加牛磺酸降低慢性热应激肉鸡血清瘦素水平,下调厌食基因。综上所述,本研究得出如下结论:（1）慢性热应激降低肉鸡的体增重和采食量,阻碍消化器官的发育,损害肠道的形态,降低肠道绒毛高度,隐窝深度加深,增加肠道上皮的细胞凋亡数,减少肠道上皮细胞PCNA数量,导致肠道消化和吸收功能受损。（2）慢性热应激可增加肉鸡血清中胃肠激素水平及血浆中Val和Ile支链氨基酸水平,影响肠道消化酶的活性,上调肠道饱感激素、味觉受体及HIF-1α基因的表达水平,使得肉鸡采食下降,肠道能量负平衡,激活AMPK通路。（3）慢性热应激可增加肉鸡血清中皮质酮和甲状腺激素的水平,升高了肉鸡头部表面温度,改变下丘脑的完整性,下调下丘脑促食欲基因NPY的表达,上调下丘脑厌食基因的表达,降低肉鸡食欲。（4）饲粮中添加牛磺酸对热应激肉鸡的生产性能下降无明显改善,在一定程度上加剧肠道饱感激素过量分泌,对食欲无明显刺激作用,但添加牛磺酸对热应激造成的肠道形态损伤有一定的缓解效果。
陈凯[3]（2018）在《黄连解胰汤通过抑制肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化介导抗胰腺癌的作用及其机制》文中进行了进一步梳理胰腺癌恶性程度高,治疗效果差,寻找新的治疗手段,是临床上亟待解决的课题。而炎症在胰腺癌恶性进展中扮演着了重要角色。针对该特点,我们以经典方剂黄连解毒汤（黄连、黄芩、黄柏、栀子）为基础,设计了黄连解胰汤方剂（Huang-Lian-Jie-Yi-Tang,HLJYT）。该方剂由黄连、黄芩、黄柏、栀子、柴胡配伍而成,具有清化湿热、泻火解毒的功效。在临床应用中该方具有一定抗肿瘤作用并能改善胰腺癌患者的临床症状。为了探明黄连解胰汤方剂的作用及其机制,本论文通过一系列体外、体内实验,研究了黄连解胰汤对胰腺癌细胞生长转移的影响,并通过基因芯片和生物信息学分析,探讨了黄连解胰汤抗肿瘤的分子机制。第一部分 黄连解胰汤对胰腺癌细胞生长及迁移的影响目的:中医学理论认为,大多数胰腺癌患者以“湿热”为主要证候。临床应用显示,具有清热解毒功效的黄连解胰汤可改善胰腺癌患者的临床症状。本部分旨在研究黄连解胰汤在体外是否能抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长和迁移。方法:应用黄连解胰汤汤剂灌胃及腹主动脉取血法,制备大鼠黄连解胰汤含药血清以及对照血清,作为体外细胞实验用药;应用MTT法观察黄连解胰汤含药血清对PANC-1细胞的生长的作用;应用划痕实验观察黄连解胰汤含药血清对PANC-1细胞的迁移的作用。结果:MTT实验显示黄连解胰汤含药血清对PANC-1细胞体外生长无明显的效应;但划痕实验表明黄连解胰汤含药血清可有效抑制PANC-1细胞的迁移。结论:本部分研究结果发现,虽然黄连解胰汤含药血清对胰腺癌细胞生长并无直接的抑制作用,但可以抑制胰腺癌细胞的迁移能力。第二部分 黄连解胰汤对胰腺癌移植瘤生长的作用目的:本部分拟探讨黄连解胰汤在体内是否能影响裸鼠胰腺癌原位移植瘤的生长。方法:应用水煎剂法制备黄连解胰汤汤剂,作为动物实验用药;应用尾静脉注射二丁基二氯化锡（dibutyltindichloride,DBTC）技术建立裸鼠慢性炎症模型;采用胰腺原位包膜下注射PANC-1细胞悬液构建裸鼠胰腺原位移植瘤模型,及小动物活体成像Luminex技术检测裸鼠体内移植瘤萤光强度,评价移植瘤的生长;剥离瘤体测量并称重。应用免疫组化检测胰腺癌移植瘤组织标本的Ki-67、CD68、CD163的表达。结果:黄连解胰汤抑制胰腺癌移植瘤生长,并且这种抑制作用在具有炎症基础的模型中更为显着;黄连解胰汤抑制肿瘤组织Ki-67表达水平,以及巨噬细胞浸润。结论:本部分研究证实黄连解胰汤能够减少肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）浸润,提示黄连解胰汤可能通过重组胰腺癌的免疫微环境,发挥抗肿瘤作用。第三部分 黄连解胰汤对肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化和血管生成的作用及机制目的:研究表明,肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）更多地类似于M2型巨噬细胞,其释放的细胞因子、趋化因子以及生长因子等涉及肿瘤血管生成及肿瘤细胞浸润转移。本部分旨在研究黄连解胰汤对肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化和血管生成的作用。方法:通过Transwell小室建立巨噬细胞与PANC-1细胞的共培养模型;应用流式细胞术,检测巨噬细胞表面标志物;采用基因芯片和生物信息学方法,检测及分析巨噬细胞的基因表达谱;通过体外血管生成实验检测巨噬细胞条件培养基对体外血管生成的影响结果:黄连解胰汤含药血清可在体外抑制M2型肿瘤相关巨噬细胞的分化;基因芯片及生信分析结果显示黄连解胰汤含药血清处理影响巨噬细胞多个基因表达及多条信号通路的活化,涉及与M2型巨噬细胞分化相关的MAPK信号通路、Notch信号通路、WNT信号通路、JAK/STAT信号通路等;体外血管生成实验显示,巨噬细胞条件培养基（macrophage conditioned medium,MCM）促进血管生成;黄连解胰汤方处理组,肿瘤组织标本中CD34+血管内皮细胞丰度下降、微血管密度（microvessel density,MVD）降低。结论:本部分研究证实黄连解胰汤通过抑制M2型巨噬细胞分化,减少TAMs浸润,调节胰腺癌肿瘤微环境,进而抑制肿瘤血管生成。
桂红兵[4]（2018）在《日粮精料水平对瘤胃上皮生长的影响及调节作用研究》文中提出反刍动物瘤胃微生物发酵产生的短链脂肪酸（SCFA）是反刍动物主要的能量来源,可提供机体所需能量的60-80%;SCFA更是调节生命活动的信号因子。研究表明日粮精料水平影响瘤胃上皮的生长,但其中的机理不完全清楚。本论文旨在研究日粮精料水平对瘤胃上皮细胞增殖和细胞凋亡的影响及其机制。第一章日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞生长的影响及SCFA和pH的作用12只山羊随机分成低精料组（LC,n=6）和中等精料组（MC,n=6）,饲喂粗料分别添加10%与35%精料的两种日粮。实验期间,山羊于每日的8:00与18:00饲喂,且自由饮水。实验进行21天后,山羊在晨饲后6小时屠宰,采集瘤胃液及瘤胃上皮样品。体外实验选取8只健康山羊,屠宰采集瘤胃上皮,胰蛋白酶消化获得瘤胃上皮细胞后进行原代培养,待24 h细胞附着后,分别接受以下处理:pH7.4、pH 6.8、pH7.4+SCFA（20 mM SCFA）与pH6.8+SCFA处理。处理24h小时,收集细胞待检。采用气相色谱法测定瘤胃内挥发性脂肪酸（SCFA）含量,用组织切片法光镜观察瘤胃上皮各层层数,细胞数量,大小和体积变化。流式细胞术检测瘤胃上皮细胞周期变化,Tunel法检测瘤胃上皮细胞凋亡,Real-time PCR法检测基因表达。结果显示:与LC组山羊相比,MC组屠宰时瘤胃液内SCFA的含量显着升高,而瘤胃液的pH值显着低于LC组。MC组山羊瘤胃上皮棘突层和颗粒层细胞密度显着升高,MC组山羊瘤胃上皮棘突层和颗粒层细胞层数有升高的趋势,而LC组与MC组之间基底层细胞层数和细胞数量差异不显着。此外,增加日粮精料含量促进山羊瘤胃上皮中细胞增殖相关基因（cyclinA,cyclin Bl,cyclin D1,cyclin E1,CDK1,CDK2,CDK4 和CDK6）及细胞凋亡相关基因（Caspase 3、、Caspase 9、p53与Bax）的基因表达（P<0.05）。体外细胞培养并检测细胞增殖相关基因结果表明,与对照组（pH7.4）相比,酸处理（pH6.8）促进原代培养山羊瘤胃上皮细胞cyclin D1、CDK2与CDK6的mRNA表达（P<0.05）;同时,pH7.4+SCFA处理组促进原代培养山羊瘤胃上皮细胞cyclinA、cyclin D1、cyclin E1、CDK2、CDK4 与 CDK6 的 mRNA 表达（P<0.05）;与 pH6.8组相比,pH6.8+SCFA处理能促进原代培养山羊瘤胃上皮细胞cyclin B1、cyclin E1、CDK1 与 CDK4 的 mRNA 表达（P<0.05）;与 pH7.4+SCFA 组相比相比,pH6.8+SCFA组能促进原代培养山羊瘤胃上皮细胞cyclin B1、cyclin E1、CDK1、CDK2与CDK6的 mRNA 表达（P<0.05）,但降低 cyclin A mRNA 的表达（P<0.05）。在调节 cyclin A、cyclin B1、cyclin E1与CDK6 mRNA表达的过程中,酸与SCFA具有协同作用（P<0.05）。检测细胞凋亡相关基因结果表明,与对照组（pH7.4）相比,酸处理（pH6.8）促进原代培养山羊瘤胃上皮细胞Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9与p53的mRNA表达（P<0.05）,但是 Bcl-2 与 Bax 的比值（Bcl-2/Bax）下调（P<0.05）;同时,pH7.4+SCFA处理组能促进原代培养山羊瘤胃上皮细胞Caspase 3、Caspase 9与Bax的 mRNA 表达（P<0.05）,但是 Caspase 8、p53 与 Bcl-2/Bax 降低（P<0.05）;与 pH6.8组相比,pH6.8+SCFA处理能促进原代培养山羊瘤胃上皮细胞Caspase 3、Bcl-2与Bax的 mRNA 表达（P<0.05）,Caspase 8 与 p53 的 mRNA 表达降低（P<0.05）;与pH7.4+SCFA组相比相比,pH6.8+SCFA组能促进原代培养山羊瘤胃上皮细胞Caspase 3的mRNA表达（P<0.05）。在调节p53、Bcl-2与Bcl-2/Bax的过程中,酸与SCFA具有协同作用（P<0.05）。上述体内外的结果表明,日粮精料通过瘤胃内的SCFA与pH影响山羊瘤胃上皮中细胞增殖和细胞凋亡相关基因的mRNA表达。第二章 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮生长的影响及SCFA和酸性pH的作用选择4头装有永久性瘤胃瘘管,健康无病的荷尔斯坦奶牛进行本次实验。实验分2期,每期分别饲喂精料含量为60%（高精料组,HN）与20%（低精料组,LN）的两种全混日粮。实验期间,每天8:00与17:00分两次饲喂奶牛,并保证其自由饮水。每期的最后一天（第15天）采集样品。体外实验选取4头健康奶牛,屠宰采集瘤胃上皮,胰蛋白酶消化获得瘤胃上皮细胞后进行原代培养,待24 h细胞附着后,分别接受以下处理:pH7.4、pH 6.8、pH7.4+SCFA（20 mM SCFA）与 pH6.8+SCFA 处理。处理24h小时,收集细胞待检。采用气相色谱法测定瘤胃内挥发性脂肪酸（SCFA）含量,用组织切片法光镜观察瘤胃上皮各层层数,细胞数量,大小和体积变化,流式细胞术检测瘤胃上皮细胞周期变化,Tunel法检测瘤胃上皮细胞凋亡,Real-time PCR法检测基因表达。结果显示:与LN组奶牛相比,HN组屠宰时瘤胃液内SCFA的含量显着升高,而瘤胃液的pH值显着低于LN组。与LN组相比,HN组奶牛瘤胃上皮角质层,棘突层和颗粒层细胞层数显着升高,HN组奶牛瘤胃上皮基底层细胞数量有升高的趋势,而LN组与HN组之间棘突层和颗粒层细胞数量没有显着差异。此外,增加日粮精料含量促进奶牛瘤胃上皮中细胞增殖相关基因（cyclin A,cyclin D1,cyclin E1,CDK2,CDK4 和 CDK6）及细胞凋亡相关基因（Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9、p53与Bax）的表达（P<0.05）。体外细胞培养并检测细胞增殖相关基因结果显示,与对照组（pH7.4）相比,酸处理（pH6.8）促进原代培养奶牛瘤胃上皮细胞 cyclin D1、cyclin E1 的 mRNA 表达;CDK6 的 mRNA 表达下降,同时,pH7.4+SCFA处理组能降低原代培养奶牛瘤胃上皮细胞cyclin D1,cyclin E1,CDK2,CDK4和CDK6的mRNA表达;与pH6.8组相比,pH6.8+SCFA处理能促进原代培养奶牛瘤胃上皮细胞 cyclin B1、cyclin E1、CDK1 与 CDK4 的 mRNA 表达;与 pH7.4+SCFA 组相比相比,pH6.8+SCFA组能降低原代培养奶牛瘤胃上皮细胞cyclin D1,cyclin E1,CDK4 和 CDK6 的 mRNA 表达（P<0.01）;与 pH7.4+SCFA 组相比,pH6.8+SCFA 处理能促进cyclin E1,CDK2和CDK4的mRNA表达;同时,在调节cyclin D1,CDK2和CDK6mRNA表达的过程中,酸与SCFA具有协同作用。与对照组（pH7.4）相比,酸处理（pH6.8）促进原代培养奶牛瘤胃上皮细胞Caspase 3,Caspase 8和p53的mRNA表达;但是Bcl-2与Bax的比值（Bcl-2/Bax）下调;同时,pH7.4+SCFA处理组能促进原代培养奶牛瘤胃上皮细胞Caspase 3、Caspase 9与Bax的mRNA表达,但是Caspase 8和p53mRNA表达下降;与pH6.8组相比,pH6.8+SCFA处理能促进原代培养奶牛瘤胃上皮细胞Caspase 3与Bax的mRNA表达;与pH7.4+SCFA组相比相比,pH6.8+SCFA组能增加原代培养奶牛瘤胃上皮细胞Caspase 3的mRNA表达,Caspase 8下降。同时,在调节Caspase 8与p53的过程中,酸与SCFA具有协同作用（interaction P-value<0.05）。上述体内外的结果表明,日粮精料通过瘤胃内的SCFA与pH影响奶牛瘤胃上皮中细胞增殖和细胞凋亡相关基因的mRNA表达。第三章TNFα对奶牛瘤胃上皮细胞增殖和细胞凋亡的影响及其机制研究选择4头装有永久性瘤胃瘘管,健康无病的荷尔斯坦奶牛进行本次实验。实验分2期,每期分别饲喂精料含量为60%（高精料组,HN）与20%（低精料组,LN）的两种全混日粮。实验期间,每天8:00与17:00分两次饲喂奶牛,并保证其自由饮水。每期的最后一天（第15天）采集样品。体外实验选取4头健康奶牛,屠宰采集瘤胃上皮,胰蛋白酶消化获得瘤胃上皮细胞后进行原代培养,待24 h细胞附着后,分别使用 TNF α（50μg/L）、TNF α抑制剂（50μM/L）、ERK 抑制剂（20μM/L）、JNK抑制剂和p38抑制剂（15μM/L）处理细胞（24h）。处理结束后,收集细胞待检。采用气相色谱法检测瘤胃内SCFA的含量;Real-time PCR和Western blot方法分别检测基因与蛋白的表达。奶牛体内实验的结果显示高精料日粮导致奶牛瘤胃内SCFA含量升高,pH下降,瘤胃上皮中TNF α,TNFR1和TRADD蛋白表达升高。高精料日粮促进奶牛瘤胃上皮cycle D1、CDK4和A-Caspase3蛋白的表达,还增加瘤胃上皮中ERK、JNK与p38蛋白的磷酸化水平（P<0.05）。表明高精料日粮激活了奶牛瘤胃上皮中的ERK、JNK与p38通路并影响细胞增殖和凋亡调节蛋白的表达。体外实验的结果显示,与对照组0μg/L相比,TNF α处理（50μg/L）显着促进瘤胃上皮细胞中cycle D1、CDK4和Caspase3的基因与蛋白表达（P<0.05）,提高原代培养瘤胃上皮细胞ERK、JNK与p38蛋白的磷酸化水平（P<0.05）;TNF α对瘤胃上皮细胞ERK、JNK与p38蛋白磷酸化的促进作用被TNF α抑制剂（Lenalidomide）所抑制（P<0.05）;TNF α促进瘤胃上皮细胞中cycle D1、CDK4的基因与蛋白表达的作用被TNF α抑制剂、ERK抑制剂和p38抑制剂所抑制（P<0.05）,TNF α促进瘤胃上皮细胞中Caspase 3的基因与蛋白表达的作用被TNFα抑制剂、JNK抑制剂和p38抑制剂所抑制（P<0.05）。结果表明,cyclinD1和CDK4 mRNA和蛋白的表达受TNFα-ERK和TNF α-p38通路的调节,Caspase3 mRNA和蛋白的表达受TNFα-JNK和TNF α-p38通路的调节。上述体内外的结果表明高精料日粮通过TNF α及其受体后通路（ERK与p38）促进奶牛瘤胃上皮cyclinD1和CDK4基因与蛋白的表达;通过TNFα及其受体后通路（JNK与p38）促进奶牛瘤胃上皮Caspase3基因与蛋白的表达。综上所述,本研究证明日粮精料通过瘤胃腔内因子（SCFA与pH）以及瘤胃上皮中TNF α影响上皮细胞增殖和细胞凋亡,调节相关基因和蛋白的表达。表明腔内因子直接调节瘤胃上皮细胞增殖和凋亡;TNFα通过其受体后通路调节上皮细胞增殖和凋亡。
李楠,张忠[5]（2014）在《蛙皮素及其相似肽与肿瘤关系的研究进展》文中进行了进一步梳理蛙皮素（bombesin,BN）是一种含14个氨基酸残基的生物活性多肽,具有广泛的生物学功能。在其所有的生物学效应中最为重要的是它作为自分泌或旁分泌生长因子促进各类细胞特别是肿瘤细胞的增殖。正因为它与肿瘤的密切关系,成为肿瘤治疗的一个靶点。蛙皮素及其相似物与多种肿瘤的增殖和分化有关,有效抑制蛙皮素有望成为一条肿瘤治疗的新途径。
朱晓峰[6]（2009）在《淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响》文中研究指明目的:淫羊藿素为补肾强骨中药淫羊藿的主要成分淫羊藿苷在动物体内代谢后脱去糖基的活性成分,可能是淫羊藿口服吸收后主要发挥药理活性的成分,对其研究更符合淫羊藿临床多口服给药的用药方式。目前其对成骨细胞作用机理的研究尚未见报道。本研究观察淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株增殖、分化的影响,以及观察它对与分化相关的雌激素受体信号通路、p38MAPK信号通路、BMPs/smads信号通路的影响,明确淫羊藿素作用于成骨细胞而影响骨代谢的具体靶点,对于评价淫羊藿治疗骨质疏松等骨代谢疾病的有效性提供细胞分子学依据。方法:1.MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株的培养及活性观察。2.运用MTT法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14的细胞毒性,确定实验用的药物剂量。3.应用WST-8细胞活力方法、BrdU流式细胞仪方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞增殖的影响。4.应用pNPP方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性的影响,运用双抗夹心ELISA方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,运用茜素红染色计数矿化结节的方法评价淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞矿化的影响。5.运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价ER受体信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。6.运用p38MAPK受体阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价p38MAPK信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。7.实时荧光PCR检测淫羊藿素对BMP-2、4、7mRNA的表达。运用BMPs受体阻断剂Noggin阻断BMPs/Smads信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞表达碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价BMPs/Smads信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。8.Western-blot检测ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,淫羊藿素对p38和Smad1/5/8的蛋白磷酸化情况,评价它们和ER受体信号的关系。结果:1.MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株,在具有分化条件的培养基中可以向成骨细胞分化。2.淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞毒性的检测发现,IC50浓度为100.154mol/L,10-5.93mol/L浓度以下则对细胞基本上无抑制作用,因此实验药物浓度选择10-8、10-7、10-6mol/L 0.01μM、0.1μM、1μM)为梯度浓度。3.WST-8和BrdU流式细胞仪检测发现,淫羊藿素0.01μM、0.1μM、1μM浓度组的MC3T3-ElSubclone14的细胞活力和细胞增殖指数与对照组比较,在统计学上无显着差异（P＞0.05）。4.在作用48或72小时后,淫羊藿素0.01μM、0.1μM、1μM浓度组MC3T3-ElSubclone14细胞的碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原和骨钙素与对照组比较,在统计学上有显着差异（P＜0.01或0.05）;淫羊藿素作用10天或14天后,各组的矿化结节计数和对照组比较,在统计学上有显着差异（P＜0.01）。5.运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）;运用p38MAPK受体阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）;运用BMPs受体阻断剂Noggin阻断BMPs/Smads信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）。6.淫羊藿素可以提高BMP-2mRNA的表达,并随着浓度的增高而增高,和对照组比较,在统计学上有明显差异（P＜0.01或0.05）,1μM浓度的淫羊藿素可以提高BMP-4mRNA的表达（P＜0.05）,但对BMP-7mRNA无作用（P＞0.01）。7.Western-blot检测发现运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,p38和Smad1/5/8的磷酸化明显减弱。结论:1.一定浓度（0.01μM、0.1μM、1μM）的ICT对MC3T3-ElSubclone14细胞增殖无明显促进作用。2.一定浓度（0.01μM、0.1μM、1μM）的ICT可以促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化,促进其矿化。3.ICT促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化和ER受体信号通路、p38MAPK信号通路、BMPs/Smads信号通路密切相关。4.在ICT促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的过程中,ER受体信号通路在p38MAPK信号通路和BMPs/Smads信号通路的上游。5.实验结果提示ICT在MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中所显示的主要作用可能和它的类雌激素样活性有关。
贾刚[7]（2009）在《胰高血糖素样肽-2与断奶仔猪肠道发育、适应的关系及作用机理研究》文中研究指明胰高血糖素样肽-2（Glucagon-like Peptide-2,GLP-2）通过促进小鼠、大鼠、胎猪、新生仔猪等动物的肠上皮细胞增殖、抑制细胞凋亡而影响肠黏膜发育、调节肠道营养、免疫功能已得到众多营养学家的认同,但能否影响断奶仔猪的肠道适应,对具有快速更新特点的断奶仔猪肠上皮细胞的作用效果尚不得而知。为回答这个问题,本研究采用以下几个实验来探讨GLP-2与断奶仔猪肠道发育的关系及对肠上皮细胞增殖、代谢、凋亡的作用特点,为进一步直接采用动物试验研究GLP-2对仔猪断奶应激综合征的调节及作用机理提供理论和试验依据。试验1不同基因型仔猪断奶前后GLP-2的分泌规律及与肠道发育的关系本试验通过考察太湖猪、大×太二杂猪和长白仔猪断奶前后GLP-2的分泌规律、肠道发育状况的差异,初步探讨具有不同生长速度仔猪的GLP-2分泌水平的高低及与肠道发育的关系。试验选择1日龄健康正常的太湖猪、大×太二杂猪和长白猪各20头,将每个不同基因型猪作为一个处理,每个处理5个重复,每个重复4头猪,仔猪饲养于环控实验室,25日龄断奶,分别于仔猪24、26和30日龄时每个重复选取一头接近平均体重的仔猪前腔静脉采血测定GLP-2浓度,并于30日龄时屠宰仔猪测定肠道发育参数,并分析30日龄小肠绒毛高度与24日龄、26日龄、30日龄血清GLP-2浓度的关系。试验结果如下:仔猪30日龄时,大×太猪小肠长、小肠相对长、小肠相对重都显着高于长白猪（P＜0.05）,太湖猪小肠相对重显着高于长白猪（P＜0.05）,而小肠相对长极显着高于长白猪（P＜0.01）;30同龄时,大×太猪小肠绒毛高度高于长白猪和太湖猪（P＞0.05）,且血清GLP-2含量极显着高于长白猪和太湖猪（P＜0.01）;24日龄和26日龄时,大×太猪血清GLP-2含量极显着高于太湖猪（P＜0.01）;26日龄时,大×太猪血清GLP-2含量显着高于长白猪（P＜0.05）;30日龄小肠绒毛高度与各猪种血清GLP-2含量达极显着相关水平（P＜0.01）。研究结果表明,不同基因型仔猪断奶后GLP-2的活性逐渐升高,大×太猪GLP-2变化幅度最大,30日龄时其活性最高,肠道发育状况优于太湖猪和长白猪;三种猪30日龄血清GLP-2含量与30日龄小肠绒毛高度极显着相关。研究结果提示我们,选择大×太猪或其肠上皮细胞作为研究GLP-2调节仔猪断奶前后的肠道适应及可能的作用机理是可行的。在证实不同基因型仔猪断奶前后GLP-2的分泌水平及活性逐渐升高,而仔猪肠绒毛高度与循环中GLP-2浓度高度相关的基础上,课题组进一步研究了GLP-2对大×太断奶仔猪肠黏膜上皮细胞的营养效应（试验2）,研究发现GLP-2可以剂量依赖性地促进体外培养的28d断奶仔猪小肠黏膜上皮细胞增殖,抑制细胞凋亡,维持细胞形态和功能的完整性,课题组随即进行了下列研究。试验3 GLP-2和DPP-Ⅳ抑制剂联合使用对对断奶仔猪肠上皮细胞的影响本试验旨在研究不同浓度的胰高血糖素样肽-2（GLP-2）和二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）抑制剂（KR62436）联合使用对体外原代培养的28日龄断奶仔猪肠上皮细胞增殖、代谢及相关酶活力的影响。试验以体外培养的28日龄断奶仔猪回肠上皮细胞作为模型,首先采用单因子试验设计探讨不同浓度的KR62436对细胞增殖及代谢的影响;然后采用2×3因子设计,考察添加不同浓度hGLP-2(1×10-10、1×10-9、1×10-8 mol/L)和KR62436(0和1×10-11mol/L)对细胞增殖、代谢及凋亡的影响,细胞培养时间共计144h。结果如下:单独添加KR62436,在倒置显微镜下观察发现细胞无明显变化,细胞数量虽有上升的趋势,但细胞MTT OD值、细胞沉积蛋白量、细胞总蛋白量呈现先增加后下降趋势（P＞0.05）,胞外LDH、CK活力在KR62436低剂量时呈降低趋势（P＞0.05）,但当其浓度较高时,细胞MTT OD值显着低于对照组（P＜0.05）,其胞外LDH、CK活力显着高于对照组（P＜0.05）,Na+,K+-ATP酶活力变化不明显;在培养液中同时添加KR62436和hGLP-2,随着hGLP-2浓度的增加,细胞数量极显着上升（P＜0.01）,MTT OD值极显着增加（P＜0.01）,细胞蛋白沉积量极显着增加（P＜0.01）,细胞总蛋白含量极显着增加（P＜0.01）,胞外LDH、CK活力显着降低（P＜0.05）,Na+,K+-ATP酶活力极显着增加（P＜0.01）。试验结果提示我们:低浓度DPP-Ⅳ抑制剂对细胞生长的影响不显着,高浓度抑制剂虽能促进仔猪肠上皮细胞的增殖,但对细胞的代谢和完整性有负面效应;在培养液中添加DPP-Ⅳ抑制剂能够增强外源GLP-2对细胞增殖、代谢和细胞完整性的影响,两者具有明显的协同效应。试验结果提示我们应用KR62436来提高GLP-2的作用效果要慎重。试验4 GLP-2对β-伴球蛋白损伤的28日龄断奶仔猪肠上皮细胞的保护、修复作用本试验主要考察GLP-2对28日龄断奶的大×太仔猪的肠上皮细胞被β-伴球蛋白损伤后存活、增殖、代谢、凋（死）亡的影响及可能的作用机理。试验首先采用单因子设计,分别用1.2mg/ml和2.4mg/ml的β-伴球蛋白对原代培养的断奶仔猪肠上皮细胞进行攻毒,通过考察对细胞存活、增殖、代谢及凋亡的影响而建立细胞损伤模型;然后再采用2×3因子设计,考察添加不同浓度的hGLP-2(1×10-9、1×10-8、1×10-7mol/l)对致敏的培养细胞的影响。试验结果如下:使用β-伴球蛋白提取物攻毒,细胞MTTOD值显着降低（P＜0.05）,细胞蛋白质沉积量和细胞消耗蛋白量极显着降低（P＜0.01）,胞外LDH活力极显着增加（P＜0.01）,Na+,K+-ATP酶活力显着（P＜0.05）或者极显着（P＜0.01）降低,Caspase-3酶活力极显着（P＜0.01）升高;使用β-伴球蛋白攻毒的同时添加不同浓度的hGLP-2,细胞MTT OD值、细胞蛋白质沉积量、细胞消耗蛋白量和Na+,K+-ATP酶活力均显着或极显着（P＜0.05或0.01）升高,且随着hGLP-2浓度的增加而升高,而胞外LDH活力则随着hGLP-2浓度的增加而逐渐下降（P＜0.05或0.01）,Caspase-3酶活力极显着（P＜0.01）降低。研究结果表明β-伴球蛋白对断奶仔猪小肠上皮细胞的增殖和细胞完整性有不利影响,而GLP-2能够减轻或者避免β-伴球蛋白对断奶仔猪小肠上皮细胞的增殖和细胞完整性的不利影响,这种效应可能是通过调节细胞Caspase-3的活力而实现的。综上所述,GLP-2可影响断奶仔猪肠粘膜的发育,仔猪肠绒毛高度与GLP-2的分泌变化高度相关;GLP-2在体外可促进断奶仔猪肠上皮细胞增殖,抑制细胞凋（死）亡,这种效应具有明显的剂量依赖关系;使用DPP-Ⅳ抑制剂（KR62436）可以进一步提高GLP-2的作用效果,两者具有明显的协同效应,但单独使用KR62436可能会造成细胞完整性损伤;β-伴球蛋白对断奶仔猪小肠上皮细胞的增殖和细胞完整性有不利影响,而GLP-2能够通过细胞保护作用减轻或者避免β-伴球蛋白对断奶仔猪小肠上皮细胞的增殖和细胞凋亡的不利影响。研究结果为我们进一步探讨GLP-2对断奶仔猪的肠道适应的直接影响及相应的作用机理提高了有力支持,为使用GLP-2调节仔猪断奶应激提供了一个新思路。
曾菁,谭庆华[8]（2008）在《生长因子与消化性溃疡》文中进行了进一步梳理不同的致病因素所引起的消化性溃疡病变的机制不尽相同,但无论是哪一种形式的溃疡病变,其发生的根本原因不外乎防御机制的削弱及（或）攻击因素作用的增强,从而打破了两者间的平衡状
范成莉[9]（2008）在《β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪生长轴激素的影响及其机理研究》文中提出本课题以断奶仔猪为试验对象,通过饲养试验、屠宰试验、腺垂体细胞和肝脏细胞体外培养试验,从胃泌素（GAS）基因表达、生长激素（GH）和类胰岛素生长因子I（IGF-I）基因表达、GH脉冲分泌模式、IGF-I血清水平及其它与生长相关的激素和血清生理生化指标、内源消化酶活性、大肠微生物区系等方面揭示在大麦型饲粮中添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪生长轴激素的影响并阐明其机理,旨在为p-葡聚糖、木聚糖复合酶在养猪生产中的应用提供科学依据。根据Genebank登录的猪GAS、GH、IGF-I和内标β-actin基因序列设计引物,分别以胃窦组织、腺垂体组织和肝脏组织mRNA为模板,经反转录和PCR反应,克隆得到了相应的GAS、GH、IGF-I和内标β-actin的基因片段。对测序结果进行序列分析表明,克隆得到的GAS、GH、IGF-I及内标β-actin基因序列与Genebank登录的相应基因片段（登录号分别为NM001004036、M22761、M31175和U07786）同源性分别为100%、99.60%、100%和100%。在此基础上,进一步探讨了PCR反应中适宜的退火温度、Mg2+浓度和循环数,构建了适合相应基因序列的优化半定量RT-PCR法,以用于研究p-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪胃窦GAS、腺垂体GH和肝脏IGF-I基因mRNA表达量的影响,结果表明GAS、GH、IGF-I和β-actin退火温度分别为62℃、62℃、61℃和60℃时,Mg2+浓度皆为1.5 mmol／L、循环数皆为29时条件最优。选择36头“杜长大”三元杂交断奶仔猪（公母各半,平均体重为13.10±1.38 kg,28日龄断奶）,按科学饲养试验要求分为2组,分别饲喂不含和含有1.5 g／kgβ-葡聚糖、木聚糖复合酶的大麦型饲粮（大麦含量为65%）,其中葡聚糖酶的活性为10000U／g,木聚糖酶活性为80000U／g,试验预试期7 d,正试期28 d。饲养期间,试验猪自由采食、饮水。饲养试验结束后,从试验组和对照组的每个重复中各随机选取试验猪2头（公母各半）,共12头,饲喂相应饲料,1h后,分别耳静脉采血,试验于10：00至13：00,每隔20 min采样一次,并分别制备血清,以研究β-葡聚糖、木聚糖复合酶对仔猪GH脉冲分泌的影响。按常规方法进行屠宰,并采集血清样品、肝脏、垂体、胃窦和胰腺样品、十二指肠、空肠、回肠和盲肠样品进行相关指标分析。同时,通过体外原代培养猪腺垂体细胞和肝脏细胞,检测GAS对GH和IGF-I分泌的影响。获得了以下主要研究结果：1.饲养试验结果表明：添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶（1.5 g／kg）使断奶仔猪的日增重提高了13.99%（P<0.05）,料重比降低了6.32%（P<0.05）,日采食量有增加的趋势,但差异不显着（P>0.05）,并使腹泻频率降低了41.80%（P<0.05）；2.血清生化指标及与生长相关激素水平的分析表明：复合酶的添加使得断奶仔猪血清谷丙转氨酶活性和血清尿素氮含量分别降低了26.46%（P<0.05）和21.27%（P<0.01）,使血清总蛋白和葡萄糖含量分别增加了22.97%（P<0.01）和8.22%（P<0.05）,但对血清谷草转氨酶活性及胆固醇和甘油三酯的含量无显着影响（P>0.05）；还显着提高了断奶仔猪血清游离三碘甲腺原氨酸和胰岛素水平,分别比对照组提高了43.42%（P<0.05）和32.07%（P<0.05）,促甲状腺激素和游离四碘甲腺原氨酸含量有升高的趋势,但差异不显着（P>0.05）。3.胃窦GAS mRNA丰度和血清GAS水平分析表明：添加复合酶显着上调了断奶仔猪胃窦GAS的mRNA丰度和血清GAS水平,与对照组相比,分别提高了64.04%（P<0.01）和48.41%（P<0.01）。4.GH脉冲分泌、血清IGF-I水平及垂体GH和肝脏IGF-I mRNA丰度分析显示：β-葡聚糖、木聚糖复合酶（1.5g/kg）的添加,显着提高了断奶仔猪GH分泌的基础水平、总体水平和峰强度,分别比对照组提高了27.27%（P<0.05）、34.62%（P<0.05）和34.69%（P<0.05）,但对分泌频率和峰持续时间未产生显着性影响（P>0.05）；复合酶的添加还明显上调了腺垂体GH和肝脏IGF-I的基因表达及血清IGF-I水平,比对照组分别提高了36.90%（P<0.05）.33.43%（P<0.01）和43.91%（P<0.01）。5.体外细胞培养试验结果表明：在细胞培养液中添加终浓度为10-10mol／L、10-8 mol/L和10-6 mol/L的五肽胃泌素（pGAS,GAS的体外合成类似物）培养12 h、24 h、36 h和48 h后,显着促进了体外原代培养的猪腺垂体细胞（P<0.05）和肝脏的细胞增殖（P<0.05）,同时促进了腺垂体细胞分泌GH（P<0.05）、肝脏细胞合成IGF-I（P<0.05）,并提高了pGAS作用24 h后两种细胞在S期细胞的数量（P<0.05）和分裂指数（P<0.05）,其中腺垂体细胞增殖率和GH的分泌量、肝脏细胞增殖率和IGF-I的合成量相关性显着（P<0.05）。6.内源消化酶活性和消化器官形态分析表明：添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶对胰腺消化酶和胃蛋白酶活性有提高的趋势,但无显着性影响（P>0.05）,使空肠粘膜麦芽糖酶、蔗糖酶和γ-谷氨酰转肽酶活性分别提高了103.33%（P<0.05）、145.35%（P<0.05）和94.74%（P<0.05）,回肠粘膜麦芽糖酶、蔗糖酶和γ-谷氨酰转肽酶活性分别提高了149.50%（P<0.05）.136.00%（P<0.05）和93.33%（P<0.05）,并明显改善了肝脏、胰腺、胃窦幽门腺和小肠粘膜绒毛的形态结构,使小肠绒毛高度增加且排列整齐,绒毛高度显着增加（P<0.01）,隐窝深度降低（P<0.05）。7.盲肠内容物菌群、细菌酶活性以及总短链脂肪酸（SCFA）浓度分析显示：添加复合酶可显着提高盲肠内容物中乳酸杆菌（P<0.05）和双歧杆菌（P<0.05）数量,降低沙门氏菌（P<0.05）和大肠杆菌数量（P<0.05）,同时使细菌酶β-葡萄糖苷酸酶的活性降低了23.38%（P<0.05）,p-半乳糖苷酶活性提高了19.31%（P<0.05）,乳酸、丁酸和总SCFA的浓度分别提高了7.49%（P<0.05）、27.72%（P<0.05）和15.15%（P<0.05）,并降低了盲肠内容物的pH值（P<0.05）。本研究结果提示：饲料中添加p-葡聚糖、木聚糖复合酶能显着提高断奶仔猪日增重和饲料利用效率；添加复合酶可上调胃窦胃泌素基因表达,显着提高血清胃泌素水平,明显改善了幽门腺和肠粘膜绒毛形态结构,并可显着提高二糖酶活性；β-葡聚糖、木聚糖复合酶在饲料中的添加可上调腺垂体GH基因表达,明显提高GH脉冲分泌；与此同时,还可上调肝脏IGF-I基因表达,显着提高血清IGF-I水平；猪原代细胞培养表明：胃泌素能上调腺垂体细胞的增殖,显着提高GH的分泌量：还可上调肝脏细胞的增殖,显着增加IGF-I的合成量；添加复合酶可使盲肠内容物微生物区系发生改变,其中乳酸杆菌和双歧杆菌显着增加,沙门氏菌和大肠杆菌明显降低,显着降低断奶仔猪的腹泻频率。
洪丽莉[10]（2008）在《脊髓损伤模型大鼠的胃肠动力障碍及其电针调整作用的研究》文中研究表明目的:1研究脊髓损伤后大鼠的胃肠动力的改变,初步探讨脊髓损伤后胃肠动力障碍的可能的发病机理。2通过检测电针足三里前后胃内核素残留率、小肠推进率以及脑肠肽、脑肠肽受体、NOS等的改变,了解电针对脊髓损伤后胃肠动力障碍的调整作用,推断电针作用的可能途径和机制。方法:1脊髓损伤模型建立:用WD法建立脊髓损伤模型,采用BBB评分法,选择BBB评分0分的大鼠为造模成功。2大鼠的运动能力评定:采用改良后CBS法进行动物运动行为评分,观察指标包括开放空间运动能力、脚趾伸展、触地反射、回缩反射、翻正反射、斜板试验。并且对大鼠双后肢的运动功能观察,采用BBB评分。3分组:随机分正常对照组、模型对照组、非经非穴组、电针治疗组和莫沙比利治疗组。①正常对照组:对正常的大鼠,每日固定30 min,但不行电针刺,连续14天。②模型对照组:对脊髓损伤模型大鼠,每日固定30min,但不行电针刺,连续14天。③非经非穴组:对脊髓损伤模型大鼠,每日电针治疗（选“足三里”穴旁0.5 cm处,频率、强度同（3）组）30 min,连续14天。④电针治疗组:对脊髓损伤模型大鼠,每日电针足三里治疗30min,连续14天。（穴位选双侧足阳明胃经上的“足三里”穴）。⑤莫沙比利治疗组:对脊髓损伤模型大鼠,每日给予莫沙比利灌胃,连续14天。4取穴和针刺方法:“足三里”穴,根据中国针灸学会实验针灸研究会指定的“动物针灸穴位图谱”选取双侧足三里穴（在大鼠膝关节后外侧,腓骨小头下约5mm处）。大鼠清醒固定,各电针组动物均在造模成功后一周开始针刺,足三里穴直刺7mm,连接胃肠促动型医用数码电针治疗仪,参数选为:连续波,电针频率为3Hz,强度为2-3mA,针刺30min,每天1次。5胃排空和小肠推进比的检测:各组大鼠于造模后第7天和第21天时,随机抽取10只大鼠,每组灌服混有99m碍-二乙三胺五乙酸(99mTc-DTPA)0.05毫居（mCi）/10g和少量亚甲兰的营养性半固体糊标准餐20ml/kg,胃内核素残留率（%）=（胃内核素残留值/基准值）×100%,小肠推进比（%）=（幽门括约肌至色素前端的距离（cm）/幽门括约肌至回盲部的距离（cm））×100%。6脊髓组织病理观察:于造模后第1,7天,正常组和造模组随机抽取3只大鼠处死,以T12为中心取长约1.0cm脊髓,以4%多聚甲醛固定24小时后,常规石蜡包埋,连续切片,片厚5μm,备用,行HE染色,观察脊髓组织形态学变化。7胃动素、胃泌素、血管活性肠肽和生长抑素的测定:采用放射免疫分析法,血浆、血清及组织标本在测定前混匀,4℃1500转/min离心15分钟,取上清液测定胃动素、胃泌素、血管活性肠肽和生长抑素的含量。8一氧化氮合酶的检测:于造模后第3周,大鼠处死,取1cm胃窦和十二指肠组织,于4.0%多聚甲醛中固定,包埋,切片,用免疫组织化学技术检测胃肠组织iNOS蛋白的表达,采用SABC（Strept Avidin-Biotin Complex,链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶）法检测;并用RT-PCR测定胃窦和小肠组织iNOS mRNA的表达。9 MTLRmRNA和SSR mRNA表达:采用RT-PCR测定MTLR mRNA和SSRmRNA表达,用多媒体凝胶成像分析系统计算各样本PCR产物的光密度值。计算各样本MTL-R1A mRNA及SSTR2 mRNA与内参β-actin mRNA PCR产物的积分光密度比值,比值的高低反映了MTL-R1A mRNA及SSTR2 mRNA在样本中表达量的多少。结果:1脊髓损伤后不同时间各组大鼠CBS评分结果:正常组的大鼠脊髓神经的运动功能正常,模型组大鼠双后肢软瘫,肌张力低,损伤平面以下各种反射不同程度的减弱或消失,第造模后第7天和第21天,CBS评分与正常组比较有非常显着性降低,P＜0.01。2大鼠胃内残留率和小肠推进比:实验1周后,即造模后,脊髓损伤模型各组,与正常组相比胃内残留率和小肠推进比均有显着差异（P＜0.01）;经过电针治疗后,即实验3周后,模型组胃内残留率仍比正常组明显增加（P＜0.01）,而电针组明显低于模型组（P＜0.01）;3周后,小肠推进比模型组较正常组仍明显减少（P＜0.01）,而电针组明显高于模型组（P＜0.01）;电针组在电针治疗前后胃内残留率和小肠推进比有显着差异（P＜0.01）。3脊髓组织形态学变化:正常组术后24h脊髓HE染色结果正常;而模型组损伤后24h:HE染色可见损伤区及邻近区域脊髓组织丧失正常的结构,有明显的组织破坏、坏死、空泡形成。灰、白质内明显可见大量、弥散的红细胞。损伤后1周:损伤区及邻近区域脊髓丧失正常结构,灰、白质内可见到脊髓液化坏死,形成空泡,灰、白质内出血消失。同时有大量的炎性细胞及巨噬细胞浸润,排列紊乱,神经元极少见到。4胃动素、胃泌素、血管活性肠肽和生长抑素的测定结果:①脊髓损伤可使大鼠血液及组织中的MTL含量降低;电针组可使大鼠血液和胃窦组织和十二指肠组织中MTL含量明显上升,作用与西药组的作用相当。②脊髓损伤可使大鼠血液及胃窦和十二指肠组织中的GAS含量明显降低,而电针组可明显增加血液中的GAS含量,而对胃窦和十二指肠组织中的GAS含量变化作用不明显。③脊髓损伤可使大鼠血液及胃肠组织中的VIP含量升高。电针足三里能降低血液及胃窦组织中VIP含量,对十二指肠中VIP含量增高作用不明显;与莫沙比利相比较,电针足三里对胃窦组织的作用优于莫沙比利。④脊髓损伤后大鼠血液及组织中的SS含量升高。电针足三里能降低血液及胃窦和十二指肠组织中SS含量,作用相当于莫沙比利。5脊髓损伤大鼠NOS的改变和电针的调整作用:①iNOS在胃和小肠组织中的表达:在正常组中,iNOS在胃黏膜上皮细胞浆中少量表达,而在模型组和穴旁组中,iNOS在胃黏膜的表达较正常明显增加（P＜0.01）,治疗后,电针组和西药组明显减少（P＜0.01）;模型组和穴旁组与正常组比较iNOS表达明显增加（P＜0.01）,经过治疗,电针组iNOS表达有所改善,明显减少,与模型组比较有显着差异,而西药组与正常组比较未见明显差异。②胃和肠组织iNOS mRNA:胃和肠组织中,模型组iNOS mRNA的表达增加（P＜0.05）;电针组与模型组和穴旁组相比较,iNOS mRNA的表达显着减少（P＜0.01）。6脊髓损伤大鼠胃窦MTL-R1A mRNA及结肠SSTR2 mRNA表达的改变和电针的调整作用:MTL-R1A mRNA中,模型组的光密度积分比值明显降低,与正常组比较,有非常显着性差异（P＜0.01）;电针组及西药组与模型组比较,平均光密度积分比值均升高,有非常显着性差异（P＜0.01）。SSTR2 mRNA中,模型组的平均光密度比值明显升高,与正常组比较,有非常显着性差异（P＜0.01）;电针组与模型组比较,比值降低,有非常显着性差异（P＜0.01）。结果表明,脊髓损伤后大鼠MTL-R1A mRNA表达下调,电针足三里上调MTL-R1A mRNA表达,作用相当于莫沙比利;脊髓损伤后大鼠SSTR2 mRNA表达增加,电针足三里下调SSTR2 mRNA表达,作用优于莫沙比利。结论1根据改良的WD方法建立脊髓损伤大鼠模型,模型组造模后第7、21天改良的CBS评分与正常组有明显差异,组织学观察符合临床脊髓损伤患者的病理变化,证实建立的SD大鼠脊髓损伤模型是成功的。2脊髓损伤大鼠存在胃肠动力障碍,本实验中主要表现为胃排空和小肠推进运动功能的下降,因此,脊髓损伤后胃肠的动力下降;电针足三里可以改善胃肠的排空率,促进胃肠的运动,因此,电针足三里对胃肠动力有促进的作用。3脊髓损伤大鼠存在胃肠激素的紊乱和电针的调整作用:①血浆和组织中MTL的下降可能是造成脊髓损伤后胃肠运动功能障碍的原因之一,MTL主要通过内分泌和局部神经分泌的方式影响脊髓损伤后的胃肠运动。电针足三里可以通过升高血液和组织中的MTL,促进胃肠动力。②血浆和胃肠组织中GAS的下降可能是脊髓损伤后胃肠功能障碍的发病机制之一,GAS既可以内分泌的方式,也可以局部神经分泌的方式影响脊髓损伤后胃肠动力。电针足三里可以通过升高血液中的GAS,以内分泌的方式促进脊髓损伤后胃肠动力。③血浆和组织中VIP的升高可能是引起脊髓损伤后胃肠运动功能障碍的原因之一,电针足三里对VIP的调整不仅以内分泌的形式起作用,其胃窦组织中VIP含量也下降,因而电针足三里以血液循环和胃窦组织局部分泌的方式影响脊髓损伤后的胃肠动力。④血浆和组织中SS的升高可能是脊髓损伤后胃肠功能障碍发病机制之一,电针足三里后,可能通过降低抑制性脑肠肽SS的释放,以血液循环和局部分泌的形式调整胃肠动力的紊乱。4脊髓损伤后胃肠动力障碍的发生可能与局部组织中脑肠肽受体mRNA的表达水平有关,当对胃肠平滑肌细胞有兴奋效应的脑肠肽受体的mRNA表达水平下降,或对胃肠平滑肌细胞有抑制效应的脑肠肽受体的mRNA表达水平上升时,则可能会出现胃肠动力障碍,MTL-R1A、SSTR2的基因表达异常可能参与了SCI后的胃肠动力下降的发病;电针足三里对脊髓损伤后胃肠动力障碍的影响可能通过受体的调节方式来实现,通过上调MTL-R1A、下调SSTR2的基因表达,来调节胃肠运动,达到促进胃肠动力的作用。5 NO能神经可能参与了脊髓损伤后胃肠动力障碍的发病机制,脊髓损伤后可能通过iNOS蛋白和基因水平的上调导致胃肠动力障碍;而针刺足三里治疗脊髓损伤后胃肠动力障碍的机制可能与降低NO能神经兴奋性有关,针刺足三里在胃肠动力障碍的状态下,可以下调iNOS蛋白水平和基因的表达,进而促进胃肠动力;以上可能通过调节神经递质NO的释放来实现。
二、蛙皮素对新生兔胃肠形态及细胞增殖的调节研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、蛙皮素对新生兔胃肠形态及细胞增殖的调节研究（论文提纲范文）
（1）177Lu标记寡聚苯乙炔修饰RM26的体内外性质研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 胃泌素释放肽受体(GRPR)拮抗剂RM26 在前列腺癌中的应用 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）慢性热应激对肉鸡采食调节机制的影响及牛磺酸缓解作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照 |
| 前言 |
| 上篇 文献综述 |
| 第一章 热应激对肉鸡生产的影响及缓解措施 |
| 1 热应激对肉鸡生产的影响 |
| 2 热应激的缓解措施 |
| 2.1 环境措施 |
| 2.2 基因选育措施 |
| 2.3 营养措施 |
| 第二章 肉鸡采食调控机制 |
| 1 食欲的形成 |
| 2 胃肠激素与食欲 |
| 2.1 胃肠激素的发现 |
| 2.2 胆囊收缩素(CCK) |
| 2.3 饥饿素(Ghrelin) |
| 2.4 酪酪肽(PYY) |
| 2.5 生长抑素(SS) |
| 3 肠道味觉感应与食欲 |
| 3.1 脂质感应 |
| 3.2 氨基酸味觉感应受体 |
| 3.3 葡萄糖感应 |
| 4 氨基酸与食欲 |
| 5 下丘脑采食调控 |
| 5.1 神经肽(NPY) |
| 5.2 刺鼠相关蛋白(AgRP) |
| 5.3 阿黑皮素原(POMC) |
| 5.4 可卡因-安非他明调节转录肽(CART) |
| 5.5 下丘脑AMPK通路与采食调控 |
| 第三章 牛磺酸生理功能及研究进展 |
| 1 牛磺酸的来源及代谢合成途径 |
| 2 牛磺酸的转运 |
| 3 牛磺酸的生理功能 |
| 3.1 牛磺酸的促生长功能 |
| 3.2 牛磺酸与肠道功能 |
| 3.3 牛磺酸与大脑神经系统 |
| 3.4 牛磺酸与心脏功能 |
| 3.5 牛磺酸与胆汁代谢 |
| 3.6 牛磺酸的其他功能 |
| 本研究的目的和意义 |
| 下篇 试验研究 |
| 第一章 慢性热应激对肉鸡生产性能及消化器官发育的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 指标测定 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 慢性热应激对肉鸡泄殖腔温度的影响 |
| 2.2 慢性热应激对肉鸡生产性能的影响 |
| 2.3 慢性热应激对肉鸡器官指数及肠道发育的影响 |
| 2.4 慢性热应激对肉鸡肠道形态的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第二章 慢性热应激对肉鸡胃肠激素、采食相关基因、味觉受体及AMPK通路表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 指标测定 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 慢性热应激对肉鸡血清中胃肠激素CCK和ghrelin水平的影响 |
| 2.2 慢性热应激对肉鸡肠道胃肠激素水平的影响 |
| 2.3 慢性热应激对肉鸡胰腺及肠道食糜消化酶活性的影响 |
| 2.4 慢性热应激对肉鸡小肠黏膜酶活性的影响 |
| 2.5 慢性热应激对肉鸡血浆支链氨基酸水平的影响 |
| 2.6 慢性热应激对肉鸡十二指肠和空肠PCNA阳性表达细胞数量的影响 |
| 2.7 慢性热应激对肉鸡空肠细胞凋亡的影响 |
| 2.8 慢性热应激对肉鸡小肠黏膜采食相关基因及味觉受体基因表达的影响 |
| 2.9 慢性热应激对肉鸡小肠黏膜AMPKα1、LKB1和HIF-1α表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第三章 慢性热应激对肉鸡下丘脑采食相关基因及转录组水平差异基因的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 测定指标 |
| 1.5 RNA-Seq技术测定肉鸡下丘脑基因序列 |
| 1.6 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 慢性热应激14d对肉鸡头部表面温度的影响 |
| 2.2 慢性热应激对肉鸡血清内分泌激素水平的影响 |
| 2.3 慢性热应激14d对肉鸡下丘脑ROS水平的影响 |
| 2.4 慢性热应激14d对肉鸡下丘脑超显微结构的影响 |
| 2.5 慢性热应激14d对肉鸡下丘脑采食相关基因mRNA表达水平的影响 |
| 2.6 慢性热应激14d对肉鸡下丘脑采食基因NPY和POMC蛋白表达的影响 |
| 2.7 基于转录组水平鉴别热应激处理14d肉鸡下丘脑的差异基因 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第四章 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡生产性能、胃肠激素及采食相关基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 测定指标 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果分析 |
| 2.1 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡生产性能的影响 |
| 2.2 饲粮中添加牛磺酸对热应激肉鸡泄殖腔温度的影响 |
| 2.3 饲粮中添加牛磺酸对热应激肉鸡消化器官发育的影响 |
| 2.4 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡肠道形态的影响 |
| 2.5 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡血清胃肠激素水平的影响 |
| 2.6 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡肠道胃肠激素水平的影响 |
| 2.7 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡肠道黏膜CCK、ghrelin、TIR1和T1R3表达的影响 |
| 2.8 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡肠道黏膜AMPKα1、LKB1和HIF-1α表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第五章 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡血清内分泌激素水平、下丘脑形态及采食相关基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 测定指标 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡血清内分泌激素水平的影响 |
| 2.2 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡下丘脑ROS水平的影响 |
| 2.3 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激14d肉鸡下丘脑超显微结构的影响 |
| 2.4 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡下丘脑采食相关基因mRNA表达水平的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 总体讨论 |
| 1 慢性热应激对肉鸡生产性能的影响 |
| 2 慢性热应激对肉鸡采食调节的影响及其机制 |
| 3 饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡采食调节的影响 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 本文创新点及有待进一步研究的问题 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 |
（3）黄连解胰汤通过抑制肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化介导抗胰腺癌的作用及其机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 黄连解胰汤对胰腺癌细胞生长及迁移的影响 |
| 1 材料及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄连解胰汤对胰腺癌移植瘤生长的作用 |
| 1 材料及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 黄连解胰汤对肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化和血管生成的作用及机制 |
| 1 材料及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）日粮精料水平对瘤胃上皮生长的影响及调节作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 本文部分缩写的中英文对照 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 瘤胃上皮的生长发育及其调节 |
| 1 瘤胃上皮的生长发育 |
| 2 瘤胃上皮生长发育的调节 |
| 2.1 日粮营养水平 |
| 2.2 瘤胃内代谢产物 |
| 2.3 激素和生长因子 |
| 参考文献 |
| 第二章 瘤胃上皮的结构功能及其调节 |
| 1 瘤胃上皮的结构 |
| 1.1 瘤胃上皮的解剖学特点 |
| 1.2 瘤胃上皮的细胞学特点 |
| 1.3 瘤胃上皮的超微结构 |
| 2 瘤胃上皮的功能及其调节 |
| 2.1 瘤胃上皮功能的发育 |
| 2.2 SCFA的吸收 |
| 2.3 氮的吸收 |
| 2.4 离子的吸收 |
| 参考文献 |
| 第三章 细胞凋亡 |
| 1 细胞凋亡的概况 |
| 2 细胞凋亡的发生过程和分子机制 |
| 3 调节细胞凋亡的主要因素 |
| 参考文献 |
| 第四章 细胞周期 |
| 1 细胞周期及其调节 |
| 1.1 细胞周期概述 |
| 1.2 细胞周期的调控 |
| 1.3 IGF-1对细胞周期的调节 |
| 1.3.1. IGF-1对G1期进程的调节 |
| 1.3.2 IGF-1的作用机制 |
| 1.3.2.1 IGF-1R |
| 1.3.2.2 IGF-1受体后信号转导途径 |
| 1.4 调节细胞周期的主要因素 |
| 参考文献 |
| 第二篇 实验研究 |
| 第一章 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞生长的影响及SCFA和pH的作用 |
| 第一节 日粮精料水平影响山羊瘤胃上皮生长的体内研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验设计与动物饲养 |
| 1.2 日粮化学组成检测 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 瘤胃pH及SCFA测定 |
| 1.5 瘤胃上皮形态观察 |
| 1.5.1 瘤胃上皮组织切片的制作 |
| 1.5.2 H.E染色 |
| 1.5.3 切片观察和分析 |
| 1.6 流式细胞术检测山羊瘤胃上皮细胞周期 |
| 1.6.1 瘤胃上皮细胞的分离与固定 |
| 1.6.2 碘化丙啶(PI)染色与流式细胞仪检测 |
| 1.7 TUNEL检测瘤胃上皮细胞凋亡指数 |
| 1.7.1 样品预处理 |
| 1.7.2 标记与检测 |
| 1.7.3 样品分析 |
| 1.8 RNA提取及Real-time PCR |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 日粮精料水平对山羊瘤胃液pH值和SCFA浓度的影响 |
| 2.2 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞层数和细胞数量的影响 |
| 2.3 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞周期的影响 |
| 2.4 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞凋亡的影响 |
| 2.5 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞增殖相关基因mRNA表达的影响 |
| 2.6 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 第二节 酸性pH及SCFA处理对原代培养山羊瘤胃上皮细胞的增殖和凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品采集和细胞培养 |
| 1.2 RNA提取及Real-time PCR |
| 1.3 数据分析 |
| 2. 结果与分析 |
| 2.1 酸性pH(pH6.8)及SCFA处理对原代培养山羊瘤胃上皮细胞增殖相关基因mRNA表达的影响 |
| 2.2 酸性pH(pH6.8)及SCFA处理对原代培养山羊瘤胃上皮细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮生长的影响及SCFA和酸性pH的作用 |
| 第一节 日粮精料水平影响奶牛瘤胃上皮生长的体内研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验设计与动物饲养 |
| 1.2 日粮化学组成检测 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 瘤胃pH及SCFA测定 |
| 1.5 瘤胃上皮形态观察 |
| 1.5.1 瘤胃上皮组织切片的制作 |
| 1.5.2 H.E染色 |
| 1.5.3 切片观察和分析 |
| 1.6 流式细胞术检测奶牛瘤胃上皮细胞周期 |
| 1.6.1 瘤胃上皮细胞的分离与固定 |
| 1.6.2 碘化丙啶(PI)染色与流式细胞仪检测 |
| 1.7 TUNEL检测瘤胃上皮细胞凋亡指数 |
| 1.7.1 样品预处理 |
| 1.7.2 标记与检测 |
| 1.7.3 样品分析 |
| 1.8 RNA提取及Real-time PCR |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 日粮精料水平对奶牛瘤胃液pH值和SCFA浓度的影响 |
| 2.2 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞层数和细胞数量的影响 |
| 2.3 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞周期的影响 |
| 2.4 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞凋亡的影响 |
| 2.5 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞增殖相关基因mRNA表达的影响 |
| 2.6 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 第二节 酸性pH及SCFA处理对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞细胞增殖和细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品采集和细胞培养 |
| 1.2 样品采集和细胞培养 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 酸性pH(pH6.8)及SCFA处理对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞增殖相关基因mRNA表达的影响 |
| 2.2 酸性pH(pH6.8)及SCFA处理对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 TNFα对奶牛瘤胃上皮细胞增殖和细胞凋亡的影响及其机制研究 |
| 第一节 日粮精料水平影响奶牛瘤胃上皮cyclin D1, CDK4, A-Caspase 3,TNFα及其受体表达的体内研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验设计与动物饲养 |
| 1.2 日粮化学组成检测 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 蛋白提取及Western-blot检测 |
| 1.5 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮cyclin D1,CDK4和A-Caspase 3蛋白表达的影响 |
| 2.2 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮TNFα,TNFR1,TNFR2和TRADD蛋白表达的影响 |
| 2.3 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮ERK1/2蛋白表达的影响 |
| 2.4 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮JNK蛋白磷酸化的影响 |
| 2.5 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮p38蛋白表达的影响 |
| 第二节 TNFα对影响原代培养奶牛瘤胃上皮细胞cyclin D1,CDK4和A-Caspase 3表达的体外研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品采集和细胞培养 |
| 1.2 RNA提取及Real-time PCR |
| 1.3 蛋白提取及Western-bolt |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 TNFα对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞ERK1/2蛋白磷酸化的影响 |
| 2.2 TNFα对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞JNK蛋白磷酸化的影响 |
| 2.3 TNFα对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞p38蛋白磷酸化的影响 |
| 2.4 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞cyclin D1与CDK4mRNA表达的影响 |
| 2.5 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞Caspase 3 mRNA表达的影响 |
| 2.6 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞cyclin D1蛋白表达的影响 |
| 2.7 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞CDK4蛋白表达的影响 |
| 2.8 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞A-caspase 3蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 本文创新点 |
| 致谢 |
| 博士期间发表和完成的论文 |
（5）蛙皮素及其相似肽与肿瘤关系的研究进展（论文提纲范文）
| 1 蛙皮素及其受体的分类、生理功能 |
| 1.1 蛙皮素分类、生理功能 |
| 1.2 蛙皮素受体的分类 |
| 2 蛙皮素及其相似肽与不同恶性肿瘤的关系 |
| 3 蛙皮素特异性受体拮抗剂在抗肿瘤方面的作用 |
| 3.1蛙皮素特异性受体拮抗剂的分类 |
| 3.2 蛙皮素特异性受体拮抗剂的抗肿瘤活性 |
| 4 展望 |
（6）淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 淫羊藿概述 |
| 1.2 淫羊藿苷作用机理研究进展 |
| 1.3 淫羊藿素的来源与活性 |
| 1.4 问题分析和研究思路 |
| 2 实验1 淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞增殖、分化的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3 实验2 淫羊藿素通过ER受体和p38MAPK通路影响MC3T3-E1Subclone14细胞的分化活性 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 4 实验3 淫羊藿素通过BMPs/Smads通路影响MC3T3-E1Subclone14细胞的分化活性 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）胰高血糖素样肽-2与断奶仔猪肠道发育、适应的关系及作用机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 一、文献综述 |
| 1.GLP-2在机体内的代谢 |
| 1.1 GLP-2的合成和分泌 |
| 1.2 GLP-2的降解及清除 |
| 2.GLP-2的肠道营养作用 |
| 2.1 对胃肠道强有力的、特异性的营养效果 |
| 2.1.1 对肠道重量和粘膜形态学的影响 |
| 2.1.2 刺激肠细胞的增殖、迁移和分化 |
| 2.1.3 抑制肠细胞凋亡和蛋白质水解 |
| 2.2 对肠道养分吸收及代谢的影响 |
| 2.3 降低肠道对大分子物质的通透性,减少细菌移位,抑制炎性细胞因子表达 |
| 2.4 对机体采食量的调控 |
| 2.5 GLP-2与肠道疾病的治疗 |
| 3.GLP-2影响仔猪肠道发育及功能的研究进展 |
| 3.1 猪GLP-2的代谢特征及生理效应 |
| 3.2 GLP-2对胎猪、新生仔猪肠道发育的影响 |
| 3.3 GLP-2影响仔猪的肠道或集体的养分吸收利用 |
| 3.4 GLP-2在仔猪上发挥作用时的特点及影响因素 |
| 3.4.1 GLP-2发挥作用的剂量依赖效应 |
| 3.4.2 DPP-Ⅳ酶活性的高低及DPP-Ⅳ抑制剂的应用 |
| 3.4.3 断奶仔猪肠道受到植物抗原攻击时GLP-2的作用 |
| 4.研究中尚不清楚的几个问题 |
| 4.1 GLP-2是否与断奶仔猪肠道发育及适应有关 |
| 4.2 GLP-2与断奶仔猪肠道发育的剂量-效应关系 |
| 4.3 使用DPP-Ⅳ抑制剂能否调节GLP-2对断奶仔猪肠细胞的作用效果 |
| 4.4 仔猪肠道受到抗原攻击时肠上皮细胞对GLP-2的敏感性 |
| 4.5 其他尚不清楚的问题 |
| 二、研究方案及目的意义 |
| 1.研究方案 |
| 1.1 研究技术路线 |
| 1.2 具体方案 |
| 试验1 不同基因型仔猪断奶前后GLP-2的分泌及与肠道发育的关系 |
| 试验2 不同浓度GLP-2对28日龄断奶仔猪肠上皮细胞完整性及其增殖的影响 |
| 试验3 GLP-2和DPP-Ⅳ抑制剂联合使用对断奶仔猪肠上皮细胞的影响 |
| 试验4 GLP-2对β-伴球蛋白损伤的肠上皮细胞的保护、修复作用 |
| 2.研究目的及意义 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 研究意义 |
| 三、试验研究内容 |
| 试验1 不同基因型仔猪断奶前后GLP-2的分泌规律及与肠道发育的关系 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 试验动物与分组 |
| 1.2 试验日粮 |
| 1.3 饲养管理 |
| 1.4 样品采集 |
| 1.5 测定指标及测定方法 |
| 1.6 数据处理 |
| 2.试验结果 |
| 2.1 小肠发育参数及血清中GLP-2浓度 |
| 2.2 不同基因型仔猪30日龄小肠绒毛高度与血清GLP-2浓度的相关、回归分析 |
| 3.讨论 |
| 3.1 不同基因型仔猪在断奶时效场重量、长度和绒毛高度的差异 |
| 3.2 不同基因型仔猪断奶前后GLP-2的分泌变化 |
| 3.3 仔猪在断奶时绒毛发育的形态差异及与GLP-2的关系 |
| 4.小结 |
| 试验2 不同浓度GLP-2对28日龄断奶仔猪肠上皮细胞完整性及其增殖的影响 |
| 试验3 GLP-2和DPP-Ⅳ抑制剂联合使用对断奶仔猪肠上皮细胞的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 试验设计 |
| 1.2 试验对象 |
| 1.3 试验材料 |
| 1.4 试验方法 |
| 1.5 实验数据处理 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 DPP-Ⅳ抑制剂对断奶仔猪小肠上皮细胞的影响 |
| 2.2 GLP-2与DPP-Ⅳ抑制剂联合使用对断奶仔猪小肠上皮细胞的影响 |
| 3.讨论 |
| 3.1 DPP-Ⅳ抑制剂(KR62436)对肠道发育及肠上皮细胞的影响 |
| 3.2 GLP-2和DPP-Ⅳ抑制剂对28日龄断奶仔猪肠上皮细胞的影响 |
| 3.3 GLP-2和DPP-Ⅳ抑制剂联合利用影响断奶仔猪肠上皮细胞发育的可能机理 |
| 4.小结 |
| 试验4 GLP-2对β-伴球蛋白损伤的肠上皮细胞的保护、修复作用 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 试验对象 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 试验材料 |
| 1.4 试验方法 |
| 1.5 实验数据处理 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 β-伴球蛋白细胞攻毒模型建立 |
| 2.1.1 细胞形态观察 |
| 2.1.2 β-伴球蛋白对细胞存活、增殖的影响 |
| 2.1.3 β-伴球蛋白对细胞代谢和细胞完整性的影响 |
| 2.2 添加GLP-2对损伤的仔猪肠上皮细胞的影响 |
| 2.2.1 细胞形态观察 |
| 2.2.2 GLP-2对致敏细胞存活及增殖的影响 |
| 2.2.3 hGLP-2对致敏细胞的代谢和完整性的影响 |
| 3.讨论 |
| 3.1 β-伴球蛋白对28日龄断奶仔猪肠上皮细胞的影响 |
| 3.2 GLP-2对β-伴球蛋白攻毒的28日龄断奶仔猪肠上皮细胞的影响 |
| 3.3 GLP-2对致敏肠上皮细胞可能的作用机理 |
| 4.小结 |
| 四、全文讨论 |
| 1.仔猪断奶前后肠道发省的适应性变化及GLP-2所起的作用 |
| 2.GLP-2调节断奶仔影响肠上皮细胞增殖、代谢、凋亡的作用特点 |
| 2.1 GLP-2发挥作用的剂量-效应关系 |
| 2.2 DPP-Ⅳ抑制剂与GLP-2发挥作用的相互关系 |
| 2.3 GLP-2在细胞受到致敏性损伤后的细胞保护或修复作用 |
| 3.使用体外培养的肠上皮细胞研究GLP-2的营养生理效应的利弊 |
| 五、结论 |
| 1.结论 |
| 2.本研究的创新点及有待进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（9）β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪生长轴激素的影响及其机理研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 引言 |
| 第一篇 文章综述和研究思路 |
| 第一章 NSP和NSP酶制剂类饲料添加剂的研究概况 |
| 1 大麦在中国的种植分布 |
| 2 大麦中的抗营养因子NSP |
| 3 NSP的物理特性 |
| 4 NSP在猪体内的消化、吸收和代谢 |
| 4.1 NSP在猪体内的消化、吸收 |
| 4.2 NSP在猪体内的代谢 |
| 5 NSP对猪的营养特性 |
| 5.1 NSP对猪的正面营养作用 |
| 5.2 NSP对猪的负面营养作用 |
| 6 日粮中NSP抗营养机理 |
| 7 克服NSP抗营养作用的措施 |
| 8 NSP酶制剂的安全性 |
| 9 NSP酶制剂在猪生产中的应用效果 |
| 10 NSP酶制剂的作用机理 |
| 11 结语 |
| 第二章 GH-IGF-I轴和胃肠激素胃泌素的研究概述 |
| 1 GH-IGF-I轴 |
| 1.1 GH-IGF-I轴的组成 |
| 1.2 GH |
| 1.3 IGF-I |
| 2 GAS |
| 2.1 GAS的分类 |
| 2.2 GAS的生理功能 |
| 2.3 GAS合成和分泌的调节 |
| 3 结语 |
| 第三章 本研究的目的、意义及主要内容 |
| 第二篇 研究工作报告 |
| 第四章 基因克隆及半定量RT-PCR法测定基因mRNA丰度条件的优化 |
| 第一节 GAS、GH、IGF-I和β-actin基因片段的克隆 |
| 1 基因克隆策略 |
| 2 试验材料 |
| 2.1 动物材料 |
| 2.2 菌种及载体 |
| 2.3 仪器设备和试剂 |
| 2.4 引物 |
| 2.5 培养基及主要试剂的配制 |
| 3 试验方法 |
| 3.1 总RNA的提取 |
| 3.2 RNA含量的测定 |
| 3.3 反转录 |
| 3.4 PCR反应 |
| 3.5 PCR产物电泳,检测目的条带是否与设计大小相等 |
| 3.6 PCR产物的割胶回收 |
| 3.7 割胶回收的PCR产物与pGEM-T easy Vector连接 |
| 3.8 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备与目的DNA的热激转化 |
| 3.9 重组克隆的筛选、重组质粒的提取与鉴定 |
| 3.10 重组DNA核苷酸序列测定分析 |
| 4 试验结果 |
| 4.1 GAS、GH、IGF-I和β-actin基因RT-PCR产物电泳结果 |
| 4.2 PCR产物克隆及重组质粒鉴定 |
| 4.3 重组克隆中插入片段的序列分析 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第二节 半定量RT-PCR法测定GAS、IGF-I和GH mRNA丰度的条件优化 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 动物材料 |
| 1.2 仪器设备和试剂 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 总RNA的提取 |
| 2.2 RNA含量的测定 |
| 2.3 反转录 |
| 2.4 PCR反应 |
| 2.5 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 Mg~(2+)浓度对GAS、IGF-I、GH及内标β-actin基因扩增效率的影响 |
| 3.2 循环数对GAS、GH、IGF-I及内标β-actin基因扩增效率的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五章 大麦饲粮中添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪胃窦GAS mRNA丰度、血清GAS水平及其它与生长有关激素和生化指标的影响 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 β-葡聚糖、木聚糖复合酶 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 试验日粮 |
| 1.4 试验设计和饲养管理 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 样品测定 |
| 2.3 数据分析及统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 生长性能 |
| 3.2 血清生化指标 |
| 3.3 血清激素水平 |
| 3.4 胃窦GAS mRNA丰度 |
| 4 讨论 |
| 4.1 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪生长性能的影响 |
| 4.2 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪血清生化指标的影响 |
| 4.3 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪血清生长相关激素水平的影响 |
| 4.4 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对胃窦GAS mRNA丰度的影响 |
| 5 小结 |
| 第六章 大麦饲粮中添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪GH-IGF-I轴的影响及其机理探讨 |
| 第一节 大麦饲粮中添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪GH-IGF-I生长轴的影响 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 β-葡聚糖、木聚糖复合酶 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 试验日粮 |
| 1.4 试验设计和饲养管理 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 样品测定 |
| 2.3 数据分析及统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 生长激素脉冲分泌模式及其特征 |
| 3.2 屠宰血清IGF-I水平 |
| 3.3 垂体GH丰度 |
| 3.4 肝脏IGF-I丰度 |
| 4 讨论 |
| 4.1 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪血清GH动态分泌及腺垂体GHmRNA丰度的影响 |
| 4.2 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪血清IGF-I水平及肝脏IGF-ImRNA丰度的影响 |
| 5 小结 |
| 第二节 大麦饲粮中添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪GH-IGF-I生长轴影响的机理探讨 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 动物组织 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 试剂的配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 猪腺垂体细胞和肝脏细胞的原代培养 |
| 2.2 原代培养细胞的生长状态及形态观察 |
| 2.3 细胞增殖试验 |
| 2.4 细胞周期分析 |
| 2.5 细胞培养液中激素浓度测定 |
| 2.6 数据分析及统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 细胞形态 |
| 3.2 细胞增殖率 |
| 3.3 细胞周期 |
| 3.4 激素浓度 |
| 4 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第七章 大麦饲粮中添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪内源消化酶活性和消化器官形态结构的影响 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 β-葡聚糖、木聚糖复合酶 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 试验日粮 |
| 1.4 试验设计和饲养管理 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 样品测定 |
| 2.3 数据分析及统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 内脏器官相对重率 |
| 3.2 胰脏消化酶活性 |
| 3.3 胃粘膜和胃内容物消化酶活性 |
| 3.4 空肠、回肠粘膜消化酶活性 |
| 3.5 消化器官形态 |
| 4 讨论 |
| 4.1 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对内脏器官相对重率的影响 |
| 4.2 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对胰脏消化酶活性的影响 |
| 4.3 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对胃肠道消化酶活性的影响 |
| 4.4 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对消化器官形态结构的影响 |
| 5 小结 |
| 第八章 大麦饲粮中添加β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪肠道菌群、细菌酶活性和总SCFA浓度的影响 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 β-葡聚糖、木聚糖复合酶 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 试验日粮 |
| 1.4 试验设计和饲养管理 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 样品测定 |
| 2.3 数据分析及统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 腹泻频率 |
| 3.2 细菌数量 |
| 3.3 细菌酶活性 |
| 3.4 盲肠内容物pH、乳酸和总SCFA浓度 |
| 4 讨论 |
| 4.1 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪腹泻频率的影响 |
| 4.2 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对盲肠菌群的影响 |
| 4.3 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对细菌酶活性的影响 |
| 4.4 β-葡聚糖、木聚糖复合酶对盲肠内容物pH和总SCFA含量的影响 |
| 5 小结 |
| 第三篇 提示、创新点及后续研究展望 |
| 提示 |
| 创新点 |
| 后续研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录 pGEM-T easy vector图谱 |
| 作者简历 |
（10）脊髓损伤模型大鼠的胃肠动力障碍及其电针调整作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分:文献研究 |
| 1 与脊髓损伤相关的胃肠动力障碍的现代研究进展 |
| 1.1 脊髓损伤后的胃肠道动力障碍的概况 |
| 1.2 脊髓损伤的机理 |
| 1.3 胃肠动力病新概念和曼谷分类 |
| 1.4 胃肠动力障碍的发生机制 |
| 1.5 脊髓损伤后为胃肠动力紊乱机制 |
| 1.6 脊髓损伤后消化道动力紊乱表现 |
| 1.7 脊髓损伤后胃肠道动力紊乱的治疗 |
| 2 脊髓损伤和胃肠动力障碍的针灸治疗的研究进展 |
| 2.1 针灸治疗脊髓损伤的研究进展 |
| 2.2 针灸调节胃肠动力障碍的研究 |
| 3 祖国医学对脊髓损伤的研究 |
| 3.1 脊髓损伤的中医病机 |
| 3.2 脊髓损伤的中医治疗 |
| 4 祖国医学对胃肠动力障碍的研究 |
| 4.1 中医对胃肠动力障碍的病因病机的研究进展 |
| 4.2 中医药治疗胃肠动力障碍的进展 |
| 5 足三里的研究进展 |
| 5.1 足三里的定位和层次结构 |
| 5.2 针刺足三里对胃肠功能的影响 |
| 5.3 针刺足三里穴对脑肠肽的影响 |
| 5.4 足三里反射途径的研究 |
| 第二部分:实验研究 |
| 实验一 脊髓损伤大鼠模型的建立及胃肠动力障碍 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验二 脊髓损伤对脑肠肽的影响和电针的调整作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验三 脊髓损伤大鼠NOS的改变和电针的调整作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验四 脊髓损伤大鼠胃窦MTL-R1AmRNA及结肠SSTR_2mRNA表达的改变和电针的调整作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第三部分:讨论 |
| 1 脊髓损伤大鼠模型的选择依据和评估 |
| 1.1 脊髓损伤大鼠模型的理论依据 |
| 1.2 脊髓损伤模型的评估标准 |
| 1.3 脊髓损伤大鼠模型的评估分析 |
| 2 脊髓损伤对胃肠动力的影响和电针的调整作用 |
| 2.1 脊髓损伤后胃肠动力障碍的理论依据 |
| 2.2 足三里的选择依据 |
| 2.3 电针频率的选择依据 |
| 2.4 对照组的选择依据 |
| 2.5 实验结果的分析 |
| 3 脊髓损伤对脑肠肽的影响和电针的调整作用 |
| 3.1 胃动素 |
| 3.2 胃泌素 |
| 3.3 血管活性肠肽 |
| 3.4 生长抑素 |
| 4 NOS在脊髓损伤后胃肠动力障碍中的改变和电针的调整作用 |
| 4.1 指标的选择依据 |
| 4.2 实验结果的分析 |
| 5 胃窦MTL-R1AmRNA及结肠SSTR_2mRNA的表达在脊髓损伤后胃肠动力障碍中的改变和电针的调整作用 |
| 5.1 指标选择的依据 |
| 5.2 实验结果的分析 |
| 第四部分:结语 |
| 1 本课题的结论 |
| 2 本课题创新之处 |
| 3 工作中的不足 |
| 4 展望 |
| 参考文献 |
| 附录:英文缩略表 |
| 在校期间发表论文 |
| 致谢 |
四、蛙皮素对新生兔胃肠形态及细胞增殖的调节研究（论文参考文献）
- [1]177Lu标记寡聚苯乙炔修饰RM26的体内外性质研究[D]. 付华霞. 西南医科大学, 2021(01)
- [2]慢性热应激对肉鸡采食调节机制的影响及牛磺酸缓解作用研究[D]. 何晓芳. 南京农业大学, 2019(08)
- [3]黄连解胰汤通过抑制肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化介导抗胰腺癌的作用及其机制[D]. 陈凯. 苏州大学, 2018(04)
- [4]日粮精料水平对瘤胃上皮生长的影响及调节作用研究[D]. 桂红兵. 南京农业大学, 2018(07)
- [5]蛙皮素及其相似肽与肿瘤关系的研究进展[J]. 李楠,张忠. 临床荟萃, 2014(12)
- [6]淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响[D]. 朱晓峰. 暨南大学, 2009(09)
- [7]胰高血糖素样肽-2与断奶仔猪肠道发育、适应的关系及作用机理研究[D]. 贾刚. 四川农业大学, 2009(07)
- [8]生长因子与消化性溃疡[A]. 曾菁,谭庆华. 2008年贵州省医学会消化及内镜学分会学术大会论文汇编, 2008
- [9]β-葡聚糖、木聚糖复合酶对断奶仔猪生长轴激素的影响及其机理研究[D]. 范成莉. 浙江大学, 2008(04)
- [10]脊髓损伤模型大鼠的胃肠动力障碍及其电针调整作用的研究[D]. 洪丽莉. 广州中医药大学, 2008(09)