一、Dynamic tracking and mobility analysis of single GLUT4 storage vesicle in live 3T3-L1 cells（论文文献综述）
韩倩[1]（2017）在《日本血吸虫囊泡膜蛋白2（SjVAMP2）的生物学功能初探》文中研究表明血吸虫病是由血吸虫感染引起的危害严重的人畜共患寄生虫病。虫卵是血吸虫病的主要致病因素,同时也是该病的传染源。血吸虫能够逃避宿主的免疫攻击,在宿主的血管中存活长达十几年甚至更长时间,这很大程度与其特异的体被结构有关。血吸虫的体被是一特殊的合胞体结构是虫体与宿主接触的直接界面,由表膜、基质和基膜三部分组成。血吸虫体被表膜是紧密的双单位膜结构,且不断地进行更新,有助于虫体逃避宿主的免疫攻击。血吸虫体被基质中的多膜囊结构通过与表膜的融合,进而帮助表膜形成或更新。膜融合的关键分子是SNARE（N-甲基马来酰胺敏感因子附着蛋白的膜受体）,通过囊泡膜上的v-SNARE与靶膜上的t-SNARE形成SNARE复合物,从而促进了两个膜的接近与融合。VAMP（囊泡膜蛋白）,即v-SNARE,通过N端保守结构域与t-SNARE的N端聚合,级联放大了整个SNARE复合物形成过程的聚合反应,这一反应也是整个膜融合过程中的限速步骤。VAMP2是研究最早、最多的囊泡膜蛋白,在神经信号转导、激素释放、胰岛素依赖的葡萄糖转运等过程中均起着关键的作用。本实验室在前期的日本血吸虫体被蛋白质组学的研究中,鉴定到了VAMP2蛋白分子,本研究旨在探究日本血吸虫VAMP2（Sj VAMP2）的生物学功能,为阐述日本血吸虫的生长发育机制积累知识,为该病的防控提供思路。生物信息学分析表明,日本血吸虫SjVAMP2为单跨膜蛋白,属于囊泡膜蛋白家族的成员之一。该蛋白N端含有一螺旋卷曲的保守结构功能域（N-coiled coil domain）,C端含有一个血吸虫所特有的保守结构,有作为血吸虫病诊断抗原及药物靶点的潜在价值。本文首次克隆出SjVAMP2基因482bp的ORF序列。实时定量PCR分析表明SjVAMP2在各个检测的生长发育阶段虫体中均有表达,但在28d及42d虫体中的转录水平较高,14d和35 d虫体转录水平次之,在42d雌虫中的表达量明显高于42d雄虫,可能与这些阶段虫体处于快速生长期或雌虫产卵的特殊发育阶段有关。此外,SjVAMP2的转录水平在40 mg/kg和200 mg/kg吡喹酮处理的虫体中随时间呈现不同的变化,暗示着SjVAMP2可能参与吡喹酮引起的虫体受损体被表膜的修复过程。构建了重组表达质粒pET-28a-SjVAMP2,并在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达出约为25 kDa的rSj VAMP2重组蛋白。用该重组蛋白三次免疫BALB/c小鼠制备的抗rSjVAMP2特异性多克隆抗体血清作为一抗,进行免疫组化及免疫电镜分析,结果显示SjVAMP2蛋白主要定位于虫体体被,且主要分布于表膜内陷处及基质中的扁平体和多膜囊等分泌小体中。Western blotting分析结果表明SjVAMP2蛋白具有较好的免疫原性,用rSjVAMP2蛋白三次免疫小鼠,在两次独立的重复试验中,分别诱导小鼠产生了41.5%（P<0.001）和27.3%（P<0.05）的减虫率及36.8%（P<0.01）和23.3%（P<0.05）的肝脏减卵率。ELISA分析显示,第二次免疫之后,小鼠体内抗rSjVAMP2特异性Ig G抗体水平急剧升高,可能与rSjVAMP2诱导的免疫保护力有关。此结果表明,rSjVAMP2重组蛋白具有作为候选疫苗分子的潜力。利用RNA干扰技术探究SjVAMP2在日本血吸虫生长发育过程中的作用。实时定量PCR和Western blotting分析结果表明筛选到的SjVAMP2特异siRNA能够在转录水平和蛋白水平有效地抑制SjVAMP2的表达。SjVAMP2 siRNA干扰组虫体的存活率仅为空白对照组为69.7%（P<0.01）,且干扰组雄虫变小（P<0.01）,发育受阻。扫描电镜观察发现约62%干扰组雄虫的体被表膜形态发生了变化,表现为雄虫口腹吸盘间的表膜不同程度的脱落,乳突异常增大增多,中后部的褶嵴发生一定程度的融合。在透射电镜下观察发现,干扰组雌虫的体被变薄,且表膜凹陷内折不全;雄虫的体被中出现大量的空泡,实质组织溶解,体被下组织中也有空泡出现。在体被基质中发现了由7层膜结构包裹的大的多膜囊结构,可能与虫体表膜更新有关。此外,抑制SjVAMP2基因的表达导致SGTP1、SGTP4、SjIR1和SjIR2四个与葡萄糖吸收、转运相关基因转录水平的显着下降,且干扰组虫体在低糖培养基中培养4d和6d的葡萄糖摄取量分别下降33.2%（P<0.001）和39.3%（P<0.01）,雌虫产卵量下降43.8%（P<0.01）。在两次独立的体内干扰实验中,SjVAMP2 siRNA分别诱导小鼠产生了32.8%（P<0.05）,50.4%（P<0.01）的减虫率和48.8%（P<0.05）,40.0%（P<0.05）的肝脏减卵率,且干扰组小鼠肝脏的肉芽肿,纤维化等病理现象明显较对照组轻。进一步利用酵母双杂交技术筛选SjVAMP2的相互作用蛋白。将SjVAMP2基因ORF序列与pGBKT7载体DNA重组,构建了p GBKT7-SjVAMP2重组质粒,并转入Y187酵母菌中。检测结果表明,诱饵pGBKT7-SjVAMP2酵母菌株无自激活活性、无细胞毒性,且pGBKT7-SjVAMP2重组质粒能够在酵母菌中成功表达,说明该诱饵菌株可应用于筛库。用诱饵pGBKT7-SjVAMP2酵母菌与18d日本血吸虫酵母双杂交cDNA文库菌共培养,于SD/-Ade/-Trp/-His/-Leu/X-α-GAL缺陷型固体培养基上反复转接培养后,得到27个阳性克隆,去除重复克隆,测序分析得到了包括sytaxin1,Olfactory receptor 4-like,Rab 11在内的7个可能互作的蛋白分子。综上,本研究首次对SjVAMP2进行了克隆、表达和特征性分析,动物实验表明该重组蛋白具有作为候选疫苗分子的潜力。RNA干扰实验发现,SjVAMP2与血吸虫体被结构的维持密切相关,同时在日本血吸虫葡萄糖摄取和雌虫产卵等过程中发挥着重要作用。利用酵母双杂交技术初步筛选出7个可能的互作蛋白。本研究为阐述SjVAMP2在日本血吸虫生长发育过程中的生物学功能积累了知识,为血吸虫病疫苗候选分子或新药物靶标的筛选提供了思路。
王晓暄[2]（2010）在《GLUT4囊泡的量子点标记及其在活细胞内纳米级实时定位研究》文中研究表明葡萄糖转运蛋白GLUT4在肌肉细胞和脂肪细胞的葡萄糖摄取过程中起着关键作用,对维持体内葡萄糖的动态平衡至关重要。GLUT4在细胞内的循环过程涉及到细胞胞吐和胞吞活动的许多分子机制。深入研究GLUT4囊泡在胞内转运的完整动态过程,有助于进一步揭示GLUT4的转位机制和胞内大分子跨膜转运的基本生命现像。但是,由于三维单微粒跟踪技术的局限,只能观察GLUT4囊泡在胞内转运的某些短时程和局部区域的过程,这导致与GLUT4囊泡胞内转运过程相关的许多重要科学问题还没有得到解答。本文结合了新的纳米级三维单微粒跟踪技术和量子点标记技术,为全细胞范围内GLUT4囊泡转运机制研究提供了高精度、长时程的实时监测及分析平台。本文主要完成了以下几个方面的工作：1)将量子点标记技术引入到纳米级三维单微粒跟踪研究领域。设计了用量子点标记葡萄糖转运蛋白囊泡的实验流程,证明了这种标记方法的灵敏性、特异性、无毒性。实验结果表明,与传统的荧光染料相比,量子点因其光物理特性,在全细胞范围内GLUT4囊泡胞内转运过程研究中具有某些优越性。为解决三维纳米级跟踪中图像信噪比低、目标分割难、跟踪时程短、空间分辨率低等问题提供了新的思路。2)对单微粒的三维纳米级定位算法进行了研究。考虑到实时性和分辨率的要求,本文重点研究了宽场显微镜荧光图像的离焦图像和离焦距离的关系,得出了二者的关系公式,从原理上为自校正离焦定位系统的设计奠定了基础。3)设计和构建了自校正离焦定位系统。搭建了进行三维纳米级跟踪的硬件和软件基本平台。设计了一套能对Z轴位移进行精确控制的压电晶体纳米级微位移控制器。对TILLVision成像系统软件进行了改造,在原有的成像系统软件中加入了三维纳米级离焦定位算法。本文所建立的有关GLUT4囊泡三维纳米级实时定位的新方法和新的实验系统,亦可应用于内分泌细胞和神经细胞分泌机制研究以及蛋白质跨膜转运研究等前沿科学领域。进一步发展,有可能在一定条件下实现对活体细胞内蛋白质大分子的三维纳米级实时定位和跟踪。
张立杰[3]（2007）在《TGH表达规律及其脂解作用机理研究》文中研究指明脂肪组织是机体最大的能量储存库,当机体需要能量的时候,储存在脂肪组织的甘油三酯在脂解酶的作用下被分解为游离脂肪酸,释放入血液参与能量代谢。脂解作用出现障碍或病变,会影响机体能量的平衡,进而引发肥胖和胰岛素抵抗等疾病。激素敏感酯酶（Hormone sensitive lipase ,HSL）是第一个被发现和克隆的脂肪细胞内脂质分解酶,曾被认为是脂肪细胞中脂质分解的唯一限速酶。但随着HSL基因敲除鼠的出现,残留的40%基础脂解作用说明存在着另外的脂肪细胞脂解酶参与脂解作用。2004年底甘油三酯水解酶（Triacylglycerol hydrolase,TGH）、脂肪组织甘油三酯脂酶（Adipose Triglyceride Lipase,ATGL）相继被发现,并迅速成为脂代谢研究新的热点。随着研究的深入,TGH在啮齿类脂肪细胞中承担脂解作用以及体外分解脂质能力已有报道,但其在除啮齿类动物之外其他动物脂肪细胞中表达规律、调控方式、代谢途径,尤其与HSL、ATGL之间的分工协作关系研究甚少。本实验围绕TGH在不同物种（猪、大鼠、小鼠）、不同水平（组织水平、细胞水平、分子水平）表达规律及脂解机理开展研究,同时将与HSL、ATGL作为参照,比较分析TGH在基础脂解及刺激脂解中的地位。检测了猪不同品种、不同发育阶段、不同部位脂肪组织中转录水平差异规律;利用离体培养脂肪细胞技术,对猪、大鼠脂肪细胞中TGH表达时序、以及与脂肪细胞分化、脂解相关性进行了探讨;并利用胰岛素、肿瘤坏死因子-α对猪、大鼠脂肪细胞进行不同浓度、不同作用时间处理,分析其与HSL、ATGL在抑脂解和促脂解通路中变化差异;另外在国际合作项目支持下,与加拿大蒙特利尔圣加斯厅医院研究中心遗传系协作,利用基因芯片技术,分析测定了禁食和高脂日粮饲喂下,TGH与HSL、ATGL变化以及在代谢通路中可能与之相关的调控通路及作用机制。主要研究结果如下:1.研究了TGH在猪不同品种、不同生长阶段以及不同沉积部位脂肪组织中表达规律。证明了TGH与其他脂肪分解酶（HSL）具有相同的表达规律,即与个体的肥胖程度具有负相关性;而且随着生长发育,下调的脂解作用与TGH表达量下调具有一定关系;内脏脂肪组织较其他沉积部位的脂肪表达量显着增高的特性。也进一步说明TGH在整个机体能量代谢中的重要作用。2.比较了猪、大鼠原代脂肪细胞分化过程中TGH表达规律。在猪脂肪细胞中,TGH表达峰值早于脂肪细胞分化最高值,这一特征不同于大鼠脂肪细胞表达峰值伴随分化峰值的结果。同时对猪与啮齿类动物（大鼠）原代脂肪细胞在分化过程中存在的形态学差异,从脂解变化、脂肪分解酶、转录因子、脂肪细胞标志基因表达时序性等方面进行了测定和诱因分析,进一步说明两物种间所表现的分化过程差异,是与脂解酶尤其TGH表达的时序已及其承担的重要基础脂解作用有关。这一结果证实了啮齿类动物在脂代谢通路于与猪存在着差异,并且表明其作为模式动物研究脂代谢具有一定的局限性。3.利用胰岛素（抑脂解激素）和TNF-α（促进脂解脂肪因子）,比较分析了猪、大鼠原代脂肪细胞不同浓度、不同时间的处理TGH变化规律。结果显示:（1）胰岛素浓度大鼠脂肪细胞更为敏感;达到抑制猪脂肪细胞脂解作用的浓度是100nmol/L,当浓度上超过200nmol/L以上,脂解作用出现浓度依赖性的增强趋势;（2）胰岛素浓度对于TGH表达量的变化也具有物种差异,当胰岛素浓度达到300nmol/L时,表达量被显着下调,浓度进一步增加,表达量随仍然保持较对照降低,但差异不显着;大鼠脂肪细胞TGH在胰岛素为100nmol/L的时候,显着下调,当浓度增加到300nmol/L以上时,TGH表达量明显上调;（3）猪、大鼠脂肪细胞中脂解作用变化随处理时间也表现出显着差异,随着处理时间的延长,猪TGH表达量出现时间依赖性的下降,而大鼠在24小时之前表现表达量下降的趋势,随着时间进一步延长,表达量重新升高。（4）低浓度（10、30ng/ml）TNF-a对TGH表达量具有上调作用,但是随着浓度增大（大于60ng/ml）,TGH表达量下调;在处理6小时后,TGH表达量明显上调,但随后出现时间依赖性的下调作用。TGH变化规律显示只对细胞因子长效刺激作用下发生改变。4.利用基因芯片技术,分析了在禁食条件下TGH变化规律及脂解特性。TGH在禁食情况下,表达量增加值高于HSL、ATGL;禁食引起基础脂解能力增加,很可能TGH承担着主要的脂解作用。同时发现脂肪细胞虽然利用β-2肾上腺受体激动剂（CL）刺激,脂解能力增加,但与对照相比差异不明显,进一步证实起禁食条件下主要承担脂解作用的TGH在激素刺激性促脂解作用不承担主要作用。禁食与正常组织方细胞刺激性脂解能力绝对值增加,而相对差异不显着,进一步说明引起主要代谢变化的TGH不承担或者承担较少的刺激性脂解作用。5.利用基因芯片技术,分析了高脂日粮饲喂后TGH变化规律及脂解特性。高脂日粮饲喂引起体重增加,脂肪细胞内已知的脂解酶都表现出下降的趋势。但与HSL、ATGL相比较,TGH下降幅度最大,并且与基础日粮饲喂组相比较差异及显着, TGH表达量降低是高脂日粮引起的脂肪代谢能力降低最主要的诱因之一。同时CL刺激脂解能力下调,说明TGH承担基础脂解,而非刺激性脂解作用。6.利用基因芯片技术,分析了高脂日粮引起的增重敏感型和非敏感型个体中脂肪细胞中TGT表达量差异。比较了脂肪细胞中已知所有脂质分解酶,发现只有TGH mRNA水平具有增重敏感型低于非敏感型（P<0.001）的差异特征。这一结论说明引起脂肪脂质代谢差异,进而影响肥胖易感性最关键的脂肪细胞脂质分解酶为-----TGH。7.对芯片数据进行高通量、多元化基因表达变化分析,利用多个数据库及分析软件,绘制出TGH分子调控机制网络图。
李臣鸿[4]（2005）在《囊泡转运的动态跟踪及其与脂筏关系的初步研究》文中进行了进一步梳理细胞物质转运实质上是细胞内的一个庞大而复杂的物流系统,这一系统的异常将导致相应各种疾病的发生。囊泡是这一物流系统中的一种可调控的重要的运输工具,脂筏是膜脂双层内含有特殊脂质及蛋白质的微区,在这一物流系统中具有重要的作用。本课题引入单分子研究技术和全内反射荧光成像技术,实时动态地研究转运囊泡的动力学过程,和两类脂筏与囊泡之间的动态空间定位关系。这一研究有助于我们进一步揭示囊泡转运机制和糖尿病的发生机制,而且对于进一步认识脂筏功能及开发以GLUT4为靶的调节血糖的药物都具有重要的理论及实际指导意义。机体内葡萄糖的平衡对生命过程至关重要。胰岛素是调节血糖平衡的重要激素,它促进葡萄糖进入细胞内,从而降低血中葡萄糖。胰岛素的这一作用是通过细胞内的葡萄糖转运体（Glucose Transporter,GLUT）家族之一葡萄糖转运子4（GLUT4）将葡萄糖从细胞外转运到细胞内的。研究表明II型糖尿病的发生与细胞内GLUT4的转运障碍有关。而GLUT4的转运被认为是受多种因素控制的,这些因素目前较公认的有GLUT4在细胞器中的保持机制、动态分选、囊泡的转运、锚定和与质膜的融合以及质膜的脂质结构。GLUT4在细胞内的转运至少有两个循环,一个是细胞表面和内涵体间的循环,一个是在trans-Golgi network （TGN） 和内涵体间的循环。在这两个循环中GLUT4转位有几个严格的控制点。这两个循环似乎告诉我们GLUT4在胞内可能有两种运动形式。为了回答这个问题,我们研究了GLUT4在胞内的动力学过程。在研究过程中使用Confocal显微镜观察了GLUT4在胞内的整体分布。使用全内反射荧光显微镜时序成像获得了GLUT4的动态连续的图像,用于三维动力学分析。分析中发展了单颗粒追踪方法（SPT）,使之能跟踪亚象素的位移,发现GLUT4在胞内虽然有两个循环路径,但是在无刺激的情况下,它的运动呈现限制性运动,其分散系数呈现一种连续的平滑的分布,即其运动并未因循环有两个路径而分成几种形式。此外,我们初步研究了囊泡转运与细胞膜脂筏的关系。首先构建了含荧光标记
二、Dynamic tracking and mobility analysis of single GLUT4 storage vesicle in live 3T3-L1 cells（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Dynamic tracking and mobility analysis of single GLUT4 storage vesicle in live 3T3-L1 cells（论文提纲范文）
（1）日本血吸虫囊泡膜蛋白2（SjVAMP2）的生物学功能初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 血吸虫病的流行现状及防治难点 |
| 1.2 血吸虫的生活史 |
| 1.3 血吸虫的体被 |
| 1.3.1 血吸虫体被蛋白质组学 |
| 1.3.2 血吸虫体被蛋白的研究 |
| 1.3.3 血吸虫的葡萄糖摄取与体被 |
| 1.4 RNA干扰技术的应用及局限 |
| 1.5 囊泡运输 |
| 1.5.1 囊泡运输的过程 |
| 1.5.2 SNARE蛋白复合物 |
| 1.5.3 VAMP2 |
| 1.6 本研究的总体思路 |
| 第二章 SjVAMP2的特征性分析及其重组蛋白的免疫保护效果评估 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料 |
| 2.2.1 生物材料 |
| 2.2.2 主要试剂和酶 |
| 2.2.3 主要仪器和设备 |
| 2.2.4 主要试剂配制 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 SjVAMP2的生物信息学分析 |
| 2.3.2 实时定量PCR分析SjVAMP2在几个不同发育时期虫体内的转录水平 |
| 2.3.3 SjVAMP2基因的克隆 |
| 2.3.4 重组质粒pET- 28a(+)-SjVAMP2的原核表达及重组蛋白纯化 |
| 2.3.5 rSjVAMP2重组蛋白多克隆抗体制备及免疫原性分析 |
| 2.3.6 SjVAMP2蛋白在虫体的定位分析 |
| 2.3.7 重组蛋白rSjVAMP2诱导小鼠抗血吸虫感染的免疫保护效果评估 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 日本血吸虫SjVAMP2基因的生物信息学分析 |
| 2.4.2 SjVAMP2在不同发育时期虫体中的转录水平分析 |
| 2.4.3 吡喹酮对SjVAMP2转录水平的影响 |
| 2.4.4 SjVAMP2基因的克隆及原核表达 |
| 2.4.5 SjVAMP2蛋白具有较好的免疫原性 |
| 2.4.6 SjVAMP2蛋白在虫体中的定位 |
| 2.4.7 rSjVAMP2重组蛋白诱导小鼠抗日本血吸虫感染的免疫保护效果 |
| 2.4.8 rSjVAMP2重组蛋白诱导小鼠产生的特异性抗体分析 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 SjVAMP2的生物学功能初探 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 siRNA浸泡转染效率分析 |
| 3.3.2 RNAi引起SjVAMP2的沉默效果 |
| 3.3.3 SjVAMP2沉默对虫体活力及形态的影响 |
| 3.3.4 SjVAMP2沉默引起的虫体体被表膜及体被结构的变化 |
| 3.3.5 SjVAMP2沉默对葡萄糖摄取相关基因转录水平的影响 |
| 3.3.6 SjVAMP2沉默对虫体葡萄糖摄取能力及雌虫产卵的影响 |
| 3.3.7 体内干扰SjVAMP2表达对虫体发育及雌虫产卵的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 利用酵母双杂交技术筛选Sj VAMP2的互作蛋白 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 成功构建了pGBKT7-SjVAMP2诱饵质粒 |
| 4.3.2 重组质粒p GBKT7-SjVAMP2转化Y187酵母菌的PCR鉴定 |
| 4.3.3 诱饵pGBKT7-SjVAMP2酵母菌株的自激活活性检测 |
| 4.3.4 诱饵pGBKT7-SjVAMP2转染的酵母菌株的细胞毒性检测 |
| 4.3.5 诱饵pGBKT7-SjVAMP2重组质粒在Y187菌株中的蛋白表达 |
| 4.3.6 32d日本血吸虫酵母双杂交cDNA文库质量检测 |
| 4.3.7 酵母双杂交杂交效率及阳性质粒的分析 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）GLUT4囊泡的量子点标记及其在活细胞内纳米级实时定位研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 单微粒跟踪技术的发展与应用 |
| 1.2 对GLUT4进行三维纳米级实时跟踪的目的和意义 |
| 1.3 本文的主要工作 |
| 2 GLUT4的转位机制 |
| 2.1 GLUT4蛋白 |
| 2.2 GLUT4的转位机制 |
| 2.3 GLUT4-MYC蛋白 |
| 3 用量子点对细胞进行标记 |
| 3.1 量子点的结构和特性 |
| 3.2 量子的修饰及与生物分子的耦联 |
| 3.3 量子在生物标记领域的应用 |
| 3.4 量子点在生物标记方面的局限性 |
| 4 用量子点对GLUT4进行标记和成像 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 用量子点标记GLUT4的实验材料和实验方法 |
| 4.3 免疫荧光标记的实验结果及讨论 |
| 4.4 活细胞标记的实验结果 |
| 4.5 量子点毒性检测 |
| 4.6 量子点荧光稳定性检测 |
| 4.7 本章小结 |
| 5 三维纳米级定位算法的研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 单微粒位置信息的获取 |
| 5.3 离焦图像外环半径与离焦距离的关系 |
| 6 三维纳米级单微粒跟踪系统的设计 |
| 6.1 三维纳米级跟踪系统的实现 |
| 6.2 压电式纳米级微位移控制器的设计 |
| 6.3 系统软件设计 |
| 7 全文总结与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读学位期间发表的论文目录 |
| 附录2 主要缩略词 |
（3）TGH表达规律及其脂解作用机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 脂解通路及其研究进展 |
| 1.1 促脂解通路 |
| 1.1.1 β-肾上腺受体（Beta-adrenoceptors） |
| 1.1.2 钠尿肽（Natriuretic peptides） |
| 1.1.3 肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α） |
| 1.1.4 另外的脂解通路 |
| 1.2 抗脂解通路 |
| 1.2.1 Gi—偶联受体(Gi-coupled receptors ) |
| 1.2.2 α-肾上腺受体（Alpha2-adrenoceptors） |
| 1.2.3 酪氨酸激酶受体（Tyrosine kinase receptors） |
| 1.2.4 肾上腺髓质素信号传导通路（Adrenomedullin signal transduction pathway） |
| 1.2.5 AMP-激活蛋白激酶（AMP-activated protein kinase） |
| 1.3 不同物种脂解代谢通路的差异 |
| 第二章 脂质分解酶研究进展 |
| 2.1 脂动员 |
| 2.2 激素敏感脂酶（HORMONE-SENSITIVE LIPASE ，HSL） |
| 2.2.1 基本结构与功能 |
| 2.2.2 不同组织中的HSL |
| 2.2.3 HSL 与代谢紊乱 |
| 2.3 甘油三酯水解酶(TRIACYLGLYCEROL HYDROLASE ，TGH ) |
| 2.3.1 分子结构特征 |
| 2.3.2 在各组织中的表达 |
| 2.3.3 TGH 表达调控和活性研究 |
| 2.4 脂肪甘油三酯脂酶（ADIPOSE TRIGLYCERIDE LIPASE，ATGL) |
| 2.4.1 结构及功能特征 |
| 2.4.2 表达变化 |
| 2.4.3 细胞内定位及功能特征 |
| 2.4.4 营养状况、激素及细胞因子影响 |
| 2.4.5 调控通路研究 |
| 2.4.6 展望 |
| 第三章 基因芯片技术及在脂代谢研究中的应用 |
| 3.1 基因芯片概述 |
| 3.2 基因芯片制备方法 |
| 3.2.1 点样法 |
| 3.2.2 原位合成法 |
| 3.3.3 原位合成和预先合成然后点样的基因芯片 |
| 3.3.4 基因表达芯片和DNA 测序芯片 |
| 3.4 基本技术过程 |
| 3.4.1 DNA 方阵的构建 |
| 3.4.2 样品DNA 或m RNA 的准备 |
| 3.4.3 分子杂交 |
| 3.4.4 杂交图谱的检测和分析 |
| 3.5 芯片的开发进展 |
| 3.5.1 微孔板/微陈列技术 |
| 3.5.2 微流体芯片技术 |
| 3.6 应用 |
| 3.7 基因芯片数据分析方法 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 第四章 TGH 在猪脂肪组织中表达规律 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 脂肪型猪、杂交猪、瘦肉型猪皮下脂肪组织TGH 和HSL mRNA 表达 |
| 4.2.2 成年、初生仔猪皮下脂肪中TGH 和HSL mRNA 表达 |
| 4.2.3 皮下脂肪、腹膜脂肪、内脏脂肪中TGH 和HSL mRNA 表达量 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 本章主要结论 |
| 第五章 TGH 在猪和大鼠原代脂肪细胞分化过程中表达时序比较 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 猪、大鼠原代脂肪细胞各分化阶段形态学比较 |
| 5.2.2 油红O 染色测定细胞分化状态 |
| 5.2.3 猪、大鼠脂肪细胞甘油释放量比较 |
| 5.2.4 猪、大鼠原代脂肪细胞TGH 表达时序 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 本章主要结论 |
| 第六章 胰岛素对猪和大鼠原代脂肪细胞中TGH 转录影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.2 实验方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 不同浓度胰岛素对猪、大鼠脂肪细胞甘油释放量的影响 |
| 6.2.2 不同浓度胰岛素对猪、大鼠脂肪细胞TGH、HSL、ATGL 转录的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 本章主要结论 |
| 第七章 TNF-Α对猪原代脂肪细胞TGH 转录影响 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.1.1 实验材料 |
| 7.1.2 实验方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 不同浓度TNF-α对甘油释放量的影响 |
| 7.2.2 不同浓度TNF-α对TGH、HSL、转录的影响 |
| 7.2.3 TNF-α不同作用时间对甘油释放量的影响 |
| 7.2.4 TNF-α不同处理时间对TGH、HSL 转录的影响 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 本章主要结论 |
| 第八章 基因芯片制作前的动物饲养处理、生理指标测定分析及RNA 样品提取、定量 |
| 8.1 实验动物及试剂、仪器 |
| 8.2 方法 |
| 8.2.1 饲养及处理方法 |
| 8.2.2 生理指标测定方法 |
| 8.2.3 RNA 样品提取纯化 |
| 8.2.4 统计学处理 |
| 8.3 结果 |
| 8.3.1 饲喂高脂日粮对体重的影响 |
| 8.3.2 体脂与禁食后血浆中葡萄糖浓度的关系 |
| 8.3.3 体脂与禁食后胰岛素耐受性的关系 |
| 8.3.4 脂肪组织中甘油释放量比较 |
| 8.3.5 RNA 提取及定量 |
| 8.4 讨论 |
| 8.5 本章主要结论 |
| 第九章 用基因芯片技术研究小鼠TGH 表达变化及分子调控通路 |
| 9.1 材料 |
| 9.1.1 实验试剂及仪器 |
| 9.1.2 RNA 样品 |
| 9.1.3 芯片制备 |
| 9.2 分析及验证方法 |
| 9.2.1 数据分析方法 |
| 9.2.2 荧光定量PCR 的验证 |
| 9.3 结果 |
| 9.3.1 数据取舍 |
| 9.3.2 数据离散性分析 |
| 9.3.3 TGH 表达变化及其分子调控预测 |
| 9.3.4 利用IPA 分析TGH 分子调控相关性网络图 |
| 9.3.5 RT-PCR 检测基因表达量 |
| 9.4 讨论 |
| 9.5 本章主要结论 |
| 论文实验结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究内容 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）囊泡转运的动态跟踪及其与脂筏关系的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪言 |
| 1.1 GLUTs 种类和组织分布 |
| 1.2 GLUT4 结构特征 |
| 1.3 GLUT4 定位 |
| 1.4 GLUT4 转位模型 |
| 1.5 GLUT4 转位的信号途径 |
| 1.6 GLUT4 转位的远端过程 |
| 1.7 脂筏与GLUT4 |
| 1.8 GLUT4 转位的动力学过程 |
| 1.9 GLUT4 与胰岛素抵抗综合征 |
| 2 主要技术 |
| 2.1 荧光蛋白技术 |
| 2.2 全内反射荧光成像技术 |
| 2.3 SPT 技术 |
| 3 3T3-L1 活细胞中单个GLUT4 囊泡跟踪和动力学分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 统计 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 4 Caveolin-1 的标记及其定位研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 5 Flotillin-1 的标记及定位研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 6 分子生物学方法 |
| 6.1 分子生物学常用溶液和培养基 |
| 6.2 分子生物学常用实验操作 |
| 7 全文总结和展望 |
| 7.1 单个GSVs 囊泡跟踪和动力学分析 |
| 7.2 脂筏特异蛋白的标记及定位 |
| 7.3 发展了单颗粒追踪方法(SPT) |
| 7.4 展望和今后的工作 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读学位期间发表的论文目录 |
| 附录2 主要符号和缩略词表 |
四、Dynamic tracking and mobility analysis of single GLUT4 storage vesicle in live 3T3-L1 cells（论文参考文献）
- [1]日本血吸虫囊泡膜蛋白2（SjVAMP2）的生物学功能初探[D]. 韩倩. 中国农业科学院, 2017(02)
- [2]GLUT4囊泡的量子点标记及其在活细胞内纳米级实时定位研究[D]. 王晓暄. 华中科技大学, 2010(11)
- [3]TGH表达规律及其脂解作用机理研究[D]. 张立杰. 西北农林科技大学, 2007(06)
- [4]囊泡转运的动态跟踪及其与脂筏关系的初步研究[D]. 李臣鸿. 华中科技大学, 2005(05)