一、TUNEL法检测Vc对光照后兔RPE细胞凋亡的影响（论文文献综述）
张庆飞[1]（2020）在《基于铂前药的多功能基因载体用于肿瘤协同治疗》文中研究指明化疗是目前癌症治疗中最为有效的三大传统治疗手段之一,其中,金属铂类化合物是目前应用最广泛的一类化疗药物,在临床中参与一半以上的癌症治疗。然而,金属铂类化合物由于缺乏选择性,在发挥抗肿瘤作用的同时,对正常组织或器官产生较大的毒副作用;同时,溶解度低、血液循环时间短、易被代谢等问题导致其生物利用率较低;更为严重的是,先天或后天因多次化疗产生的耐药性,极大地限制了铂类药物的治疗效果。作为一种能从遗传物质基础上治愈疾病的新兴技术,基因疗法在癌症治疗中发挥着越来越重要的作用。相比于化疗药物,基因药物靶点明确、选择性好、能够特异性调控各种致病基因的表达,且无耐药性。因此,针对肿瘤治疗中的耐药性和异质性等问题,通过联合基因治疗和铂药化疗,在基因水平调控癌细胞增殖状态的同时联合化疗药物,具有良好的临床应用前景。考虑到小分子铂药用于化疗所面临的问题以及基因药物在体内循环过程中易被降解、清除等不利因素,通过简单的设计制备铂药和基因药物的共递送系统用于实现化疗和基因治疗的协同作用具有重要意义。近年来,纳米药物递送系统已在基础研究和临床应用中展现出诸多优势,如改善药物溶解性、延长药物血液循环时间、增加靶向部位药物浓度等。目前,有研究工作实现了将铂药和基因共担载于纳米载体,并取得了较好的协同治疗效果。然而,上述纳米药物递送系统面临铂药和基因的担载量较低、缺乏有效的溶酶体逃逸能力、铂药的释放和基因的卸载较难且不受控制等问题,这些极大地限制了联合治疗效率的最大化。因此,构建新型的共输送体系用于同时解决以上问题,对推进联合治疗的发展并进一步推广到临床更有理论指导意义。相对于经典的二价铂药,四价铂前药具有毒性较低的优势,且可以在外界光照条件下或肿瘤细胞内较高还原环境下被还原成相应的二价铂药,因此可以在肿瘤部位特定的响应性释放,从而实现肿瘤精准治疗。将四价铂前药通过化学键合或单体聚合的方式引入到高分子侧链或主链,利用其疏水性、光响应性或还原响应性等制备刺激响应性纳米药物,可以提高铂药的生物利用度、降低系统毒性、增强化疗效果。基于这些优势,本论文通过设计制备一系列刺激响应性含铂前药多功能纳米载体用于联合不同基因治疗技术,利用细胞内还原微环境或外部光照条件,实现铂药和基因可控共递送,达到最大化联合治疗效果。首先,我们制备了一种主链含光敏四价铂前药的高分子纳米递送系统（CNPptCP/si（c-fos））用于光控Pt（Ⅳ）和siRNA的共递送。通过将Pt（Ⅳ）作为聚合单体引入到高分子主链中得到光敏感的高分子基因载体,担载能沉默铂耐药基因c-fos的siRNA（si（c-fos））,并在复合纳米粒表面构建了透明质酸的遮蔽层,来增加其稳定性并赋予其肿瘤靶向能力。相比于之前的铂药和基因共递送系统,该体系具有以下优势:1)以聚前药为载体,避免了复杂的担载过程且药物含量较高;2)在温和光照条件下,CNPptCP/si（c-fos）能有效产生N3·,创新性地用于促进溶酶体逃逸;3)在光控条件下实现按需Pt（Ⅱ）的释放和基因卸载;4)具有很好的稳定性及肿瘤靶向能力,提高了肿瘤部位药物蓄积量。在光照条件下,CNPPtCP/si（c-fos）在细胞水平及动物水平实验均能有效地沉默耐药基因c-fos,从而逆转铂耐药卵巢癌的耐药性,实现了协同光化学疗法（PACT）和RNAi有效联合。为了进一步增加光的穿透深度以及丰富纳米共递送载体的功能,我们以上转换纳米粒（UCNP）和光敏铂聚前药（PtP）为基础制备了一个多功能纳米共递送系统（UCNP@Pt@siRNA）。实验结果表明,UCNP@Pt@siRNA在体内表现出良好的核磁共振成像（MRI）、上转换荧光成像（UCL）及CT成像能力。在980 nm NIR光激发下,UCNP可以发射出紫外到可见光激活表面PtP,在释放出Pt（Ⅱ）的同时促进了 siRNA卸载。细胞及动物实验结果均证明该纳米系统在NIR光照下可实现有效基因沉默并增强了联合治疗的效果。该纳米系统为联合铂药和基因治疗提供了一种更方便、切实可行的策略,具有很好的临床应用前景。至今为止,用同一纳米载体将铂药化疗和CRISPR/Cas9基因编辑技术联合用于肿瘤治疗的研究还没有。因此,我们设计和制备了一种简单的Pt（Ⅳ）前药骨架的聚合物纳米平台（NPCSPt）用于CRISPR/Cas9系统的递送（NPCSPt/pEZH2）。实验表明,NPCSPt/pEZH2能将CRISPR/Cas9系统有效递送进细胞内并从溶酶体逃逸。随后,NPCSPt/pEZH2中的聚合物被癌细胞中的还原剂以链消除的模式降解,同时释放出CRISPR/Cas9系统和Pt（Ⅱ）,实现了对目标基因EZH2的有效编辑。在沉默EZH2后会造成H3K27me3蛋白的降低,使得细胞核中染色体结构变得更松散,增加Pt（Ⅱ）与核DNA的结合,造成更多的DNA损伤及进一步癌细胞的杀伤。最后,NPCSPt/pEZH2显着抑制了前列腺癌细胞的增殖以及皮下前列腺癌移植瘤的生长。
李莹[2]（2020）在《骨髓间充质干细胞对光感受器细胞自噬与溶酶体功能影响的研究》文中研究说明研究背景:饥饿或压力应激状态下,细胞自噬启动,包裹代谢废物及损伤细胞器形成自噬体并最终进入溶酶体代谢。该过程有效、稳定运行对细胞稳态的维持至关重要。已有研究表明,溶酶体功能障碍与神经系统疾病密切相关,多种神经系统疾病的病理过程中均伴有溶酶体相关功能异常,而溶酶体功能障碍或基因突变导致的代谢异常类疾病亦会引起严重的神经功能障碍。作为视觉传导的初级神经元,多种病理条件下视网膜光感受器细胞功能受损或细胞死亡将引起不同程度视力障碍。目前对其死亡机制的研究尚集中于氧化应激,内质网应激,线粒体损伤,细胞凋亡等领域。随着近年来,溶酶体功能研究的逐步深入,其功能状态与光感受器细胞的相关联系日益增多。疾病过程中细胞自噬及溶酶体代谢的异常虽已引起学者注意,却多止步于自噬现象的发现,缺少针对自噬-溶酶体代谢过程的探讨。mTOR是参与调节细胞代谢、合成、增殖、死亡等过程的关键信号因子。近年来的研究表明,mTOR可定位于溶酶体,并对自噬起始、溶酶体生物合成、溶酶体再生等过程均有重要调节作用。此外,mTOR在视网膜退行病变,如视网膜色素变性及年龄相关黄斑变性疾病中,促进光感受器细胞的存活作用亦被多个研究证实。目前的研究认为,mTOR通过促进细胞能量代谢、生物合成及抗凋亡作用促进压力应激下的光感受器细胞存活。但此过程中,是否涉及细胞自噬及溶酶体功能的调节作用尚不得而知。骨髓间充质干细胞,具有多向分化潜能,其在损伤细胞、组织修复方面的作用使其成为细胞疗法研究的热点。在视网膜疾病领域,干细胞对于视网膜神经节细胞、光感受器细胞、视网膜色素上皮的保护作用已经得到证实。目前认为,干细胞主要通过旁分泌、细胞分化替代影响病损组织细胞修复。在中枢神经系统疾病的相关干细胞研究中,有报道指出干细胞可促进神经元内溶酶体代谢,减轻神经元内溶酶体沉积改善细胞表型异常。这种机制是否存在于干细胞对损伤的光感受器细胞的保护作用中尚待证实。本研究旨在明确光感受器细胞损伤过程中,应激状态的光感受器细胞是否存在自噬-溶酶体代谢异常;骨髓间充质干细胞是否能够通过调节溶酶体代谢过程保护压力状态下的光感受器细胞。目的:应用MNU诱导661w细胞损伤建立光感受器细胞损伤体外实验模型,评价细胞损伤过程中细胞自噬起始、自噬过程及溶酶体代谢情况;通过BMSCs与661w细胞共培养,观察干细胞对661w细胞的保护作用,并明确其对细胞自噬及溶酶体功能的影响。方法:1、MNU诱导661w细胞损伤模型建立与评价应用MNU浓度为100、300、500、1000ug/ml的培养基培养661w细胞,MTS法检测培养不同时间细胞活力变化,以确定后续实验所需作用浓度;应用500ug/ml MNU培养基培养661w细胞,观察随MNU作用时间延长细胞形态变化、DCFH-DA探针标记活性氧激活情况、western blot（WB）检测细胞凋亡蛋白caspase3表达水平,以评价MNU作用对细胞形态、氧化应激及细胞凋亡的影响。2、观察661w细胞损伤过程中细胞自噬及溶酶体代谢情况为明确MNU诱导细胞损伤过程中细胞自噬的情况,应用MNU500ug/ml的培养基培养细胞,分别于作用不同时间,电镜下观察细胞内自噬样囊泡形态,WB检测自噬相关蛋白LC3、P62表达情况;为评定该过程中是否存在自噬流受阻,应用溶酶体抑制剂bafilomycin A1与MNU共同作用24小时,WB检测LC3、P62表达情况;为明确抑制自噬对细胞的影响,应用自噬抑制剂3MA与MNU共同作用24小时,MTS法检测自噬抑制对损伤细胞细胞活力的影响,WB法检测抑制自噬对LC3、casepase3表达的影响;为观察损伤细胞溶酶体及溶酶体内酶分布情况,MNU作用24小时,应用lysosome tracker、cathepsin标记细胞溶酶体及其内的蛋白酶;并用WB法检测mTOR磷酸化水平以确定细胞损伤过程中是否存在mTOR活性抑制。3、在transwell共培养体系中评价干细胞对光感受器细胞保护作用于大鼠股、胫骨骨髓中分离、提取BMSCs原代培养,并行流式细胞仪干细胞表面标记物:CD105、CD90、CD44、CD34、CD45鉴定;通过transwell小室内接种BMSCs建立损伤的661w细胞、BMSCs共培养体系,实验分为正常组、MNU组及共培养组。同样方法检测MNU处理24小时,661w细胞活力、活性氧激活情况,并检测MNU处理16、24小时caspase3蛋白表达情况,明确干细胞对损伤细胞的影响。4、观察干细胞对661w细胞自噬和溶酶体功能的影响MNU处理16或24小时,同样方法检测细胞内自噬样囊泡形态、LC3和P62表达情况,溶酶体及溶酶体酶细胞内分布,mTOR激活情况,以评价干细胞对细胞损伤过程中细胞自噬及溶酶体代谢的影响。结果:1、100、300ug/ml MNU对661w细胞活力影响有限;500、1000ug/ml MNU明显降低细胞活力,呈时间依赖趋势;选取500ug/ml作为后续实验浓度。随培养时间延长,细胞内致密颗粒增多,细胞融合度降低;细胞内活性氧探针荧光增强;凋亡蛋白caspase3活性形式表达增加;2、MNU处理24小时,细胞内自噬样囊泡数量、直径、面积增加;MNU作用过程中,自噬相关蛋白LC3II、LC3II/I水平增加,同时伴有自噬底物标记物P62累积;MNU处理同时添加溶酶体抑制剂bafilomycin A1抑制自噬体与溶酶体融合,LC3II、LC3II/I水平上升,P62累积增加;MNU处理同时添加3MA自噬抑制剂可抑制细胞自噬-降低细胞LC3II、LC3II/I蛋白表达水平,亦减低细胞活性,并可促进细胞活性形式caspase3的表达;MNU处理24小时,相比于正常细胞散在分布的荧光信号,溶酶体探针荧光聚集状、趋向细胞核周分布,溶酶体组织蛋白酶染色荧光信号斑点状分布;细胞内磷酸化mTOR水平在MNU处理16-24小时明显下降;3、骨髓间充质干细胞原代提取、分离培养,传至第三代形态稳定,流式细胞仪干细胞表面标记物鉴定CD105、CD90、CD44表达阳性,CD34、CD45表达阴性;MNU作用同时给与干细胞共培养,观察干细胞对损伤细胞的影响;相比于MNU组,共培养组细胞活性明显上升、活性氧标记探针荧光减弱;活性形式caspase3表达减低;4、观察干细胞对损伤细胞自噬及溶酶体代谢的影响:相比于MNU组,共培养组细胞内自噬样囊泡数量减少、直径、面积减小;MNU作用16小时,共培养组LC3II、LC3II/I水平与MNU组无显着差异,P62累积减少;MNU作用24小时,共培养组LC3II水平较MNU组明显减低,P62累积减少;MNU作用24小时,共培养组细胞内,溶酶体荧光探针及溶酶体酶荧光信号趋向分散分布;MNU作用16小时,共培养组磷酸化mTOR水平较MNU组增加。结论:1、MNU可诱导661w细胞损伤,过程中伴随细胞活性下降,活性氧激活及凋亡增加等病理过程符合视网膜病变过程中光感受器细胞损伤机制。故此模型可用于针对光感受器细胞损伤机制的体外研究;2、MNU诱导661w细胞损伤过程中,持续的自噬激活造成自噬样囊泡增大、代谢底物累积、溶酶体代谢障碍;而抑制该过程中的细胞自噬后,加重细胞损伤。即细胞应激状态下,由持续的细胞自噬收集转运的代谢底物不能完全被溶酶体降解,最终导致细胞死亡;此过程中伴随mTOR活性抑制;3、骨髓间充质干细胞可在提升细胞活力、减弱活性氧激活及减少细胞凋亡方面保护受损的661w细胞;4、骨髓间充质干细胞可减少细胞内自噬样囊泡的直径和面积,减少代谢底物累积、促进溶酶体在细胞内再分布,即干细胞促进损伤细胞溶酶体内底物代谢。此过程中伴随mTOR活性上调。综上,光感受器细胞损伤过程中伴有持续性自噬激活引起的溶酶体代谢障碍,骨髓间充质干细胞可以促进溶酶体代谢,减少细胞死亡。上述过程的发生伴随mTOR活性变化。
雷莉[3]（2020）在《短肽自组装纳米材料的构建及其生物分析应用》文中认为短肽因其结构简单、可调、功能多样、成本较低等优点,在生物纳米技术领域备受关注。基于短肽自组装构建的纳米材料具有简单的制备工序、良好的生物相容性、较大的比表面积、易于修饰改造、较深的组织渗透性以及较高的生物活性等优势,已经成为生物催化、药物/基因控制释放、功能材料以及临床治疗等领域的热点研究对象。通过合理设计短肽分子结构以及给予特定的环境刺激,短肽可以通过多重非共价键相互作用自发的组织或聚集为具有特异形态和功能的纳米结构。短肽优越的生物化学性能为各种疾病的研究、诊断和治疗提供了重要的分子工具,十分有利于智能、仿生、多价、功能纳米材料的构建。作为生物同源的创新生物材料,短肽自组装纳米材料与荧光分析相结合有益于多功能荧光纳米探针的构建。这些短肽荧光纳米探针在生物分析应用中具有特异靶向性、高选择性、高稳定性、高灵敏度、准确快速、比率型响应、高生物安全性以及生物降解性等特点,在复杂的生物体系中表现着巨大的应用前景。阿尔兹海默病（AD）与恶性肿瘤等疾病具有难以预防、治愈、甚至减缓等特点,是人类生命健康的杀手,它们病理机制的研究已经成为当前生命分析领域的研究热点。研究表明这些疾病的病理机制与多种活性物质密切相关。生物分子唾液酸作为肿瘤标志物,在肿瘤的恶性转化与转移中常出现过表达的现象。此外,AD患者脑中唾液酸可促进β-淀粉样蛋白（Aβ）在神经元细胞膜表面发生构象转变并聚集为毒性寡聚体,形成老年斑。而Aβ蛋白沉积斑作为AD的重要病理特征,斑块中存在着高浓度的过渡金属离子,它们通过催化氧化损伤诱发AD。同时,Aβ与金属离子之间的氧化还原反应产生的大量活性氧活性氮自由基,可引起氧化应激进而导致AD的发生。因此,疾病病理机制中各类活性物质的分析研究极为重要。然而,已有分析方法中仍然存在许多挑战:1、生物环境复杂且成分多,存在大量干扰物质,并且活性物质的浓度较低,检测十分困难;2、AD的病理同时涉及多种分子,且各组分之间存在交叉反应;3、活体组织微环境的动态变化易干扰检测信号,导致检测结果不准确;4、普通纳米材料的毒性高、靶向性差、摄取效率低、组织渗透性浅且易影响活细胞与活体组织的生物活性,难以实现疾病高效精准的治疗。针对这些问题,从根本上需要解决的是:提高检测方法的灵敏度、靶向性及选择性,发展多个活性分子的联合检测,制备特异性响应的比率型探针,改善探针的稳定性与生物相容性,建立准确快速、检测限低的分析方法。因此,本论文设计合成了多重响应的短肽分子,通过将荧光分子引入短肽的自组装,构建了多功能短肽荧光纳米探针。利用短肽自组装纳米材料的结构可控、易修饰以及生物兼容性等独特的性质,我们将其与荧光分析法结合,实现了:1、肿瘤相关活性分子的靶向成像分析与精准联合诊疗;2、生物体中活性分子之间相互作用的准确快速分析及活性物质的灵敏选择性检测;3、活细胞与活体中两种生物离子的同时比率型检测与成像;4、复杂体系中两种活性物质对AD病理毒性的同时分析研究。具体说来,本论文主要有六个方面的内容:第一章绪论本章首先介绍了短肽、自组装、构建策略及短肽自组装的应用发展。接着概述了AD与恶性肿瘤的简介及相关活性物质的研究,并阐述了AD与恶性肿瘤的诊疗研究进展。最后简述了本论文的研究目的、设计构思、研究内容与创新点。第二章唾液酸靶向的仿生多价肽纳米管用于转移性黑色素瘤的成像及联合治疗本章设计并制备了唾液酸（SA）靶向的仿生多价肽纳米管（I/S-PPNT）用于肿瘤的精准靶向与联合诊疗。首先调控化疗药物（SN38）与短肽KLVFFAL的组装合成了纳米管,然后进一步修饰苯硼酸（PBA）与吲哚菁绿（ICG）获得智能纳米管I/S-PPNT。利用茜素红荧光变化分析了肽纳米管与SA的结合常数为794 M-1,该新型多价纳米管对SA具有较强的亲和力,为I/S-PPNT精确地靶向肿瘤细胞实现成像引导的联合治疗奠定了基础。之后,将I/S-PPNT用于细胞与活体中,I/S-PPNT特异性靶向B16-F10黑色素瘤细胞表面过表达的唾液酸,表现出较高的细胞识别与摄取能力;在C57BL/6小鼠模型中,I/S-PPNT特异性积累并深入渗透到皮下和肺转移性B16-F10黑色素瘤中,利用其化学-光动力联合治疗作用实现了肿瘤转移的抑制与根除。第三章糖肽纳米纤维用于Aβ-唾液酸相互作用分析及Aβ高灵敏度检测本章受到细胞表面团簇的唾液酸（SA）的启发,设计合成了SA功能化短肽分子并自组装为糖肽纳米纤维（SANF）,实现了Aβ-SA相互作用机制的分析与Aβ1–40的灵敏检测及其聚集过程的监测与其抑制剂的筛选。通过荧光滴定法分析了SANF与Aβ不同片段的亲和力,结果显示为:Aβ1–16>Aβ24–40>Aβ16–23,表明SA与Aβ肽序列中不同氨基酸位点结合。之后将全长的Aβ1–40加入该体系,由于SA与Aβ1–40的多位点结合,使得体系荧光被激活,从而构建了荧光“Turn-on”的生物传感平台,实现对Aβ1–40单体的选择性、高灵敏度检测。此外,该方法成功地用于胎牛血清样品中Aβ1–40单体的分析,并得到与标准ELISA方法相当的回收率。该方法进一步成功地用于Aβ1–40聚集的监测及抑制剂筛选。本章的方法为糖肽纳米材料的设计及其在其他生物分子的分析检测提供了新的思路。第四章自组装多功能肽对生物金属离子的比率型成像本章利用组装技术设计并制备了具有Zn2+与Cu2+特异性响应的多功能肽纳米带荧光探针,实现了活细胞与活体中Zn2+与Cu2+的比率型分析与成像。首先将功能单元喹啉衍生物（AQZ）引入短肽KLVFFAL分子的侧链,与之共组装制备了纳米带,进一步修饰近红外量子点（QDs）与内参比分子Alexa 633,合成了多种金属离子比率型响应的肽纳米带（Al@AQZ@QDs@NR）。该多功能纳米探针在单一激发波长下,表现出三个独立的荧光发射,成功实现了对Zn2+、Cu2+或Zn2+与Cu2+的比率型检测。基于优异的生物相容性,该纳米探针成功地应用于活细胞与斑马鱼内Zn2+和Cu2+的多色荧光成像与检测,并进一步用于一氧化氮刺激下细胞内Zn2+和Cu2+的成像。这对我们了解Zn2+和Cu2+在细胞与体内的分布,以及理解高浓度Zn2+和Cu2+的神经毒性具有重要的意义,有利于AD的临床诊断与治疗。第五章多功能肽组装胶束用于Aβ沉积与活性氧的同时清除研究本工作利用双谷胱甘肽（tk-GSH）与功能短肽分子（LD与TK）设计合成了肽-聚合物,通过自组装制备了可调控细胞自噬的多功能纳米胶束（MPGLT）,实现了β-淀粉样蛋白(Aβ1–42)沉积与活性氧（ROS）的同时清除研究。首先将tk-GSH与短肽LD、TK同时偶联于聚唾液酸中,然后自组装形成MPGLT。因其表面的LD（LPFFD）肽衍生于Aβ短肽的核心序列,能够识别与结合Aβ1–42,将Aβ1–42聚集体解离;tk-GSH中的酮缩硫醇（tk）键在ROS存在下被还原,释放出两倍的GSH,具有更强的还原性。因此该纳米胶束利用TK自噬肽诱导细胞自噬上调,结合Aβ1–42后快速进入细胞,还原细胞内ROS,实现两者的同时清除。并表现出良好的生物相容性,可有效降低Aβ1–42与ROS的神经毒性。第六章总结与展望本章首先对此论文的主要研究工作进行逐一总结,接着将论文的创新点与研究意义作了概括。最后阐述了与本研究方向相关的展望与设想。
王改娜[4]（2019）在《一种近红外光响应性水凝胶的制备及其在可控药物释放中的应用研究》文中研究说明近红外（NIR）光响应水凝胶是用于癌症治疗的最有前途的局部抗癌药物递送系统。然而,目前大多数报道的NIR-光响应水凝胶是通过混合热敏聚合物和光热转化剂制备的,多为热降解性水凝胶,这类水凝胶由于受温度影响较大,在体内的药物递送和凝胶的自身降解等方面还存在一些问题。糖类物质作为一类重要的生物大分子参与众多生命过程,对其在生物医学上的应用一直是生命科学界的研究热点,近年来对糖类药物的开发、新型含糖物质的制备、糖化合物结构与功能之间的关系以及糖类和其他物质之间相互作用等方面的研究越来越集中,其在降解型水凝胶中的应用也尤其广泛。为了开发一种新型光控可降解型水凝胶,我们选用果糖聚合物和接枝有苯硼酸半酯的聚合物（BOB-HA）,基于果糖和苯硼酸之间在中性或偏碱性环境中可相互作用形成动态共价键,只需简易的操作便可制得水凝胶（Gel-Fru-BOB）;由于动态共价键中的硼片段易被过氧化物氧化掉,于是在Gel-Fru-BOB中添加光敏剂和还原剂抗坏血酸,两者在一定波段的光照射后会产生过氧化氢,进而打断两种聚合物形成的网络结构使水凝胶降解掉,这样便制得了一种光响应性水凝胶（Gel-PDS-Vc）。本文主要对以下两个方面进行研究:（1）果糖异构效应对糖与苯硼酸半酯结构结合能力的影响:首先我们合成了两种相近分子量和分子量分布的不同分子构型的果糖聚合物Poly（3-O-MAipFru）和Poly（1-O-MAipFru）。在稀溶液中果糖聚合物与BOB-HA可自组装形成纳米粒子,通过动态光散射（DLS）检测的粒子流体力学半径和散射光强分析可发现Poly（3-O-MAipFru）与BOB-HA的结合能力比Poly（1-O-MAipFru）更强。在浓溶液中通过控制固含量和两组分比可制得水凝胶,在Bohlin旋转流变仪中检测到的流变性能指标表示Poly（3-O-MAipFru）与BOB-HA形成的凝胶的模量和粘度都较Poly（1-O-MAipFru）高,这也从宏观性能上反映了Poly（3-O-MAipFru）与苯硼酸半酯基团有更高的结合能力。另外实验中还发现两种聚合物在较大范围的质量比例内都可形成凝胶,在总固含量为10 wt%的前提下,果糖聚合物含量越高得到的凝胶模量和粘度有越高的走势,在实验的几个比例中果糖聚合物与BOB-HA质量比为4:1时模量和粘度都最高;此外BOB-HA的高接枝率也有利于提高凝胶的机械性能。（2）Gel-PDS-Vc作为局部抗癌药物递送系统在抗癌上的应用:水凝胶Gel-Fru-BOB在体外的细胞毒性及体内的生理毒性表明该凝胶具有较低的生物毒性,在载负光敏剂与抗坏血酸后会在近红外光的照射下10 min内完全降解,于是将小分子抗癌药物阿霉素（DOX）载入Gel-PDS-Vc中进一步进行体内外可控药物递送研究实验。体外药物释放实验表明载药凝胶（Gel/DOX）在一次性光照后释药量可以达到80%,且通过光照的开启与关闭可有效控制药物的释放速度。体内的降解实验结果显示水凝胶Gel-PDS-Vc可通过自身的降解来控制药物的释放;在瘤周实验中通过近红外一窗成像系统可检测到DOX在凝胶注射第三天达到在肿瘤上的最高富集量;Gel/DOX对4T1荷瘤鼠的抗癌治疗中4T1肿瘤得到了有效抑制。这些结果证明该水凝胶在局部抗癌药物递送方面有巨大的应用潜力。
高铃[5]（2018）在《Vps35抑制CDK5/p35活化下调p-tau表达在视网膜神经节细胞变性中的机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景和意义青光眼是一种以视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）丢失、视神经损害、视野缺损为特征的视网膜神经变性疾病,RGCs一旦发生变性,难以逆转,如何预防及逆转RGCs变性,长期以来都是青光眼治疗面临的难题。青光眼是世界上第二大致盲眼病,其发病机制复杂,目前尚不十分明确。高眼压是目前唯一公认导致青光眼的危险因素之一[1],但高眼压并非青光眼的充分必要因素,临床上许多患者从未出现眼压升高或者即使有眼压升高控制良好,然而其RGCs丢失、视神经损害和视野缺损仍然持续加重,最终导致视神经萎缩、视功能完全丧失[2]。研究表明,缺血、缺氧、谷氨酸兴奋性毒性、神经营养因子缺乏、氧化应激等均会导致青光眼RGCs变性凋亡[2,3]。研究表明谷氨酸兴奋性毒性导致RGCs变性的动物模型更能代表青光眼的病理损伤机制[2,4,5]。空泡分选蛋白35（vacuolar protein sorting 35,Vps35）是Retromer复合体的核心组分,负责分选识别膜蛋白受体并将其从内体转运至反式高尔基体（trans-Golgi network,TGN）或者质膜,避免其被溶酶体降解[6]。大量研究显示Vps35与中枢神经系统变性疾病,如阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）[7,8]和帕金森氏病（Parkinson’s disease,PD）[9-11]关系密切。Tau蛋白是表达在神经细胞轴突中的主要微管相关蛋白,tau蛋白过度磷酸化（hyperphosphorylation）增加可以导致其与微管蛋白结合力降低、影响微管的稳定性,进而影响轴突运输,已经证实过度磷酸化tau蛋白（p-tau）与多种神经变性疾病相关,如AD、家族性额颞叶痴呆等[12]。视网膜有“外周脑”之称,被认为是中枢神经系统的一部分,在正常视网膜中tau蛋白广泛表达,而p-tau几乎不表达。青光眼的视网膜神经改变与AD等中枢变性类疾病类似:与年龄增加相关;都以神经元变性为特征;脑内和视网膜均有p-tau表达[13-16]。本课题组前期研究中已经发现Vps35主要表达在RGCs,Vps35缺陷导致RGCs凋亡增加、胞体排列紊乱、突起减少、视网膜神经纤维层变薄等神经变性样改变,而且视网膜p-tau表达增加[17]。那么我们推测Vps35减少导致视网膜神经节细胞变性与p-tau增加有关。细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）是有丝分裂后神经元活动的重要调节器,对中枢神经元的细胞构筑、细胞的迁移和分化、细胞骨架形成、轴突导向、突触可塑性等都有重要作用,而且可以调控细胞凋亡信号[18]。近年的研究普遍认为CDK5是tau蛋白过度磷酸化病理机制中的主要致病激酶。CDK5介导的tau蛋白过度磷酸化增强所引起的神经细胞微管结构异常,细胞骨架塌陷被认为是其导致细胞凋亡的主要病理机制。而且有研究证实CDK5/p35活性增强可以导致视网膜神经节细胞凋亡增加[19]。因此我们推测Vps35减少可能增加Cdk5/p35激酶活性导致视网膜p-tau表达增加。研究目标本研究的目的在于:在前期研究发现Vps35减少导致视网膜神经节细胞变性及p-tau表达增加的基础上探索Vps35在视网膜神经节细胞变性中的机制;阐明Vps35通过调节CDK5/p35蛋白降解而抑制其活性,进而下调p-tau表达,阻止RGCs变性的分子机制。研究方法1.大鼠玻璃体腔注射谷氨酸20nmoles,50nmoles和N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）40nmoles,注药后不同时间点抽取玻璃体液检测谷氨酸浓度;取不同时间点的眼球行石蜡切片免疫组化、免疫荧光及TUNEL检测神经节细胞层（GCL）细胞数、视网膜厚度、凋亡细胞;取各时间点新鲜视网膜检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3和磷酸化tau s396及tau s404的表达情况。探索玻璃体腔注药建立大鼠谷氨酸兴奋性毒性相关视网膜神经变性动物模型的有效剂量。2.利用筛选出的大鼠谷氨酸视网膜兴奋性毒性模型,取不同时间点的视网膜新鲜组织标本或者取眼球制作石蜡切片,采用免疫荧光、免疫印迹、Q-PCR及免疫共沉淀等技术研究Vps35、CDK5/p35、p-tau s396、溶酶体关联膜蛋白（LAMP1）、早期内体抗原（EEA1）在谷氨酸兴奋性毒性模型中的表达、变化趋势及相互作用。3.利用原代培养的视网膜神经节细胞,结合细胞转染技术,利用免疫荧光、免疫印迹、免疫共沉淀及Q-PCR探索Vps35减少可能通过影响CDK5/p35溶酶体途径降解导致p-tau表达增加。研究结果1.大鼠玻璃体腔注射谷氨酸50nmoles导致视网膜变薄、RGCs凋亡增加、凋亡相关蛋白（cleaved-caspase-3）、p-tau s396表达明显增加,可以有效的建立谷氨酸兴奋性相关的视网膜神经变性模型。2.Vps35下调可以增加CDK5/p35活性,导致p-tau s396和s404表达量增加,抑制CDK5可以明显减少Vps35下调引起的p-tau s396表达增加;Vps35和p35、CDK5和p35存在相互作用。Vps35下调可以减少LAMP1、EEA1表达,LAMP1与p35,Vps35与LAMP1存在相互作用;Vps35缺乏导致转运到溶酶体降解的CDK5/p35减少,胞内CDK5/p35活性增强,进而导致p-tau增多。研究结论本研究中,我们通过大鼠谷氨酸兴奋性毒性相关视网膜神经变性动物模型,利用免疫印迹、免疫共沉淀、免疫组化、免疫荧光、TUNEL检测、Q-PCR、原代细胞培养及细胞转染等技术,探讨了Vps35调控CDK5/p35活性引起视网膜神经节细胞变性的机制。本研究证实了Vps35减少会增强CDK5/p35激酶活性,导致过度磷酸化tau蛋白增加,进而导致视网膜神经节细胞变性;进一步研究发现,Vps35是通过影响CDK5/p35的溶酶体降解途径进而影响其活性的。本研究揭示了CDK5/p35作为Vps35转运“货物（cargo）”的可能性,使我们对蛋白激酶活化造成过度磷酸化tau蛋白增加而导致RGCs变性的发病机制有了新的认识,有利于从调控Vps35的角度为青光眼等神经变性疾病的预防和临床治疗提供新思路。
吕菊玲[6]（2018）在《小鼠视网膜光损伤模型中Fra-2的表达及作用机制研究》文中研究表明背景:随着科学技术的迅速发展,人工照明设备的使用范围不断扩大,光污染也成为危害人类身体健康的危险因素之一。环境中过量的光照射眼睛会诱导视网膜发生损伤。且在一些常见的视网膜退行性眼科疾病中,如年龄相关的黄斑变性（Age related macular degeneration,AMD）以及视网膜色素变性（Retinitis pigmentosa,RP）等与视网膜光损伤的病理形态改变相似,因此,视网膜光损伤模型是研究许多眼科疾病的良好模型。既往对小鼠视网膜光损伤模型研究中证实fra-2发挥原癌基因作用,即上调Fra-2蛋白表达引起小鼠眼睛发育异常。分子量为46 kDa的Fra-2蛋白是转录激活蛋白1（Activator protein 1,AP-1）蛋白家族的成员之一,有并由c-fos和c-jun两个原癌蛋白基因组成。我们考虑在视网膜光损伤过程中Fra-2是否有参与及其作用机制。细胞内强烈的应激反应会引起DNA的损伤,从而诱发各种胞内反应,包括DNA修复、细胞周期阻滞以及细胞凋亡等,严重的DNA损伤会导致DNA修复失败,最终引起细胞凋亡。研究已经证实细胞核DNA的损伤可以迅速的激活多聚ADP核酶1（Poly（ADP-ribose）polymerase 1,PARP-1）,并促进ADP与PARP-1和其他核蛋白如组蛋白、拓扑异构酶的聚合。凋亡诱导因子（Apoptosis inducing factor,AIF）作为线粒体氧化还原酶,具有催化细胞色素C和烟酰胺腺嘌呤而核苷酸（NAD）之间电子传递的作用,且PARP-1的过度激活会诱导细胞合成大量的PAR,从而促进AIF从线粒体释放并转移到细胞核中,从而激活细胞凋亡信号通路。本研究通过建立小鼠光损伤模型以及体外细胞实验探究Fra-2基因在视网膜光损伤中的可能作用机制。第一部分强光暴露对小鼠视网膜的损伤研究目的:通过建立小鼠视网膜光损伤模型,探究2600 Lux可见光暴露对小鼠视网膜的影响。方法:将小鼠放置在光照强度为2600 Lux的光照箱中饲养36 h建立小鼠视网膜光损伤模型。应用HE染色观察小鼠视网膜组织损伤情况,使用western blot检测小鼠视网膜中PARP-1、Fra-2以及凋亡相关蛋白（Cyt-c、Bax、Blc-2、Bcl-xL）的表达水平。结果:本研究结果表明,2600 Lux可见光暴露12 h以后,小鼠视网膜组织出现明显损伤,具体表现为小鼠视网膜内核层和外核层明显变薄,组织的裂解和细胞溶解,光感受器细胞外节段排列紊乱,神经节细胞层出现凋亡;小鼠视网膜中两种促进凋亡相关蛋白Cyt-c和Bax的表达从光暴露12 h开始均出现显着性的上升,且两种抑制凋亡的蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达从光暴露12 h开始均出现显着性的下降;小鼠视网膜中PARP-1和Fra-2的蛋白水平在光暴露6h-36h以后逐渐显着升高。结论:这些研究证实经过2600 Lux强光暴露12 h以后,小鼠视网膜组织出现明显损伤;暴露36h后,小鼠视网膜受到强烈的损伤以及引起视网膜光感受器细胞凋亡,且Fra-2和PARP-1参与光诱导视网膜损伤中细胞凋亡的调节。第二部分过表达或者干扰表达Fra-2对RGC-5细胞的影响目的:探索过表达或干扰表达Fra-2基因对RGC-5细胞的影响方法:使用Far-2基因过表达或干扰质粒转染正常RGC-5细胞,使用免疫荧光实验检测质粒转染情况,western blot检测相关蛋白的表达,MTT实验检测细胞增殖活性,流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果:免疫荧光检测以及western blot检测证实Fra-2基因过表达/干扰质粒转染RGC-5细胞模型建立成功;过表达Fra-2基因显着抑制RGC-5细胞的增殖活性以及诱导RGC-5细胞凋亡率的升高;过表达Fra-2基因显着提高了 RGC-5细胞中PARP-1的蛋白表达,以及促进AIF从细胞质向细胞核的转移。结论:在正常RGC-5细胞中过表达Fra-2基因可以抑制细胞增殖活性以及诱导细胞凋亡,且PARP-1/AIF信号途径参与Fra-2过表达诱导的RGC-5细胞损伤。第三部分干扰Fra-2表达对光诱导RGC-5细胞损伤的影响目的:探究干扰Fra-2的表达对2600 Lux可见光暴露诱导RGC-5细胞损伤的影响方法:使用Fra-2干扰质粒siFra-2转染RGC-5细胞,并与2600Lux可见光暴露下培养72h（siFra-2+LE）,以正常培养细胞作为正常对照组（Control group,CON）、不转染干扰质粒但可见光暴露的细胞作为阴性对照组（Light exposure group,LE）、采用PARP-1抑制剂NU1025处理可见光暴露的RGC-5细胞作为阳性对照（NU1025+LE）,应用流式细胞技术检测细胞凋亡,MTT实验进行细胞增殖活性检测,western blot检测PARP-1/AIF信号途径蛋白表达情况。结果:与正常对照组细胞相比,2600Lux可见光暴露后RGC-5细胞的凋亡率显着上升且细胞增殖活性受到显着的抑制;与光暴露组相比,转染Fra-2干扰质粒的RGC-5细胞经过可见光暴露后,细胞凋亡率显着下降且细胞的增殖活性显着升高;与正常对照组相比,可见光暴露以后细胞中PARP-1的蛋白水平显着升高,且AIF由细胞质向细胞核内转移;与可见光暴露组相比,转染干扰质粒的RGC-5细胞中PARP-1的蛋白水平显着下降,且AIF由细胞质向细胞核内的转移也显着受到抑制。结论:干扰Fra-2的蛋白表达通过抑制RGC-5细胞内PARP-1的合成释放,以及降低RGC-5细胞质中AIF向核内的转移,减轻可见光暴露诱导的RGC-5细胞损伤。
何华[7]（2018）在《光动力调控的纳米药物用于抗肿瘤治疗的研究》文中提出癌症是目前人类的主要杀手之一,随着发病率、死亡率的逐年增加,急需寻求一种安全、有效的治疗方式。由于纳米药物可以增溶药物、提高药物稳定性、控制药物释放、延长药物体内循环时间、增强病灶部位的药物富集、降低毒副作用等,因此受到了广泛的青睐。脂质体阿霉素（Doxil?）是第一个被美国食品与药物管理局（FDA）批准的纳米药物,可用于卵巢癌、卡波济肉瘤和多发性骨髓瘤的治疗。随着首例聚合物纳米药物Genexol-PM?（聚乙二醇-聚丙交酯的紫杉醇载药胶束）被批准用于卵巢癌、肺癌和乳腺癌的治疗,研究者们研发了更多的纳米药物（如BIND-014、NC-6004）用于临床研究,并取得了阶段性的胜利。然而,载药量低、内吞效率差、肿瘤细胞内无法特异性释放药物、毒副作用大是目前纳米药物常见的问题。论文第一章对肿瘤治疗的现状、光动力治疗、肿瘤微环境敏感的纳米药物及光动力-化疗的联合使用进行了概述。有效递送蛋白质至肿瘤部位并在瘤内特异性激活是蛋白质给药体系的关键。第二章设计了一种具有活性氧自由基（ROS）敏感性、活性可逆的蛋白质前药（RNBC）。RNBC在H2O2的处理下,通过“自消除”反应脱落苯硼酸基团,从而恢复活性。此外,本章又合成了一种具有酸敏感性、缩酮键交联的聚乙烯亚胺交联聚合物（KPEI）,KPEI与RNBC通过静电相互作用形成纳米复合物,从而提高了RNBC的稳定性和细胞内吞量。光敏剂血卟啉（Hp）共价结合在透明质酸（HA）上得到HA-Hp,并进一步包衣在复合物表面,通过屏蔽复合物原有的正电荷增加其血清中的稳定性,延长体内循环时间,并通过渗透滞留（EPR）效应提高肿瘤部位的富集。当HA与细胞膜表面过度表达的CD44识别后,复合物在HA介导的靶向作用下内吞进入细胞。KPEI的“质子海绵效应”有效地调节溶酶体逃逸,并在酸性溶酶体中快速降解成小分子PEI,加速RNBC的释放并消除高分子量材料的毒性。在低功率的可见光照射（635 nm,5 mW/cm2）下,Hp产生的H2O2在杀死细胞的同时也可以有效促进蛋白质恢复活性,提高蛋白质杀死肿瘤细胞的选择性,从而发挥光动力-化疗的协同抗肿瘤功效。该设计为高效、靶向递送抗肿瘤蛋白质药物提供了新的思路。有效的药物包载、肿瘤部位精确的药物释放是纳米药物发挥显着抗肿瘤疗效和降低毒副作用的关键。第三章合成了一种具有ROS敏感性的喜树碱二聚体前药（BE-CPT2）,该二聚体结构可有效降低药物之间的疏水作用和π-π相互作用,提高喜树碱的载药量。BE-CPT2与光敏剂血卟啉（Hp）被聚乙二醇-聚丙交酯（PEG-PLA）胶束高效共包载,实现超高载药量（BE-CPT2:45%;Hp:7%）。该共载胶束具有良好的稳定性,并且在光照的条件下,喜树碱的释放量提高了2.2倍。共载胶束（BE-CPT2@Hp NPs）内吞进入细胞后,在光照的条件（635 nm,10mW/cm2）下,Hp产生大量的H2O2,在杀死肿瘤细胞的同时可以有效促进BE-CPT2通过“自消除”反应释放喜树碱,最终以级联的方式实现高效、协同的抗肿瘤治疗。精确、选择性递送药物至肿瘤部位是纳米药物获得显着抗肿瘤疗效的关键。对单一外源或内源刺激响应的给药体系通常肿瘤选择性不足,会造成治疗效果下降、毒副作用增强。第四章设计了一种具有乏氧敏感性的两亲性载体,2-硝基咪唑修饰的聚乙烯亚胺（PEI-NI）。PEI-NI在水中自组装,包载阿霉素（DOX）形成纳米粒;光敏剂二氢卟吩e6（Ce6）修饰的透明质酸（HA-Ce6）对其进一步包衣后形成具有光、乏氧级联响应性的纳米粒（HC/PN/DOX NPs）。在光照的条件（660nm,10 mW/cm2）下,Ce6产生大量的ROS杀死细胞,同时造成的乏氧环境引起2-硝基咪唑转变为亲水的2-氨基咪唑,导致HC/PN/DOX NPs解体、DOX释放量显着增加,最终以级联的方式实现光动力-化疗之间的协同抗肿瘤治疗。光动力治疗在产生ROS杀死肿瘤细胞的同时,伴随产生的乏氧环境会诱导乏氧诱导因子（HIF-1α）的激活,降低光动力治疗疗效并引起肿瘤转移。第五章设计合成了一种具有乏氧敏感性的喜树碱二聚体前药hQ-CPT2,该二聚体结构可有效降低药物之间的疏水作用和π-π相互作用,提高喜树碱的载药量。hQ-CPT2与光敏剂Ce6被PEG-PLA胶束高效共包载,实现超高载药量（hQ-CPT2:46.8%;Ce6:6.5%）。该共载胶束具有良好的稳定性,并且在光照条件下光动力可造成局部的乏氧环境,促进hQ-CPT2通过“自消除”反应释放喜树碱（光照后喜树碱的释放量提高了2.5倍）。载药胶束（hQ-CPT2@Ce6 NPs）内吞进入细胞后,在光照条件（660 nm,10 mW/cm2）下,Ce6产生大量的ROS杀死细胞,同时造成的乏氧环境促进喜树碱释放,抑制HIF-1α表达和肿瘤转移,提高光动力-化疗的协同抗肿瘤疗效,实现一种自我矫正、自我促进的抗肿瘤疗效。第六章对论文进行了总结,并展望今后可开展的研究工作。
张茜[8]（2018）在《芬戈莫德对大鼠视网膜光损伤的保护作用及免疫机制研究》文中认为背景:近年来,随着电子光学照明设备及光学诊疗设备和显微镜的广泛应用,视网膜光损伤（light-induced retinal damage,LIRD）已成为造成人类视力下降的重要原因之一。如果外界光照导致视网膜受到过强或过长时间的刺激时,就可能造成难以恢复的视力损害甚至永久性的失明。关于视网膜光损伤的发病机制及治疗方法的研究目前并不非常清楚。最新研究结果表明,免疫反应可能参与了视网膜光损伤的过程。因此,深入研究视网膜光损伤的发病机制有助于针对性的寻求治疗疾病的有效的药物和方法。芬戈莫德（Fingolimod,FTY720）是提取于冬虫夏草中具有免疫抑制作用的药物成分,现已用于多发性硬化症和器官排斥反应的治疗。FTY720可有效阻滞淋巴细胞流出和促进成熟淋巴细胞流入次级淋巴器官,减少外周血及组织液的免疫细胞循环,避免潜在的组织损伤。目的:根据视网膜光损伤和FTY720的研究报道,本实验目的有四点:1.建立光损伤视网膜大鼠模型;2.研究视网膜光损伤过程中免疫细胞及分子对视网膜的浸润情况,如:CD3+、CD4+、CD8+T细胞;3.研究FTY720对光损伤大鼠的视网膜的组织结构和视功能的保护作用;4.如果免疫反应参与了视网膜光损伤的过程,进一步研究FTY720是否可以通过免疫抑制效应来阻滞免疫细胞浸润和损伤视网膜。材料及方法:将Sprague-Dawle（SD）大鼠分成非光损伤组、光损伤组、FTY720组和溶剂组。所有大鼠出生起即在微弱循环光的条件下饲养;光损伤组大鼠在2700Lux条件下光照6h;FTY720组在光照前注射10ml/kg剂量的FTY720。于光照后1、3、5、7天,运用免疫组化法检测视网膜CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞,蛋白免疫印迹法检测视网膜CD3+、CD4+、CD8+蛋白表达,TUNEL染色法检测视网膜外核层凋亡细胞。光照后第7天,运用闪光视网膜电图（flash-electroretinogram,F-ERG）记录各组的a波、b波、Ops波的振幅及波形,常规HE切片观察视网膜结构形态,计数统计视网膜外核层的细胞层数。结果:1.光损伤后,视网膜组织结构受损严重,视网膜外核层细胞层数明显变少（P<0.001）。F-ERG的a波、b波和Ops波的波形平坦,振幅下降明显（P<0.001）。2.免疫细胞参与光损伤视网膜的过程。光损伤后,视网膜CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞增多,CD3+、CD4+免疫蛋白的表达增强;外核层出现凋亡细胞。3.FTY720对光损伤大鼠视网膜的组织结构和视功能具有保护作用。FTY720组的视网膜组织结构较为完整,外核层细胞层数和数量显着多于光损伤组（P<0.001）;F-ERG的a波、b波和Ops波的振幅明显提高（P<0.001）。4.FTY720组视网膜未见CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞,CD3+、CD8+蛋白表达低于光损伤组,未见外核层出现细胞凋亡。结论:1.光刺激可激活视网膜局部免疫反应,引起CD3+、CD4+和CD8+T细胞对视网膜的浸润和损伤,造成感光细胞的凋亡和减少,最终导致视网膜结构和功能受损。2.FTY720对光损伤视网膜具有极强的保护作用,可有效防止强光对视网膜组织结构和视功能的损伤。3.FTY720可以阻滞免疫细胞损伤视网膜,减少感光细胞的凋亡和丢失,保存视网膜组织结构的完整性和视功能。该研究有助于拓展我们对视网膜光损伤的发病机制,FTY720的保护作用和机制的认识,对未来探究视网膜光损伤的治疗方法和FTY720在各类疾病的潜在应用提供理论依据和新的思路。
杨冬萍[9]（2017）在《枸杞多糖对兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡内质网信号传导途径的影响》文中进行了进一步梳理目的通过对体外培养的兔视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞进行不同时间的光照刺激,筛选出符合兔RPE细胞光损伤模型的最佳光照时间点。研究兔RPE细胞光损伤后参与细胞凋亡因子的表达情况,以及枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharides,LBP）干预防治后对细胞凋亡因子表达的影响。探讨LBP对兔RPE细胞光损伤的保护作用机制及其可能参与的信号传导途径,为临床应用LBP治疗年龄相关性黄斑变性以及视网膜光损伤类疾病等提供理论基础。方法1.以体外培养的兔RPE细胞为研究对象,采用三基色LED冷光灯作为光源,光照强度（16500±200）Lux,进行不同时间（11h,16h,24h）的光照刺激,光照结束后立即进行MTT法检测不同光照刺激时间对兔RPE细胞活性的影响、流式细胞仪检测不同刺激时间对兔RPE细胞凋亡的影响。2.制备高、中、低安全浓度的LBP培养基,预防性观察实验予光照前8h加入不同安全浓度的LBP培养基进行预处理,分别在光照处理结束后0h、6h、12h、24h进行各相应指标检测;治疗性观察实验予光照结束后立即加入高、中、低浓度的LBP培养基,放入培养箱中继续培养6h、12h、18h、24h进行相应指标检测。预防性和治疗性观察实验均设立五个分组,分别为:正常组、光损伤组、LBP低浓度组、LBP中浓度组、LBP高浓度组。3.通过透射电镜观察兔RPE细胞光损伤后细胞微观结构的改变;流式细胞仪检测光损伤及LBP防治后兔RPE细胞内游离钙离子浓度的变化;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测光损伤及LBP防治后兔RPE细胞内Caspase-12蛋白因子的表达情况。以探讨LBP对兔RPE细胞光损伤保护的分子作用机制及其可能参与的信号通路。结果1.mtt法检测结果显示:与无光照组相比,兔rpe细胞在经过11h、16h、24h的光照刺激后,od值均有所降低,差异有统计学意义（f=80.691,p=0.000）;且各光照组组间比较差异也均有统计学意义（p<0.05）,表现为光照时间越长,兔rpe细胞损伤越重,od值下降越明显。2.annexinv-fitc/pi双染法结合流式细胞仪检测结果显示:兔rpe细胞经过11h、16h、24h的持续光照后,细胞损伤形式主要表现为凋亡,且随着光照刺激时间的延长,兔rpe细胞凋亡率逐渐增加。与无光照组比较,光照11h组细胞凋亡率升高,但差异无统计学意义（p>0.05）,光照16h、24h组细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）。各光照组组间比较差异均具有统计学意义（p<0.05）。3.透射电镜结果显示:无光照组兔rpe细胞表面有许多微绒毛,细胞膜结构完整,胞浆内细胞器丰富,可见到线粒体、粗面内质网、核糖体等,核染色质分布均匀。而经过16h光照组的兔rpe细胞则出现了典型的细胞凋亡形态学改变:细胞体积缩小,表面微绒毛减少或消失,细胞膜结构完整无破损,胞浆内细胞器减少或消失,出现有大量的空泡,胞质浓缩,核染色质聚集成团,边聚、分散,或裂解成碎片。4.流式细胞仪检测兔rpe细胞内游离ca2+浓度的变化,结果显示:（1）预防性观察结果显示:（1）同时相内不同处理组之间比较:与正常组相比,各时相内光损伤组细胞内ca2+荧光强度显着增高（p<0.01）。与光损伤组比较,0h、12h时相内lbp低、中、高浓度组细胞内ca2+荧光强度明显降低,其中尤以lbp高浓度组降低最为显着（p<0.01）,6h、24h时相内仅lbp高浓度组ca2+荧光强度抑制明显（p<0.05）。lbp低、中、高浓度组之间两两比较:lbp低浓度组与lbp中浓度组:各时相内差异均无统计学意义（p>0.05）;lbp低浓度组与lbp高浓度组:0h、6h、12h时相内差异均有统计学意义（p<0.05）,24h时相内差异无统计学意义（p>0.05）;lbp中浓度组与lbp高浓度组:仅6h、12h时相内差异有统计学意义（p<0.05）。（2）同一处理组内不同时相之间比较:各处理组除6h与12h细胞内ca2+荧光强度变化不明显,其他表现为:随时间延长,细胞内ca2+荧光强度呈下降趋势,尤以lbp高浓度组24h降低最为明显（p<0.05）。（2）治疗性观察结果显示:（1）同时相内不同处理组之间比较:与正常组相比,各时相内光损伤组细胞内ca2+荧光强度显着增强（p<0.01）。与光损伤组比较,12h、18h、24h时相内lbp低、中、高浓度组细胞内ca2+荧光强度明显降低,尤以lbp高浓度组降低最为显着（p<0.01）,6h时相内仅lbp中、高浓度组细胞内ca2+荧光强度抑制明显（p<0.05）。lbp低、中、高浓度组之间两两比较:lbp低浓度组与lbp中浓度组:6h时相内差异无统计学意义（p>0.05）,12h、18h、24h时相内差异均有统计学意义（p<0.05）;lbp低浓度组与lbp高浓度组:各时相内差异均有统计学意义（p<0.05）;lbp中浓度组与lbp高浓度组:仅6h时相内有统计学意义（p<0.05）。（2）同一处理组内不同时相之间比较:光损伤组、lbp低浓度组、lbp高浓度组:随着时间延长,细胞内ca2+荧光强度呈下降趋势,其中18h与24h差异无统计学意义（p>0.05）;lbp中浓度组:与6h比较,12h、18h、24h细胞内ca2+荧光强度均明显减弱,差异有统计学意义（p<0.05）,但12h、18h、24h组间比较差异无统计学意义（p>0.05）。5.western-blot法检测caspase-12蛋白的表达,结果显示:（1）预防性观察结果显示:（1）同时相内不同处理组之间比较:与正常组相比,各时相内光损伤组caspase-12蛋白的表达显着增加（p<0.01）;与光损伤组比较,各时相内lbp中、高浓度组caspase-12蛋白的表达明显受到抑制,尤以lbp高浓度组抑制最为显着（p<0.01）,12h、24h时相内lbp低浓度组即有效抑制了caspase-12蛋白的表达（p<0.05）;lbp低、中、高浓度组之间两两比较:lbp低浓度组与lbp中浓度组:6h时相内差异有统计学意义（p<0.05）,0h、12h、24h时相内差异均无统计学意义（p>0.05）;lbp低浓度组与lbp高浓度组:各时相内差异均有统计学意义（p<0.05）;lbp中浓度组与lbp高浓度组:仅12h、24h时相内差异有统计学意义（p<0.05）。（2）同一处理组内不同时相之间比较:各处理组均表现为随着时间延长,兔rpe细胞内caspase-12蛋白的表达呈下降趋势,尤以lbp高浓度组24h下降最为明显（p<0.05）。（2）治疗性观察结果显示:（1）同时相内不同处理组之间比较:与正常组相比,各时相内光损伤组细胞内caspase-12蛋白的表达均显着上调（p<0.01）;与光损伤组比较,6h、18h、24h时相内LBP低、中、高浓度组细胞内Caspase-12蛋白的表达明显受抑,尤以LBP高浓度组抑制最为显着（P<0.01）,12h时相内仅LBP中、高浓度组抑制明显（P<0.05）;LBP低、中、高浓度组之间两两比较:LBP低浓度组与LBP中浓度组:12h时相内有统计学意义（P<0.05）,6h、18h、24h时相内均无显着性差异（P>0.05）;LBP低浓度组与LBP高浓度组比较,各时相内差异均具有统计学意义（P<0.05）;LBP中浓度组与LBP高浓度组:18h、24h时相内差异有统计学意义（P<0.05）,6h、12h时相内差异无统计学意义（P>0.05）。（2）同一处理组不同时相之间比较:除光损伤组18h与24h、LBP低浓度组6h与12h差异无统计学意义（P>0.05）,其他均表现为随时间延长,细胞内Caspase-12蛋白的表达呈下降趋势,尤以LBP高浓度组24h降低最为明显（P<0.05）。结论1.光照强度（16500±200）lux,光照时间11h、16h、24h对体外培养的兔RPE细胞具有不同程度的细胞损伤及凋亡作用。2.光照强度（16500±200）lux,光照时间16h为本实验所筛选的最佳光损伤模型的构建条件。3.体外培养的兔RPE细胞经过光照刺激后细胞微观结构发生了变化。4.光损伤促进了细胞内游离Ca2+浓度的升高及Caspase-12蛋白因子的表达。5.枸杞多糖通过抑制兔RPE细胞内游离Ca2+浓度及Caspase-12蛋白因子的表达,达到保护兔RPE细胞的目的。6.枸杞多糖对兔RPE细胞光损伤凋亡的这一保护作用可能是通过抑制内质网信号通路来实现的。
方圆[10]（2015）在《α-倒捻子素对小鼠视网膜光损伤的保护作用的研究》文中认为目的:年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration,AMD）是引起50岁以上人群致盲的主要眼病。干性AMD的临床特征包括视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium,RPE）与Bruch膜之间玻璃膜疣的形成以及玻璃膜疣处的RPE、Bruch膜及光感受器细胞发生不同程度的变性、萎缩,影响中心视力。目前,干性AMD的发病机制尚不明确,临床上暂缺乏治疗干性AMD有效方法,它的治疗与干预成为了研究的热点。实验证明,AMD的发生发展与视网膜中ROS的产生及其引起的氧化应激反应有着密切联系。目前,α-倒捻子素的抗氧化作用已经被广泛研究,但是其对于视网膜的保护作用还没有被详细阐明。本实验主要研究该抗氧化药物α-倒捻子素能否在光损伤作用下有效保护小鼠视网膜。方法:取健康6-8周Balb/c小鼠30只,随机分成正常对照组、光照组、α-倒捻子素组,每组15只。α-倒捻子素组小鼠每天接受α-倒捻子素（30mg/kg/d）灌胃7天,于灌胃给药第5天进行光损伤造模。对光照组和α-倒捻子素组小鼠采用（5000土200）lux白色LED光连续照射1小时。模型完成后72小时记录各组小鼠闪光视网膜电图;应用光镜观察各组小鼠视网膜形态学变化,比较各组视网膜外核层厚度变化;通过TUNEL法,检测各组小鼠视网膜凋亡细胞数量。剥离视网膜,检测各组小鼠视网膜组织匀浆中caspase-3活性,丙二醛含量,SOD,Gpx活性以及GSH含量。免疫荧光法标记Nrf2在各组视网膜中的分布,免疫印迹法检测Nrf2以及HO-1在各组小鼠视网膜中的表达水平。结果:闪光视网膜电图（F-ERG）显示α-倒捻子素组视网膜功能损伤较光照组明显减轻（P<0.05）。光镜下,α-倒捻子素组视网膜结构损伤相较于光照组明显减轻,外核层厚度较光照组明显增加（P<0.05）。荧光显微镜下可见,光照组视网膜外核层凋亡细胞较正常对照组明显增多（P<0.05）,α-倒捻子素组视网膜外核层凋亡细胞较光照组明显减少（P<0.05）。光照后,小鼠视网膜中caspase-3活性及MDA含量均较正常对照组增高（P<0.05）,α-倒捻子素组caspase-3活性及MDA含量则较光照组明显降低（P<0.05）。SOD、Gpx活性以及GSH含量在光照组中较正常对照降低（P<0.05）,在α-倒捻子素组较光照组增高（P<0.05）。免疫印迹法测得α-倒捻子素组HO-1表达水平较光照组高。荧光显微镜下见Nrf2阳性表达细胞主要分布在视网膜外核层,光照后,Nrf2被激活,且α-倒捻子素组Nrf2表达水平高于光照组（P<0.05）。结论:α-倒捻子素能够抑制光照导致的氧化损伤,减少视网膜组织的脂质过氧化,通过活化Nrf2,刺激Nrf2转位入核,调控Nrf2表达增高,激活其下游的内源性抗氧化防御系统,如SOD、Gpx、GSH以及HO-1,对视网膜组织起到保护作用,抑制由光照引起的感光细胞凋亡,改善由光照导致的视网膜组织形态改变及视网膜功能减退。本实验证明α-倒捻子素具有抗氧化作用,能够抑制光照引起的视网膜损伤,对视网膜起保护作用,从而为临床应用α-倒捻子素提供实验基础。
二、TUNEL法检测Vc对光照后兔RPE细胞凋亡的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、TUNEL法检测Vc对光照后兔RPE细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
（1）基于铂前药的多功能基因载体用于肿瘤协同治疗（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 癌症治疗 |
| 1.1.1 铂药化疗 |
| 1.1.2 基因治疗 |
| 1.1.3 联合铂药化疗和基因治疗 |
| 1.2 联合治疗纳米递送载体 |
| 1.2.1 无机纳米载体 |
| 1.2.2 高分子纳米载体 |
| 1.2.3 其它载体 |
| 1.3 本论文选题依据和研究内容 |
| 第二章 含铂聚前药纳米载体用于光控基因递送及协同逆转肿瘤耐药性 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料及测试方法 |
| 2.2.1 主要药品及化学试剂 |
| 2.2.2 主要生化试剂 |
| 2.2.3 测试仪器及方法 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 四价光敏铂trans,trans,trans-[Pt(N_3)_2(OH)_2(py)(NH_3)] (Pt(Ⅳ)的合成 |
| 2.3.2 光敏铂前药骨架的阳离子聚合物(PtCP)的合成 |
| 2.3.3 合成罗丹明B(RhB)标记的PtCP (RhB-PtCP) |
| 2.3.4 端氨基聚乙二醇mPEG_(2k)-NH_2的合成 |
| 2.3.5 合成聚乙二醇接枝的透明质酸(HA-PEG,HP) |
| 2.3.6 光源及光照条件 |
| 2.3.7 光响应主链含铂阳离子聚合物纳米粒(NP_(PtCP))的制备及表征 |
| 2.3.8 PtCP的缓冲能力 |
| 2.3.9 NP_(PtCP/si(c-fos))的制备及表征 |
| 2.3.10 透明质酸遮蔽的复合纳米粒CNP_(PtCP/si(c-fos))的制备及表征 |
| 2.3.11 抗反离子能力 |
| 2.3.12 CNP_(PtCP/si(c-fos))的稳定性 |
| 2.3.13 Pt(Ⅳ)对基因的安全性 |
| 2.3.14 CNP_(PtCP/si(c-fos))的光敏感性 |
| 2.3.15 检测叠氮自由基(N_3~·) |
| 2.3.16 叠氮自由基(N_3~·)对基因的安全性 |
| 2.3.17 Pt及si(c-fos)的光响应性释放 |
| 2.3.18 细胞培养 |
| 2.3.19 NP_(PtCP/si(c-fos))及CNP_(PtCP/si(c-fos))的细胞内吞比较 |
| 2.3.20 叠氮自由基(N3·)诱导溶酶体破裂 |
| 2.3.21 光控溶酶体逃逸及基因卸载 |
| 2.3.22 细胞毒性评价 |
| 2.3.23 联合用药指数(Combination Index (CI)) |
| 2.3.24 细胞凋亡 |
| 2.3.25 Western blotting分析 |
| 2.3.26 细胞Pt内吞 |
| 2.3.27 确立肿瘤模型 |
| 2.3.28 Pt的体内分布 |
| 2.3.29 抑瘤实验 |
| 2.3.30 肿瘤组织氧化型自由基检测及肿瘤细胞溶酶体破裂 |
| 2.3.31 血常规及生化指标分析 |
| 2.3.32 组织学及免疫荧光分析 |
| 2.3.33 TUNEL检测 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 四价光敏铂前药Pt(Ⅳ)的合成 |
| 2.4.2 PtCP的合成 |
| 2.4.3 mPEG_(2k)-NH_2的合成 |
| 2.4.4 聚乙二醇接枝的透明质酸(HP)的合成 |
| 2.4.5 NP_(PtCP),NP_(PtCP/si(c-fos))及CNP_(PtCP/sic-fos))的制备及表征 |
| 2.4.6 CNP_(PtCP/si(c-fos))的稳定性 |
| 2.4.7 Pt(Ⅳ)对基因的安全性分析 |
| 2.4.8 Pt(Ⅳ)和PtCP的光响应性 |
| 2.4.9 CNP_(PtCP/si(c-fos))的光敏性 |
| 2.4.10 CNP_(PtCP/si(c-fos))的靶向性 |
| 2.4.11 叠氮自由基(N3·)的产生 |
| 2.4.12 N_3~·的安全性 |
| 2.4.13 N_3~·辅助溶酶体逃逸及光控基因卸载 |
| 2.4.14 CNP_(PtCP/si(c-fos))的体外抗癌效果评价 |
| 2.4.15 CNP_(PtCP/si(c-fos))的抗癌机理分析 |
| 2.4.16 细胞凋亡检测 |
| 2.4.17 动物水平抑瘤实验 |
| 2.4.18 血液生化指标及H&E染色 |
| 2.4.19 机制研究 |
| 2.5 本章结论 |
| 第三章 近红外光激活的多模式成像诊疗系统用于癌症联合治疗 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料及测试方法 |
| 3.2.1 主要药品及化学试剂 |
| 3.2.2 主要生化试剂 |
| 3.2.3 测试仪器及方法 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 四价光敏铂trans,trans,trans-[Pt(N_3)_2(OH)_2(py)(NH_3)] (Pt(Ⅳ)的合成 |
| 3.3.2 光敏铂前药骨架的聚合物(PtP)的合成 |
| 3.3.3 上转换纳米粒(UCNP)的制备及表征 |
| 3.3.4 UCNP@Pt的制备及表征 |
| 3.3.5 UCNP@Pt@siRNA的制备及表征 |
| 3.3.6 光源 |
| 3.3.7 UCNP@Pt@siRNA的近红外光响应性 |
| 3.3.8 UCNP@Pt@siRNA的近红外光响应性释放 |
| 3.3.9 细胞培养 |
| 3.3.10 UCNP@Pt@siRNA的细胞内吞 |
| 3.3.11 细胞毒性评价 |
| 3.3.12 细胞凋亡 |
| 3.3.13 Western blotting分析 |
| 3.3.14 确立肿瘤模型 |
| 3.3.15 多模式成像 |
| 3.3.16 抑瘤实验 |
| 3.3.17 血常规及生化指标分析 |
| 3.3.18 组织学及免疫荧光分析 |
| 3.3.19 TUNEL检测 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 Pt(Ⅳ)的合成 |
| 3.4.2 PPt的合成 |
| 3.4.3 UCNP@Pt@siRNA的制备及表征 |
| 3.4.4 UCNP@Pt@siRNA的光敏感性 |
| 3.4.5 UCNP@Pt@siRNA的细胞内吞 |
| 3.4.6 UCNP@Pt@siPlk1的体外抗癌效果评价 |
| 3.4.7 MR/CT/UCL三模式成像 |
| 3.4.8 动物水平抑瘤实验 |
| 3.4.9 血液生化指标及H&E染色 |
| 3.4.10 机制研究 |
| 3.5 本章结论 |
| 第四章 链消除聚铂高分子用于高效CRISPR/Cas9基因编辑-化疗协同治疗 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料及测试方法 |
| 4.2.1 主要药品及化学试剂 |
| 4.2.2 主要生化试剂 |
| 4.2.3 测试仪器及方法 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 四价铂前药cis,cis,trans-[Pt(Cl)_2(N_3)(OH)_2][Pt(Ⅳ)]的合成 |
| 4.3.2 链消除聚铂高分子(CSPt)的制备 |
| 4.3.3 纳米粒NP_(CSPt)的制备与表征 |
| 4.3.4 NP_(CSPt)还原电势测定 |
| 4.3.5 NP_(CSPt/pNC)的制备及表征 |
| 4.3.6 NP_(CSPt)和NP_(CSPt/pNC)的稳定性比较 |
| 4.3.7 NP_(CSPt)和NP_(CSPt/pNC)的还原敏感性 |
| 4.3.8 NP_(CSPt/pNC)中Pt及pNC的响应性释放 |
| 4.3.9 细胞培养 |
| 4.3.10 细胞内吞 |
| 4.3.11 细胞转染 |
| 4.3.12 细胞毒性评价 |
| 4.3.13 细胞凋亡 |
| 4.3.14 细胞划痕实验 |
| 4.3.15 细胞增殖分析 |
| 4.3.16 确立肿瘤模型 |
| 4.3.17 抑瘤实验 |
| 4.3.18 血常规及生化指标分析 |
| 4.3.19 组织学及免疫荧光分析 |
| 4.3.20 TUNEL检测 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 Pt(Ⅳ)的合成 |
| 4.4.2 CSPt的合成 |
| 4.4.3 NP_(CSPt)和NP_(CSPt/pNC)的制备及表征 |
| 4.4.4 NP_(CSPt)和NP_(CSPt/pNC)的还原敏感性 |
| 4.4.5 溶酶体逃逸和基因卸载 |
| 4.4.6 NP_(CSPt/pEZH2)高效的基因编辑能力 |
| 4.4.7 NP_(CSPt/pEZH2)的体外抗癌效果及机理 |
| 4.4.8 动物水平抑瘤实验 |
| 4.4.9 血液生化指标及H&E染色 |
| 4.4.10 机制研究 |
| 4.5 本章结论 |
| 全文总结及展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（2）骨髓间充质干细胞对光感受器细胞自噬与溶酶体功能影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 光感受器细胞损伤和溶酶体功能 |
| 1.1.1 溶酶体与细胞自噬 |
| 1.1.2 溶酶体参与光照后光感受器细胞膜盘代谢 |
| 1.1.3 视网膜色素变性与溶酶体功能 |
| 1.1.4 其他应激条件下光感受器细胞内溶酶体功能 |
| 1.1.5 溶酶体相关功能障碍对光感受器细胞影响 |
| 1.1.6 小结 |
| 1.2 光感受器细胞与mTOR信号通路 |
| 1.2.1 mTOR在光感受器细胞中的作用 |
| 1.2.2 调节mTOR对光感受器影响的具体机制 |
| 1.2.3 小结 |
| 第二章 MNU诱导光感受器细胞损伤模型的建立 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 光感受器细胞 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验器材 |
| 2.1.4 溶液配制 |
| 2.2 实验方法及步骤 |
| 2.2.1 661w细胞复苏、冻存与培养 |
| 2.2.2 实验分组 |
| 2.2.3 细胞活力检测 |
| 2.2.4 细胞形态观察 |
| 2.2.5 细胞活性氧检测 |
| 2.2.6 蛋白提取及western blot检测 |
| 2.2.7 数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 MNU对细胞活力的影响 |
| 2.3.2 MNU对细胞形态的影响 |
| 2.3.3 MNU对细胞活性氧水平的影响 |
| 2.3.4 MNU对细胞凋亡蛋白表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 光感受器细胞损伤过程中细胞自噬与溶酶体功能的变化.. |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 光感受器细胞 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验器材 |
| 3.1.4 溶液配制 |
| 3.2 实验方法与步骤 |
| 3.2.1 实验分组 |
| 3.2.2 细胞透射电镜样品制备与观察 |
| 3.2.3 蛋白提取与western blot检测 |
| 3.2.4 RNA提取与逆转录、qPCR检测 |
| 3.2.5 自噬体融合情况检测 |
| 3.2.6 自噬抑制剂浓度筛选与自噬抑制情况检测 |
| 3.2.7 细胞活性检测 |
| 3.2.8 溶酶体探针染色 |
| 3.2.9 免疫荧光 |
| 3.2.10 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 MNU对细胞内自噬样囊泡的影响 |
| 3.3.2 MNU对细胞自噬标记物表达及自噬流的影响 |
| 3.3.3 抑制细胞自噬对MNU损伤细胞的影响 |
| 3.3.4 MNU对细胞溶酶体及溶酶体酶的表达的影响 |
| 3.3.5 MNU对细胞内PI3K-AKT-MTOR通路的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 骨髓间充质干细胞对光感受器细胞的保护作用 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物和细胞 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验器材 |
| 4.1.4 溶液配制 |
| 4.2 实验方法与步骤 |
| 4.2.1 骨髓间充质干细胞分离 |
| 4.2.2 骨髓间充质干细胞培养、传代 |
| 4.2.3 骨髓间充质干细胞形态观察 |
| 4.2.4 骨髓间充质干细胞表面标记物流式细胞仪检测 |
| 4.2.5 骨髓间充质干细胞共培养体系的建立 |
| 4.2.6 骨髓间充质干细胞共培养细胞形态观察 |
| 4.2.7 细胞活性检测 |
| 4.2.8 细胞活性氧检测 |
| 4.2.9 蛋白提取与western blot检测 |
| 4.2.10 数据分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 BMSCs形态观察 |
| 4.3.2 BMSCs表面标志物鉴定 |
| 4.3.3 BMSCs对 MNU处理的661w细胞形态的影响 |
| 4.3.4 BMSCs对 MNU处理的661w细胞活力的影响 |
| 4.3.5 BMSCs对 MNU处理的661w细胞活性氧水平的影响 |
| 4.3.6 BMSCs对 MNU处理的661w细胞凋亡蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 骨髓间充质干细胞对光感受器细胞自噬与溶酶体功能的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验细胞 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 实验器材 |
| 5.1.4 溶液配制 |
| 5.2 实验方法与步骤 |
| 5.2.1 骨髓间充质干细胞共培养体系的建立 |
| 5.2.2 细胞透射电镜样品制备与观察 |
| 5.2.3 蛋白提取与western blot检测 |
| 5.2.4 溶酶体探针染色 |
| 5.2.5 免疫荧光 |
| 5.2.6 数据分析 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 BMSCs对 MNU处理661w细胞自噬样囊泡的影响 |
| 5.3.2 BMSCs对 MNU处理661w细胞自噬相关蛋白表达的影响 |
| 5.3.3 BMSCs对 MNU处理661w细胞溶酶体染色及溶酶体酶分布的影响 |
| 5.3.4 BMSCs对 MNU处理661w细胞mTOR活性形式表达的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间科研成果 |
| 致谢 |
（3）短肽自组装纳米材料的构建及其生物分析应用（论文提纲范文）
| 论文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1 短肽及其自组装的概述 |
| 1.1 短肽的简介 |
| 1.2 短肽的自组装 |
| 1.3 LVFF短肽的简介及应用 |
| 1.4 短肽自组装的构建及在生物分析中的发展趋势 |
| 2 AD与恶性肿瘤的简介 |
| 2.1 恶性肿瘤与唾液酸 |
| 2.2 AD及相关生物分子 |
| 2.3 AD与恶性肿瘤的诊疗研究进展 |
| 3 本论文的研究目的、研究内容与创新点 |
| 3.1 研究目的 |
| 3.2 研究内容 |
| 3.3 创新点 |
| 参考文献 |
| 第二章 唾液酸靶向的仿生多价肽纳米管用于转移性黑色素瘤的成像及联合治疗 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 试剂与材料 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 短肽的自组装及其与小分子的共组装 |
| 3.2 PPNT的制备与表征 |
| 3.3 PPNT与唾液酸之间的相互作用 |
| 3.4 I-PPNT的制备与表征 |
| 3.5 I-PPNT的细胞摄取 |
| 3.6 I-PPNT的活性氧及在细胞内的光动力活性 |
| 3.7 I-PPNT光照后的细胞毒性 |
| 3.8 I/S-PPNT中ICG与SN38的共定位 |
| 3.9 I/S-PPNT的药物释放率及细胞毒性 |
| 3.10 I-PPNT的原位肿瘤靶向性 |
| 3.11 I-PPNT在肿瘤的渗透 |
| 3.12 I/S-PPNT在肿瘤内的光动力活性 |
| 3.13 I/S-PPNT在体内的原位瘤抑制效果 |
| 3.14 I/S-PPNT在体内的肿瘤肺转移抑制效果 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 糖肽纳米纤维用于Aβ-唾液酸相互作用分析及Aβ高灵敏度检测 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 试剂与材料 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 糖肽的设计合成与表征 |
| 3.2 糖肽的自组装与表征 |
| 3.3 唾液酸与不同Aβ片段的相互作用 |
| 3.4 荧光“Turn-on”法对Aβ_(1-40)单体的检测 |
| 3.5 选择性实验 |
| 3.6 Aβ_(1-40)与唾液酸相互作用机制研究 |
| 3.7 生物样品中Aβ_(1-40)的检测 |
| 3.8 Aβ聚集的监测与抑制剂筛选 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 自组装多功能肽对生物金属离子的比率型成像 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 试剂与材料 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 SA-AQZ与AQZKL-7的合成与表征 |
| 3.2 AQZ的接枝率 |
| 3.3 AQZKL-7与KL-7的共组装及表征 |
| 3.4 QDs@AQZ@NR的制备与表征 |
| 3.5 Al@QDs@AQZ@NR的制备与表征 |
| 3.6 Al@QDs@AQZ@NR对 Zn~(2+)、Cu~(2+)的响应性能评估 |
| 3.7 Al@QDs@AQZ@NR的稳定性及对Zn~(2+)、Cu~(2+)的选择性 |
| 3.8 Al@QDs@AQZ@NR对细胞外源性Zn~(2+)、Cu~(2+)的比率型成像 |
| 3.9 Al@QDs@AQZ@NR对 NO刺激细胞释放Zn~(2+)、Cu~(2+)的成像 |
| 3.10 Al@QDs@AQZ@NR对细胞外源性Zn~(2+)、Cu~(2+)的检测限 |
| 3.11 Al@QDs@AQZ@NR对斑马鱼中Zn~(2+)、Cu~(2+)的成像 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 多功能肽组装胶束用于Aβ沉积与活性氧的同时清除研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 试剂与材料 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 tk-GSH的合成与表征 |
| 3.2 PLT的合成与表征 |
| 3.3 PGLT的合成与表征 |
| 3.4 多功能肽组装胶束的制备与表征 |
| 3.5 MPLT、MPGLT抑制Aβ的聚集 |
| 3.6 MPGLT清除活性氧 |
| 3.7 MPLT、MPGLT的生物相容性 |
| 3.8 MPLT体外诱导自噬的研究 |
| 3.9 MPGLT-IR780 的制备及细胞摄取 |
| 3.10 MPLT、MPGLT降低Aβ_(1-42)与ROS诱导的细胞毒性 |
| 3.11 MPGLT降低Aβ+Cu~(2+)诱导的细胞毒性 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第六章 总结与展望 |
| 附录:攻读博士学位期间科研成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（4）一种近红外光响应性水凝胶的制备及其在可控药物释放中的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 水凝胶简介 |
| 1.1.1 水凝胶的分类 |
| 1.1.2 水凝胶的生物医学应用简介 |
| 1.2 响应性水凝胶在药物递送上的应用 |
| 1.2.1 光响应性水凝胶 |
| 1.2.2 温度响应性水凝胶 |
| 1.2.3 糖响应性水凝胶 |
| 1.2.4 pH响应性水凝胶 |
| 1.2.5 酶响应性水凝胶 |
| 1.3 基于苯硼酸与糖结合的响应性药物载体 |
| 1.4 本论文的设计思路和创新点 |
| 第二章 果糖结构异构化对果糖聚合物-苯硼酸半酯聚合物成胶性质的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 原料和试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 单体和聚合物的合成 |
| 2.2.4 NP-Fru3-BOB2、NP-Fru3-BOB1 等纳米粒子的制备 |
| 2.2.5 动态光散射法(DLS)表征动态共价键的强度 |
| 2.2.6 凝胶的配制 |
| 2.2.7 凝胶的流变性研究 |
| 2.2.8 凝胶的形貌表征 |
| 2.2.9 凝胶的可注射性表征 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 果糖聚合物的合成与表征 |
| 2.3.2 BOB-HA的合成与表征 |
| 2.3.3 果糖异构体对胶束性能的影响 |
| 2.3.4 果糖异构体对凝胶性能的影响 |
| 2.3.5 组分比例对凝胶性能的影响 |
| 2.3.6 透明质酸BOB接枝率对凝胶性能的研究 |
| 2.3.7 凝胶的可注射性 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 凝胶的光控降解性释药及其抗肿瘤应用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 原料与试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 凝胶的准备 |
| 3.2.4 体外检测H_2O_2的产生量 |
| 3.2.5 凝胶的响应性降解研究 |
| 3.2.6 体外进行光控药物缓释过程 |
| 3.2.7 细胞的培养、传代及冻存 |
| 3.2.8 体外细胞毒性实验 |
| 3.2.9 凝胶在活体中的生理毒性实验 |
| 3.2.10 载药凝胶在活体内的降解过程 |
| 3.2.11 载药凝胶在肿瘤组织中的光控释放药物过程 |
| 3.2.12载药水凝胶Gel/DOX的体内化疗实验 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 体外检测H_2O_2的产生量 |
| 3.3.2 凝胶的光降解 |
| 3.3.3 凝胶的毒性检测 |
| 3.3.4 凝胶在活体中的生理毒性检测 |
| 3.3.5 凝胶的体外光降解释放药物 |
| 3.3.6 载药凝胶在活体内的降解释放药物过程 |
| 3.3.7 载药凝胶在肿瘤组织中的光控释放药物过程 |
| 3.3.8载药水凝胶Gel/DOX的体内化疗实验 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 部分材料数据表征 |
| 附录2 攻读硕士学位期间撰写的论文 |
| 附录3 攻读硕士学位期间申请的专利 |
| 附录4 攻读硕士学位期间参加的科研项目 |
| 致谢 |
（5）Vps35抑制CDK5/p35活化下调p-tau表达在视网膜神经节细胞变性中的机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 建立大鼠谷氨酸兴奋性毒性相关视网膜神经变性动物模型 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 Vps35 调控CDK5/p35 影响p-tau在视网膜神经节细胞中表达的机制研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 Vps35 在溶酶体降解途径中转运CDK5/p35 的机制研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 Vps35 研究新进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 CDK5 与神经变性疾病研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述三 内在光敏性视网膜神经节细胞的最新研究进展 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表文章 |
| 致谢 |
（6）小鼠视网膜光损伤模型中Fra-2的表达及作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 强光暴露对小鼠视网膜的损伤研究 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 动物及分组 |
| 1.1.2 光损伤模型的建立 |
| 1.1.2.1 实验器材与试剂 |
| 1.1.2.2 实验步骤 |
| 1.1.3 小鼠视网膜光损伤显微结构的观察 |
| 1.1.3.1 实验器材与试剂 |
| 1.1.3.2 实验步骤 |
| 1.1.4 Western blot检测相关蛋白表达水平 |
| 1.1.4.1 实验器材与试剂 |
| 1.1.4.2 实验步骤 |
| 1.1.5 实时荧光定量PCR (RT-PCR)分析 |
| 1.1.5.1 实验器材与试剂 |
| 1.1.5.2 实验步骤 |
| 1.1.6 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 HE染色观察光暴露对小鼠视网膜的损伤情况 |
| 1.2.2 Western blot检测光暴露后小鼠视网膜中凋亡相关蛋白的表达情况 |
| 1.2.3 荧光定量PCR检测小鼠视网膜组织中Fra-2和PARP-1mRNA表达水平 |
| 1.2.4 Western blot检测光照暴露对小鼠视网膜中Fra-2和PARP-1的蛋白表达情况 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 结论 |
| 第二部分 过表达或者干扰表达Fra-2对RGC-5细胞的影响 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.2.1 RGC-5细胞的培养 |
| 2.1.2.2 质粒构建 |
| 2.1.2.3 质粒转染 |
| 2.1.2.4 Western blot检测 |
| 2.1.2.5 MTT检测质粒转染后RGC-5细胞的增殖活力 |
| 2.1.2.6 流式细胞技术检测转染质粒后RGC-5细胞的凋亡情况 |
| 2.1.2.7 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 免疫荧光显微镜观察质粒转染情况 |
| 2.2.2 Western blot检测Fra-2蛋白表达情况 |
| 2.2.3 过表达Fra-2抑制RGC-5细胞的增殖活性 |
| 2.2.4 过表达Fra-2诱导RGC-5细胞凋亡 |
| 2.2.5 PARP-1/AIF通路参与Fra-2诱导的RGC-5细胞凋亡 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三部分 干扰Fra-2表达对光诱导RGC-5细胞损伤的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.1.1 实验仪器 |
| 3.1.1.2 实验试剂与耗材 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.1.2.1 RGC-5细胞培养以及干扰质粒转染 |
| 3.1.2.2 MTT检测培养48 h后RGC-5细胞的增殖活性 |
| 3.1.2.3 流式检测培养48 h后RGC-5细胞的凋亡情况 |
| 3.1.2.4 Western blot检测 |
| 3.1.2.5 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 干扰Fra-2的表达显着提高光暴露后RGC-5细胞的增殖活性 |
| 3.2.2 干扰Fra-2表达显着抑制光暴露诱导的RGC-5细胞凋亡 |
| 3.2.3 PARP-1/AIF信号通路参与干扰Fra-2的表达对RGC-5细胞光损伤的保护作用 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（7）光动力调控的纳米药物用于抗肿瘤治疗的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 纳米药物的肿瘤治疗 |
| 1.2 光动力治疗 |
| 1.3 活性氧自由基敏感的纳米药物 |
| 1.3.1 含硒的纳米药物 |
| 1.3.2 含碲的纳米药物 |
| 1.3.3 含芳香基硼酸酯的纳米药物 |
| 1.3.4 含有硫醚键的纳米药物 |
| 1.3.5 含缩硫酮键的纳米药物 |
| 1.3.6 含乙烯化硫醚的纳米药物 |
| 1.4 乏氧敏感的纳米药物 |
| 1.4.1 含醌的纳米药物 |
| 1.4.2 含有硝基衍生物的纳米药物 |
| 1.4.3 含偶氮衍生物的纳米药物 |
| 1.4.4 含金属复合物的纳米药物 |
| 1.5 PDT与ROS敏感的纳米药物 |
| 1.6 PDT与乏氧相关的纳米药物 |
| 1.6.1 克服乏氧提高PDT疗效 |
| 1.6.2 利用PDT加剧的乏氧提高疗效 |
| 1.7 本论文的选题依据及研究内容 |
| 参考文献 |
| 第二章 可见光调控活性可逆的蛋白质前药用于协同抗肿瘤治疗 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 药品、细胞和动物 |
| 2.2.2 KPEI的合成与表征 |
| 2.2.3 RNBC及荧光标记RNBC的合成 |
| 2.2.4 HA-Hp的合成 |
| 2.2.5 H_2O_2触发RNBC活性的恢复 |
| 2.2.6 NCs的制备与表征 |
| 2.2.7 细胞内H_2O_2含量的测定 |
| 2.2.8 细胞内动力学 |
| 2.2.9 体外抗肿瘤疗效 |
| 2.2.10 药代动力学和生物分布 |
| 2.2.11 体内抗肿瘤疗效 |
| 2.2.12 组织学检测 |
| 2.2.13 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 RNBC的合成与表征 |
| 2.3.2 纳米复合物的制备与表征 |
| 2.3.3 HA调控肿瘤细胞靶向性和细胞内吞 |
| 2.3.4 PDT促进ROS产生和蛋白质活性恢复 |
| 2.3.5 体外抗肿瘤疗效 |
| 2.3.6 肿瘤富集和体内细胞内吞 |
| 2.3.7 体内协同抗肿瘤疗效 |
| 2.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 光动力激活的具有超高载药量和级联响应性的药物递送体系用于抗肿瘤治疗 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 药品、细胞、动物和仪器 |
| 3.2.2 BE-CPT_2的合成与表征 |
| 3.2.3 Boc-CPT_2的合成与表征 |
| 3.2.4 BE-CPT_2的释放机制 |
| 3.2.5 BE-CPT_2@Hp纳米粒的制备与表征 |
| 3.2.6 ROS刺激的体外药物释放 |
| 3.2.7 体内外CPT释放的测定 |
| 3.2.8 体外抗肿瘤疗效 |
| 3.2.9 药代动力学和生物分布 |
| 3.2.10 体内抗肿瘤疗效 |
| 3.2.11 组织学检测 |
| 3.2.12 体内安全性 |
| 3.2.13 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 BE-CPT_2的合成与降解 |
| 3.3.2 纳米粒的制备与表征 |
| 3.3.3 体内外PDT促进CPT释放 |
| 3.3.4 体外抗肿瘤疗效 |
| 3.3.5 组织分布 |
| 3.3.6 体内协同抗肿瘤疗效 |
| 3.3.7 体内安全性 |
| 3.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 光动力激活的乏氧敏感药物递送体系用于协同抗肿瘤治疗 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 药品、细胞和动物 |
| 4.2.2 PEI-NI的合成与表征 |
| 4.2.3 HA-Ce6的合成与表征 |
| 4.2.4 纳米粒的制备与表征 |
| 4.2.5 药物包载及体外释放 |
| 4.2.6 细胞内吞及胞内分布 |
| 4.2.7 体外抗肿瘤疗效 |
| 4.2.8 组织分布 |
| 4.2.9 体内光声成像 |
| 4.2.10 体内抗肿瘤疗效 |
| 4.2.11 组织学检测 |
| 4.2.12 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 PEI-NI的合成与表征 |
| 4.3.2 纳米粒的表征 |
| 4.3.3 纳米粒的降解及DOX的释放 |
| 4.3.4 细胞内吞和胞内分布 |
| 4.3.5 体外抗肿瘤疗效 |
| 4.3.6 组织分布 |
| 4.3.7 体内光声成像 |
| 4.3.8 体内抗肿瘤疗效 |
| 4.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 光调控具有超高载药量和乏氧敏感性的药物递送体系用于抗肿瘤治疗· |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 药品、细胞、动物和仪器 |
| 5.2.2 hQ-CPT_2的合成与表征 |
| 5.2.3 Boc-CPT_2的合成与表征 |
| 5.2.4 hQ-CPT_2的释放机制 |
| 5.2.5 纳米粒的制备与表征 |
| 5.2.6 体外光照促进CPT的释放 |
| 5.2.7 体内光照促进CPT的释放 |
| 5.2.8 分子机制 |
| 5.2.9 体内光声成像 |
| 5.2.10 体外抗肿瘤疗效 |
| 5.2.11 药代动力学和生物分布 |
| 5.2.12 体内抗肿瘤疗效 |
| 5.2.13 组织学检测 |
| 5.2.14 4T1转移瘤的抗肿瘤疗效 |
| 5.2.15 体内安全性 |
| 5.2.16 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 乏氧敏感CPT二聚体前药的合成和表征 |
| 5.3.2 纳米粒的制备与表征 |
| 5.3.3 体外光促进CPT释放 |
| 5.3.4 体内光声成像及CPT释放 |
| 5.3.5 体外协同抗肿瘤疗效 |
| 5.3.6 药代动力学和组织分布 |
| 5.3.7 体内协同抗肿瘤疗效 |
| 5.3.8 体内抗转移疗效及分子机制 |
| 5.3.9 体内安全性 |
| 5.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 全文总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 研究展望 |
| 创新点 |
| 攻读学位期间发表的成果 |
| 致谢 |
（8）芬戈莫德对大鼠视网膜光损伤的保护作用及免疫机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究工作的背景与意义 |
| 1.1.1 研究背景及进展 |
| 1.1.2 研究意义 |
| 1.2 研究内容 |
| 1.3 本文主要贡献及创新 |
| 1.4 本论文结构安排 |
| 第二章 视网膜光损伤大鼠模型建立与鉴定 |
| 2.1 选题思路与实验设计 |
| 2.2 实验仪器设备与药品试剂 |
| 2.2.1 实验仪器设备 |
| 2.2.2 实验药品与试剂 |
| 2.3 动物造模与鉴定 |
| 2.3.1 动物造模 |
| 2.3.2 模型鉴定 |
| 2.4 统计分析 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 视网膜组织形态学变化 |
| 2.5.2 视网膜外核层细胞层数计数 |
| 2.5.3 视网膜功能改变 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 本章小结 |
| 第三章 视网膜光损伤的免疫机制研究 |
| 3.1 选题思路与实验设计 |
| 3.1.1 选题思路 |
| 3.1.2 实验设计 |
| 3.2 实验仪器设备与药品试剂 |
| 3.2.1 实验仪器设备 |
| 3.2.2 实验药品与试剂 |
| 3.2.3 实验抗体信息 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 实验取材与标本制备 |
| 3.3.2 视网膜CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+T细胞检测(免疫组化) |
| 3.3.3 视网膜CD3~+、CD4~+、CD8~+免疫蛋白检测(WesternBlotting) |
| 3.3.4 视网膜凋亡细胞检测(TUNEL染色) |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 光损伤组视网膜CD3~+CD4~+T细胞增多 |
| 3.4.2 光损伤组视网膜CD3~+CD8~+T细胞增多 |
| 3.4.3 光损伤组视网膜CD3~+、CD8~+蛋白表达增加 |
| 3.4.4 光损伤组视网膜外核层凋亡细胞增多 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 芬戈莫德(FTY720)对视网膜光损伤的结构和功能保护 |
| 4.1 选题思路与实验设计 |
| 4.1.1 选题思路 |
| 4.1.2 实验设计 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 视网膜组织形态学改变 |
| 4.2.2 视网膜外核层细胞层数计数 |
| 4.2.3 视网膜功能改变 |
| 4.2.4 统计分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 视网膜组织形态学改变 |
| 4.3.2 视网膜外核层细胞层数计数 |
| 4.3.3 视网膜功能改变 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 芬戈莫德(FTY720)对视网膜光损伤的免疫机制研究 |
| 5.1 选题思路与实验设计 |
| 5.1.1 选题思路 |
| 5.1.2 实验设计 |
| 5.2 实验仪器设备和药品试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 视网膜CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+T细胞检测(免疫组化) |
| 5.3.2 视网膜CD3~+、CD4~+、CD8~+免疫蛋白检测(WesternBlotting) |
| 5.3.3 视网膜凋亡细胞检测(TUNEL染色) |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 芬戈莫德可减少视网膜CD3~+CD4~+T细胞 |
| 5.4.2 芬戈莫德可减少视网膜CD3~+CD8~+T细胞 |
| 5.4.3 芬戈莫德可减少视网膜CD3~+和CD8~+蛋白表达 |
| 5.4.4 芬戈莫德可减少视网膜外核层感光细胞的凋亡 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 本章小结 |
| 第六章 全文总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 后续工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 |
（9）枸杞多糖对兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡内质网信号传导途径的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 可见光照射对体外培养兔视网膜色素上皮细胞凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 枸杞多糖对兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡内质网信号途径的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 枸杞多糖提取工艺优化及药理作用研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 个人简历 |
（10）α-倒捻子素对小鼠视网膜光损伤的保护作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.分析与讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
四、TUNEL法检测Vc对光照后兔RPE细胞凋亡的影响（论文参考文献）
- [1]基于铂前药的多功能基因载体用于肿瘤协同治疗[D]. 张庆飞. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [2]骨髓间充质干细胞对光感受器细胞自噬与溶酶体功能影响的研究[D]. 李莹. 吉林大学, 2020(08)
- [3]短肽自组装纳米材料的构建及其生物分析应用[D]. 雷莉. 华东师范大学, 2020(12)
- [4]一种近红外光响应性水凝胶的制备及其在可控药物释放中的应用研究[D]. 王改娜. 南京邮电大学, 2019(02)
- [5]Vps35抑制CDK5/p35活化下调p-tau表达在视网膜神经节细胞变性中的机制研究[D]. 高铃. 中国人民解放军陆军军医大学, 2018(03)
- [6]小鼠视网膜光损伤模型中Fra-2的表达及作用机制研究[D]. 吕菊玲. 武汉大学, 2018(01)
- [7]光动力调控的纳米药物用于抗肿瘤治疗的研究[D]. 何华. 苏州大学, 2018(12)
- [8]芬戈莫德对大鼠视网膜光损伤的保护作用及免疫机制研究[D]. 张茜. 电子科技大学, 2018(09)
- [9]枸杞多糖对兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡内质网信号传导途径的影响[D]. 杨冬萍. 宁夏医科大学, 2017(02)
- [10]α-倒捻子素对小鼠视网膜光损伤的保护作用的研究[D]. 方圆. 南京医科大学, 2015(04)