一、环状DNA结构能有效抵抗辐射（论文文献综述）
陈飚[1]（2021）在《南海珊瑚微生物组的空间变化及其环境适应机制》文中认为珊瑚礁生态系统对气候变化和人为干扰的适应能力是国际上所普遍关注的科学前沿问题。本文基于对南海大空间尺度上多纬度区域的珊瑚礁/群落（注:南海北部防城港、大亚湾和东山岛的珊瑚未成礁,为珊瑚群落）的科学考察,以多种珊瑚及其微生物组（虫黄藻、细菌和病毒）为研究对象,围绕珊瑚微生物组的空间变化特征及其与珊瑚环境适应性的关系这一科学问题,具体研究以下内容:1)南海珊瑚礁水域微生物组的空间分布模式;2)南海珊瑚共生虫黄藻的空间分布与系统进化模式;3)南海广布型珊瑚微生物组的空间变化规律;4)南海区域型珊瑚微生物组的空间变化规律;5)南海耐热型虫黄藻的迁移扩散与遗传变异特征;6)南海相对高纬度区域珊瑚组织病毒群落的组成与功能特征。本文研究区域覆盖了南海2个气候带（热带与亚热带）、16个纬度（7°-23°N）,共计对4个生态区、20个珊瑚礁/群落（相对高纬度珊瑚礁/群落:福建东山岛,广东大亚湾和雷州半岛,广西防城港和涠洲岛;生物地理过渡区:海南大洲岛和鹿回头;中纬度珊瑚礁:西沙群岛北礁、七连屿、永兴岛、东岛、玉琢礁、华光礁、盘石屿和浪花礁;低纬度珊瑚礁:中沙群岛黄岩岛,南沙群岛三角礁、华阳礁、仙娥礁和信义礁）的生态调查数据、环境指标、珊瑚礁水域微生物组、珊瑚共生微生物组以及耐热型虫黄藻的群体遗传特征进行了综合研究。所得主要结论如下:（1）南海珊瑚礁水域中的微生物组能够通过共生和/或寄生的方式影响珊瑚的环境适应性与健康状况。南海珊瑚礁水域中的虫黄藻群落结构虽然表现出显着的纬度差异,但总体以Symbiodinium（34.2±21.4%）、Cladocopium（31.1±24.2%）、Breviolum（12.6±16.8%）和Durusdinium（4.5±10.0%）为主导,它们参与珊瑚幼体共生体系的构建与白化后珊瑚-虫黄藻共生关系的修复,从而增强南海珊瑚的环境适应性。水体中细菌群落结构也存在显着的纬度差异,此差异与珊瑚礁区环境因子、珊瑚疾病、水体污染特征等密切相关。在相对高纬度水域中所富集光合益生菌Erythrobacter（赤杆菌属）具有帮助珊瑚适应高营养盐与高浊度环境的潜力;在中纬度水域中富集的益生菌Oceanospirillum（海螺菌门）有助于提高珊瑚的抗病能力与共生体系的稳定性;在低纬度水域所富集的Halomona（盐单胞菌属）与Cyanobacteria（蓝细菌纲）具有帮助珊瑚适应高温压力、抵抗珊瑚疾病的潜力。水体的病毒群落结构在热带与亚热带之间差异显着,亚热带水体中的病毒群落富集了较高丰度的噬菌体与Circoviridae（环状病毒科）,它们易引发珊瑚疾病、削弱珊瑚的环境适应能力;而热带水体中则富集Herpesviridae（疱疹病毒科）与Mimiviridae（拟菌病毒科）,它们能够在高温下加速破坏珊瑚-虫黄藻共生体系,并降低珊瑚的热适应能力。（2）南海珊瑚共生虫黄藻的α多样性、群落组成及其系统进化模式与环境因子的纬度变化密切相关。地理隔离（空间距离）与环境阻力（温度、营养盐、浊度）是造成南海中、低纬度区域共生虫黄藻的α多样性显着高于相对高纬度区域的主要原因,这支持了珊瑚及其共生虫黄藻的低纬度“物种起源中心假说”。南海珊瑚共生虫黄藻的群落组成整体呈现由高纬度的Cladocopium占主导转变为中、低纬度Cladocopium+Durusdinium占主导的空间分布模式,且耐热型虫黄藻亚系群（D1、C15以及C3u）相对丰度持续增加,这表明温度的纬度变化是造成共生虫黄藻群落结构空间差异的主要原因。系统进化分析的结果表明,以C1为共同祖先的虫黄藻亚系群主要分布于南海相对高纬度区域,其相对丰度与温度,光照强度以及盐度成负相关,而与营养盐浓度和浊度呈正相关;而以C3为共生祖先的虫黄藻亚系群主要分布于南海中、低纬度区域,其相对丰度的变化则与之相反。因此,Cladocopium中具有共同祖先的虫黄藻亚系群具有类似的环境适应能力。（3）南海广布种丛生盔形珊瑚（Galaxea fascicularis）的微生物组群落组成、功能以及交互作用均存在显着的空间差异。耐热型虫黄藻Durusdinium trenchii在热带的丛生盔形珊瑚中占据主导（65.6±37.5%）,支持丛生盔形珊瑚适应该区域较高的温度环境;而C1亚系群的虫黄藻则在亚热带的丛生盔形珊瑚中具有最高的相对丰度（80.6±2.3%）,其能提高该区域丛生盔形珊瑚抗低温、耐高营养盐以及高浊度的能力。从共生虫黄藻交互作用网络的结构来看,耐热型虫黄藻D.trenchii是热带共生虫黄藻交互作用网络中的关键物种,其可以通过抑制寄生型虫黄藻的方式提高共生体系的稳定性;而C1亚系群则不参与亚热带丛生盔形珊瑚共生虫黄藻的交互作用。南海丛生盔形珊瑚的共/附生细菌群落,在低纬度珊瑚礁区具有较高的均匀度,并富集了与高温相关的α-proteobacteria（α-变形菌纲;占比:61%）,这表明该区域的丛生盔形珊瑚具有更强的高温适应性;而相对高纬度珊瑚礁/群落与生物地理过渡区则富集Cyanobacteria,这类细菌可通过提供氮源与补偿光合作用的方式提高丛生盔形珊瑚的浊度耐受能力。但是,整个南海的丛生盔形珊瑚的核心细菌微生物群（core bacterial microbiota）却主要由病原菌Rhodobacteraceae（红杆菌科）、Vibrio（弧菌属）、Sphingomonas（鞘脂单胞菌属）占据主导,它们会增加珊瑚感染疾病的风险,降低其环境适应性。（4）南海热带区域种疣状杯形珊瑚（Pocillopora verrucosa）与亚热带区域种盾型陀螺珊瑚（Turbinaria peltata）的微生物组群落结构、功能特征也存在显着的空间差异,并分别与其区域环境状况密切相关。疣状杯形珊瑚在低纬度珊瑚礁的共生虫黄藻以群落耐热型虫黄藻D1（71.8±16.1%）与D6（23.9±4.7%）亚系群为主导,但其丰度随着纬度的增加而降低,这表明低纬度的疣状杯形珊瑚正通过与更多耐热型虫黄藻共生以适应高温压力。盾型陀螺珊瑚的虫黄藻群落结构则表现出空间同质性,即C1亚系群在其虫黄藻群落中占据主导（61.1±8.8%）,由其所形成的共生体系具有适应低温、高营养盐与高浊度的特性。珊瑚共/附生细菌群落结构方面,热带珊瑚礁的疣状杯形珊瑚以益生菌Ralstonia（青枯菌属;64.4±6.6）为主导,并具有稳定的共/附生细菌群落结构,这能够显着提高珊瑚的环境适应性;而生物地理过渡区的疣状杯形珊瑚则可通过提高益生菌Endozoicomonas、Photobacterium（发光杆菌属）、Pseudoalteromonas（假交替单胞菌属）丰度的方式抑制病原菌活动,并增加珊瑚适应高浊度和大幅度温度波动的能力。盾型陀螺珊瑚的细菌群落结构总体具有较高的灵活性,这能够使之良好的适应南海北部波动的礁区环境。此外,这2种珊瑚的核心细菌微生群中均存在与人类活动直接相关的细菌类型（Escherichia coli-大肠杆菌与Sphingomonas）,表明南海珊瑚礁在大空间尺度上已受到了人类干扰的影响。（5）南海耐热型虫黄藻D.trenchii群体在大空间尺度上的迁移、遗传变异以及遗传多样性与珊瑚的热适应潜力存在紧密的关联。西南季风所驱动的海表面流是D.trenchii从低纬度向高纬度海域迁移、扩散的主要动力,其能够为南海中、高纬度区域提供重要的耐热共生体来源。STRUCTURE与遗传变异系数(ΦPT)的分析表明,南海SST的纬度变化是导致D.trenchii群体的遗传结构在低纬度珊瑚礁与中纬度珊瑚礁-生物地理过渡区之间显着差异的主要原因。此外,南海耐热型虫黄藻D.trenchii群体在大空间尺度上具有很高的遗传多样性（克隆丰富度介于0.85-1.00之间）,这能够有效克服单克隆个体传播所引发的负面生态效应,并增强南海珊瑚-虫黄藻共生体系的热适应能力。（6）南海相对高纬度区域珊瑚组织中病毒的群落组成、功能特征及其宿主多样性会直接影响珊瑚的健康状况与环境适应性。在南海相对高纬度的亚热带大亚湾,丛生盔形珊瑚体内的核质巨DNA病毒（nucleocytoplasmic large DNA viruses;NCLDVs）具有在低温下感染共生虫黄藻、降低珊瑚-虫黄藻共生体系的稳定性的潜力。噬菌体宿主预测的结果显示,珊瑚体内的噬菌体能够感染多样化的共/附生细菌类型（益生菌、病原菌、机会主义细菌等）,改变珊瑚-细菌共生体系的动态平衡、免疫应答以及营养元素循环,并影响珊瑚的健康状况与环境适应性。从功能富集特征上看,亚热带水体中的病毒可通过感染水体中的浮游藻类与虫黄藻的方式,分别调控该海域的初级生产力与虫黄藻的水平传递;而珊瑚体内的噬菌体则会通过活跃的溶原作用提高珊瑚共/附生细菌的新陈代谢,影响珊瑚的环境适应性。（7）南海珊瑚微生物组的α多样性与群落结构存在4种主要的空间变化模式,分别为:纬度空间变化模式、气候带空间变化模式、空间均质化模式以及空间异质化模式。南海珊瑚微生物组的主要成员细菌和虫黄藻具有多样化的组成、功能以及显着的空间差异,这些特征有助于增强珊瑚对不同区域环境压力的适应能力。对病毒的研究虽然局限于南海水体与大亚湾的珊瑚,但从其组成和功能来看,病毒对珊瑚的健康状况和环境适应性的影响总体是负面的。本研究系统的分析了南海珊瑚微生物组的空间变化规律,并从微生物组的角度揭示了南海珊瑚应对气候变化与人为干扰的环境适应机制。
刘萌[2]（2021）在《基于酶辅助信号放大的荧光生物传感器的构建及其应用研究》文中研究表明在疾病诊断、食品安全控制、法医学分析和环境监测等众多领域,对生物分子的特异性高灵敏检测都有着重要的意义。荧光分析方法具有极高的时空分辨率,能够实现对核酸和蛋白质等生物分子的有效检测,有着广泛的生物医学应用。然而,某些与疾病相关的生物分子（如循环micro RNA及其他肿瘤生物标志物等）在生物体内的含量非常低,常规的荧光检测技术无法对其进行准确定量,因此,仍然需要设计和构建选择性更好、灵敏度更高的荧光生物传感器。基于核酸等温信号放大技术构建的生物传感器可以将较低的生物信号转化为核酸信号并进行有效的扩增,在恒定温度下实现对低丰度生物分子的灵敏检测;在这些生物传感器当中,基于酶辅助荧光信号放大技术构建的生物传感器因为较高的检测特异性、信号放大效率和检测灵敏度,在生物医学研究和临床诊断中具有巨大的潜力。在本论文中,我们基于依赖解旋酶恒温扩增（helicase-dependent amplification,HDA）反应、链置换扩增（strand displacement amplification,SDA）反应和核酸酶辅助的循环信号放大等多种酶辅助信号放大技术,构建了一系列可用于核酸定量或生物酶活性测量的荧光生物传感器。具体内容如下:1.基于HDA反应构建了一个可用于免标记定量检测低丰度micro RNA（mi RNA）的荧光生物传感器,具有简单、快速、灵敏的特点。mi RNA的表达失调与多种人类疾病密切相关,其快速、灵敏分析对临床诊断和治疗至关重要。由于灵敏度差,传统的定量分析方法无法检测到丰度较低的mi RNA。近年来,为了提高检测灵敏度,基于核酸扩增技术的方法逐渐发展起来,但这些方法大多都涉及复杂的探针设计和耗时的实验程序。在该生物传感器中,目标mi RNA可与线性探针的3’末端特异性杂交形成DNA-mi RNA异源双链结构,保护探针免受核酸外切酶Ⅰ（exonucleaseⅠ,ExoⅠ）的消化。线性探针进而作为扩增模板启动HDA反应,对mi RNA信号进行有效的扩增放大,在30分钟内即可产生超高的荧光信号。该生物传感器非常灵敏,检出限（limit of detection,LOD）为12.8 f M,检测的线性范围为100 f M～10 n M,跨越了5个数量级。此外,该生物传感器还可区分不同mi RNA家族的成员,并可用于肿瘤细胞总RNA提取物中目标mi RNA的绝对定量,为mi RNA的生物医学研究和临床诊断提供了有力工具。2.基于5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethylcytosine,5-hm C）葡萄糖基化引发的HDA反应,构建了一个背景信号为零的荧光生物传感器,可用于β-葡萄糖基转移酶（β-glucosyltransferase,β-GT）活性的灵敏检测。β-GT可以催化5-hm C的葡萄糖基化反应,进而保全噬菌体和寄生虫的基因组DNA,使其得以在宿主细胞内存活。此外,β-GT还是基因组5-hm C检测的关键工具酶。但是目前用于β-GT活性检测的方法相对较少,且存在放射性污染、背景信号高、操作繁琐、灵敏度不理想等缺点。在该生物传感器中,发夹型的检测探针既可以作为β-GT的活性识别探针,也可作为HDA反应的扩增模板。β-GT催化的5-hm C葡萄糖基化反应能保护检测探针免受限制性核酸内切酶Mfe I的切割,进而避免ExoⅠ和核酸外切酶Ⅲ（exonucleaseⅢ,ExoⅢ）消化检测探针。留存下来的检测探针可以作为指数型HDA反应的扩增模板,产生大量的双链DNA产物,使用SYBR GreenⅠ核酸染料就能以免标记的方式对此扩增过程进行实时监测。在该生物传感器中,仅使用了一种HDA反应引物,这消除了因形成引物二聚体而引发的非特异性扩增;结合核酸酶处理对未发生葡萄糖基化反应的检测探针的完全消化,实现了背景信号为零的β-GT活性检测。该生物传感器具有较高的灵敏度和特异性,可进一步应用于β-GT酶活动力学分析和抑制剂筛选,为更好地揭示β-GT的基本生物学功能和促进相关的表观遗传研究提供了有力的平台。此外,通过更改检测探针中的识别序列并更换相应的核酸内切酶,该生物传感器还可拓展应用于其他DNA修饰酶的检测。3.基于磷酸化反应引发的两级SDA反应,构建了一个简单快速的免标记荧光生物传感器,可用于多核苷酸激酶（polynucleotide kinase,PNK）活性的均相灵敏检测。PNK催化的磷酸化反应在许多基本的细胞过程特别是DNA重组、复制和损伤修复中起着重要的作用,是可用于癌症治疗的潜在作用靶点,因此开发快速灵敏的PNK检测方法具有重要的意义。在现有的PNK检测方法中,荧光方法以其灵敏度相对较高、操作相对简便等优点和均相检测的能力而备受关注,但大多数荧光方法都需要昂贵的荧光标记,同时由于缺乏有效的信号放大策略,灵敏度还有一定的提升空间。在该生物传感器中,PNK催化探针S的5’羟基末端发生磷酸化反应生成5’磷酸末端。添加λ核酸外切酶（lambda exonuclease,λexo）后,探针-S/探针A双链结构中具有5’磷酸末端的探针S被消化,解除束缚的探针A可以自发折叠形成具有5’突出末端的发夹型结构,其双链茎部上的3’末端序列可作为引物启动后续的两级SDA反应,生成大量的双链DNA,使用SYBR GreenⅠ核酸染料即可实现对扩增信号的实时监测。该生物传感器具有超高的灵敏度,LOD低至0.0002 U/m L,优于大多数现有的PNK检测方法。此外,它还能够在单细胞水平上灵敏定量内源性PNK的活性,在临床诊断和生物医学研究中具有较大的潜力。4.基于碱基切除修复引发的酶辅助两级信号放大反应构建了一个荧光纳米生物传感器,可用于DNA糖基化酶活性的同时灵敏检测。单链选择性单功能尿嘧啶DNA糖基化酶（human single-stranded selective monofunctional uracil DNA glycosylase,h SMUG1）是尿嘧啶DNA糖基化酶（uracil DNA glycosylases,UDG）超家族中的一员;h SMUG1除了可以切除DNA中的尿嘧啶,还可以切除DNA中某些氧化损伤的嘧啶,在DNA的氧化损伤修复中扮演着一定的角色。人烷基腺嘌呤DNA糖基化酶（human alkyladenine DNA glycosylase,h AAG）具有广泛的底物特异性,可以识别和切除DNA中烷基化损伤的嘌呤碱基,也能识别和切除氧化损伤的次黄嘌呤。DNA糖基化酶的活性异常与多种疾病的发生有关,因此对其活性的同时检测具有重要的意义。该纳米生物传感器使用了一种双功能的哑铃探针和一种同时组装了两类信号探针的金纳米颗粒（信号探针@Au NPs）。双功能哑铃探针中含有一个茎部序列区和两个环部序列区,在茎部序列中靠近两个环的位置上分别修饰了一个尿嘧啶（U）和一个次黄嘌呤（I）,以分别用于h SMUG1和h AAG的活性传感。在信号探针内设计有一个无嘌呤/无嘧啶位点（apurinic/apyrimidinic site,AP位点）并分别标记了Cy5或Alexa Fluor 488荧光分子。DNA糖基化酶可以去除位于哑铃探针茎部的受损碱基并产生AP位点。APE1对AP位点的切割导致哑铃探针断裂,断裂的哑铃探针可同时用作自启动SDA反应的引物和模板,生成大量的触发链。触发链进一步与组装在纳米金颗粒表面的Cy5信号探针或Alexa Fluor 488信号探针杂交形成带有AP位点的双链DNA,引发APE1对信号探针的循环切割,并从中释放出大量的Cy5或Alexa Fluor 488荧光分子,通过基于全内反射荧光（total internal reflection fluorescence,TIRF）的单分子检测技术对荧光分子进行简单计数即可实现对h SMUG1和h AAG活性的同时检测,其中,Cy5荧光分子的数目指示h SMUG1的活性,Alexa Fluor 488荧光分子的数目指示h AAG的活性。由于酶辅助的两级信号放大反应具有很高的信号放大效率,单分子检测又具有极高的信噪比,该纳米生物传感器对h SMUG1的LOD为8.14×10-10 U/μL,对h AAG的LOD为4.50×10-9 U/μL。此外,该纳米生物传感器还可进一步应用于在单细胞水平上测定多种细胞的内源性DNA糖基化酶活性,并对正常细胞和癌细胞进行有效区分。
陈琪[3]（2021）在《耐辐射奇球菌中锰离子转运相关蛋白的功能研究》文中进行了进一步梳理耐辐射奇球菌（Deinococcus radiodurans）作为极端微生物家族的重要成员,对外界环境胁迫有极强的抗性。大量研究结果显示,耐辐射奇球菌对于极端环境的适应能力源自于其超强的抗氧化能力,其中细胞内积累的高锰铁比率一直被认为是其抗氧化机制之一。耐辐射奇球菌作为研究氧化应激的模式生物,研究其锰离子相关调控机制,有助于深化了解耐辐射奇球菌极端的抗性机制,同时拓展细菌对锰离子的转运机制。本论文主要研究了耐辐射奇球菌锰离子转运相关蛋白的功能和应用。首先,我们通过生物信息学方法预测发现了耐辐射奇球菌中Ter C家族蛋白锰离子转运相关蛋白DR1187和DRB0131,并与大肠杆菌内锰离子外排蛋白Mnt P以及枯草芽孢杆菌Ter C家族蛋白Yce F进行比对分析。通过预测分析发现DR1187与DRB0131均具有跨膜区域。根据亲疏水性分析,跨膜区域为亲水肽键相连。两者跨膜区域数量不同,可能是由于细胞膜结构不同产生的影响。最后通过多序列比对以及同源建模结构分析发现,两个基因编码的蛋白均具有Mnt P蛋白中非常重要的两个天冬氨酸位点。相较于野生型,dr1187基因缺失突变株对锰离子的抗性下降,胞内锰离子含量升高,说明DR1187在参与了耐辐射奇球菌中的锰离子吸收转运。同时,dr1187基因缺失突变株对紫外线、过氧化氢和电离辐射的抗性增强,且突变株中ROS含量低于野生型菌株。通过点突变DR1187中的D67和D183两个位点,发现该点突变导致胞内锰离子富集,同时比野生型表现出更强的氧化抗性,表明DR1187中的D67和D183两个在参与锰离子转运和细胞氧化抗性上起到重要作用。细胞壁的结构也是影响金属离子的转运重要因素,通过构建S层蛋白缺失突变株△dr2577,发现胞内锰离子含量上升。研究发现铅和镉的胁迫下,锰离子外排基因表达上调,同时突变体△dr2577释放更多锰离子。铅和镉是水稻中积累的主要有毒重金属,能引起细胞内的氧化应激反应产生大量ROS。将水稻幼苗与耐辐射奇球菌共培养,电镜和细菌荧光标记结果显示耐辐射奇球菌定殖于水稻根外层,并且突变株△dr2577能有效地改善镉或铅处理后导致的水稻幼苗黄化,株高、根长、干生物量和叶绿素等含量显着下降的现象。同时△dr2577突变株能吸附更多的铅和镉,且能通过释放胞内锰离子和谷氨酸来提高水稻中锰离子和谷氨酸含量、抗氧化酶活性,从而降低水稻中镉和铅的积累并缓解其引起的氧化压力。本研究探讨研究了耐辐射奇球菌中的锰离子转运相关基因,发现DR1187参与了锰离子的吸收转运及对氧化应激的抗性,是一个潜在的锰离子外排蛋白。同时发现S层蛋白DR2577影响胞内锰离子的积累,其突变株△dr2577通过外排锰离子等抗氧化小分子,有效缓解了镉和铅离子对水稻胁迫产生的毒性。研究结果为阐明耐辐射奇球菌锰离子代谢和抗逆机制提供基础,并拓展了极端微生物在缓解作物重金属污染中的重要作用。
吴星仪[4]（2021）在《丙烯酸酯光固化材料收缩应力及收缩率的研究》文中提出丙烯酸酯光固化材料具有固化速度快、VOC排放低和工艺节能等优点,因此被应用于涂料、胶粘剂、增材制造和电子封装等领域。但是光敏树脂的体积收缩和聚合收缩应力限制了光固化材料的应用。在快速的光聚合过程中,树脂从液态转变为固态,微观上分子间距的减少,导致宏观上体积的收缩。目前,尚无成熟的测试手段可以进行精确、可重复地评估光固化材料的体积变化。因此,本课题综合运用红外-流变联用技术和3D激光共聚焦仪系统讨论了体系组分和固化条件对材料收缩率的影响,并运用Pickering乳液法制备多孔弹性微球,通过微球内部的空腔结构抵消局部集中的聚合应力,实现光固化材料收缩率和收缩应力的降低,同时保持材料性能的综合平衡,具体研究内容如下:（1）运用红外-流变联用技术建立原位监测光固化体系收缩应力的方法,该联用技术可同时记录光敏树脂宏观流变性能和微观聚合程度的变化;随后,运用3D线扫描激光共聚焦仪建立监测材料收缩率的方法。阐述收缩率测试的仪器装置及测试原理;其中,收缩应力测试标准偏差小于1.7 N;收缩率测试标准偏差小于0.4%,其误差来源于光学扫描盲区。（2）运用红外-流变联用技术和3D线扫描激光共聚焦仪,分别研究了光固化组分（稀释剂官能度、稀释剂链长、稀释剂与树脂配比、引发剂浓度）和固化条件（温度、光强、厚度）对收缩率、聚合速率以及材料模量的影响。结果表明:光敏树脂的收缩率与收缩应力变化趋势一致;收缩应力的发展集中在凝胶点后至材料进入玻璃态阶段,随参与反应的双键浓度增加而提高,与交联网络的刚性无关;提高固化温度和厚度,显着提高收缩率,而辐射光强的增加,反而能降低收缩率;稀释剂链长或官能度的减少,收缩率提高;引发剂浓度增加,并非能提高材料的收缩率;低聚物所占比例的增加,收缩率降低,体系刚性提高。（3）通过Pickering乳液法结合光固化技术制备多孔弹性微球,并探究了微球含量对丙烯酸酯光固化材料力学性能、热学性能、涂层基本性能和收缩率的影响。随后,分别探究了微球粒径和壳层力学性能对降低收缩应力的影响。结果表面:仅添加1.5 wt%含量的多孔微球,就可降低TPGDA/EA体系收缩率至一半,同时保持材料优异的机械性能;材料收缩率随微球粒径的增大而减少,对于TPGDA/EA体系更适合于壳层刚性较低的微球体系。
张志莹[5]（2021）在《西黄丸治疗非小细胞肺癌疗效的系统评价及作用机制研究》文中提出研究背景:肺癌是临床常见的恶性肿瘤,在世界范围内,发病率在恶性肿瘤中居第二位,死亡率居第一位。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是肺癌的主要类型,发展新的治疗手段和方法,一直是NSCLC临床需要解决的一大难题。NSCLC的中医研究也在不断发展,西黄丸作为具有确切临床疗效的经典抗癌中药名方,对NSCLC的治疗也发挥了作用。既往的基础研究发现西黄丸可通过诱导肿瘤细胞凋亡、逆转上皮间质转化、调节免疫微环境等多种作用机制发挥抗肿瘤作用,但研究多围绕乳腺癌、胃癌,对于治疗肺癌的机制,仅涉及有效率、体内实验抑瘤率等,较为局限,因此,西黄丸治疗NSCLC的研究还存在较大空间,值得进一步深入。研究目的:本研究结合系统综述、网络药理学、体外实验、体内实验、转录组学等多种方法,研究西黄丸治疗NSCLC的相关机制,为西黄丸在临床治疗NSCLC提供更多的数据支持和科学依据。研究方法:1.首先通过系统综述和meta分析,评价西黄丸在临床随机对照试验中治疗NSCLC的效果,评价指标包括:近期客观有效率、临床症状改善、生活质量、不良反应等。2.通过网络药理学,对西黄丸抗NSCLC的活性成分和主要作用靶点进行预测。首先通过中药数据库BATMAN-TCM检索西黄丸中所有的活性成分及对应靶点,然后通过疾病数据库DisGeNET、GeneCards、OMIM检索NSCLC相关基因,将西黄丸的作用靶点和NSCLC疾病靶点两个数据集进行映射,筛选重复靶点,构建“西黄丸-NSCLC-靶点”数据集。将数据集导入String数据库进行蛋白质蛋白质互作网络,将获得的网络导入Cytoscape3.8.0软件中进行拓扑参数分析,获得“西黄丸-NSCLC-靶点”的核心作用靶点。然后使用Metascape工具对核心靶点进行生物功能注释,分析西黄丸抗NSCLC的主要信号通路和生物过程等。3.通过细胞实验和动物实验,进行西黄丸抗NSCLC的药效学验证。在细胞实验中,通过CCK-8实验、流式细胞术、Transwell实验检测西黄丸对小鼠Lewis肺癌细胞株LL/2增殖、凋亡、细胞周期、迁移能力和侵袭能力的影响。在动物实验中,以C57/BL6小鼠Lewis肺癌皮下瘤为模型,将小鼠分为对照组、西黄丸低剂量组（0.617g/kg,每日灌胃两次）、西黄丸中剂量组（1.233g/kg,每日灌胃两次）、西黄丸高剂量组（2.466g/kg,每日灌胃两次）、顺铂组（3 mg/kg,每周腹腔注射一次）,并另设无瘤的空白组。药物干预15天,观察小鼠的一般状态、皮下移植瘤体积及重量、体重及内脏系数,并通过HE染色观察肿瘤和肝脏的组织病理变化和皮下瘤的肺转移,通过Ki-67免疫组化染色观察对肿瘤增殖的影响,并通过流式细胞数检测小鼠脾脏淋巴细胞的 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和 CD3+CD4+/CD3+CD8+免疫分型。4.通过转录组学方法,对西黄丸高剂量组和对照组的肿瘤组织进行RNA测序,进行mRNA差异分析和基因功能注释,分析西黄丸抗小鼠Lewis肺癌的主要信号通路和生物过程等。5.通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）和蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）,对网络药理学和转录组学筛选出的目标分子变化进行检测,包括热休克蛋白（heatshockprotein,HSP）家族、雌激素受体（estrogenreceptor,ER）、维甲酸X受体（Retinoid X receptor,RXR）、过氧化物酶体增殖激活受体（peroxisome proliferator activated receptor,PPAR）等。研究结果:1.Meta分析结果显示,西黄丸辅助治疗NSCLC能够提高近期客观有效率,改善患者的临床症状,提高患者的生活质量。但在改善肝肾功能异常、改善消化道症状和血液系统抑制方面,西黄丸辅助治疗并未有明显获益。2.网络药理学分析显示,西黄丸共检索到74个靶点可预测的活性成分,“西黄丸-NSCLC-靶点”的核心作用靶点共230个,包括HSP90AA1、HSP90AB1、HSPA1A、ESR1、ESR2、RXRA、RXRB、RXRG、PPARG、PPARA 等。西黄丸抗 NSCLC 的相关KEGG通路有癌症通路、PI3K-Akt信号通路、内分泌抵抗、foxo信号通路、雌激素信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂抵抗、HIF-1信号通路、T细胞受体信号通路、催乳素信号通路、Ras信号通路、黏着斑和非小细胞肺癌等。GO富集分析显示,西黄丸抗NSCLC涉及的主要生物过程有细胞对有机环状化合物的反应、细胞对激素刺激的反应、细胞对脂质的反应、凋亡信号通路、对类固醇激素的反应、细胞迁移的正调控、细胞死亡的正调控、细胞运动的正调控等。3.药效学实验显示,西黄丸含药血清在体外对Lewis肺癌细胞株LL/2并无显着的增殖抑制作用,西黄丸浸提液对LL/2有浓度依赖的抑制作用,作用24 h时,西黄丸浸提液对LL/2细胞的IC50为1.830 mg/mL。流式结果显示,作用24 h时,西黄丸浸提液对LL/2细胞有明显的促凋亡作用,能够促进LL/2细胞株向G2/M期转化。Transwell实验结果显示,作用24h时,西黄丸浸提液能够降低LL/2细胞株的迁移能力和侵袭能力,且这种作用呈浓度依赖性。在小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型中,西黄丸对皮下肿瘤的生长抑制作用具有浓度依赖性,其中西黄丸高剂量组能够抑制小鼠皮下瘤的生长,其剂量为临床等效剂量的2倍。肿瘤的病理结果显示,西黄丸高剂量组和顺铂组有大片的细胞坏死区。Ki-67免疫组化染色结果显示,西黄丸和顺铂均能降低Ki-67阳性肿瘤细胞的个数,西黄丸的这种作用与浓度关系不大。肝脏的病理结果显示,各组的肝组织均为正常的肝实质,无明显异常。脾细胞流式分型结果显示,各组小鼠脾脏淋巴细胞中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD4+/CD3+CD8+未见显着统计学差异。4.对西黄丸高剂量组和对照组的皮下瘤进行转录组学测序,结果筛选出406个差异基因,其中130个基因表达上调,276个基因表达下调,差异基因包括:Hspb7、Hspb1、Hspb6等。对差异基因进行KEGG通路富集分析,结果显示,显着性改变明显的信号通路有:肿瘤坏死因子（tumornecrosis factor,TNF）信号通路、雌激素信号通路、胰岛素分泌、环鸟苷酸依赖性蛋白激酶（cyclic guanosine monophosphate-dependent protein kinase,cGMP-PKG）信号通路、脂肪细胞中的脂肪分解调节、脂肪细胞因子信号通路、催产素信号通路、过氧化物酶体增殖激活受体信号通路等。5.PCR和WB结果显示,西黄丸能够降低小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中Hspb6、Hspb7、Hspb1、Hspb2、Hspa1a、Hspa8、Hsph1 和的 mRNA 表达水平,且能够降低 HSPB7、HSP27、HSP70、HSPH1蛋白的表达水平,升高HSC70的蛋白质表达水平,而不影响HSP20、HSP90的蛋白质水平。西黄丸能够降低小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中Esr1、Rxra、Krt19、Ppara、Ppard和Pparg的mRNA表达水平,并降低ER、RXRα蛋白的表达,升高PPARδ和PPARγ的蛋白表达,对KRT19和PPARα的表达水平无明显影响。研究结论:1.西黄丸辅助治疗NSCLC能够提高近期客观有效率,改善患者的临床症状,提高患者的生存质量。2.网络药理学实验和转录组学实验显示,西黄丸通过多靶点、多通路作用于NSCLC,核心作用靶点包括HSP家族、ER等。3.西黄丸在体外实验和体内实验中,均表现出抗小鼠Lewis肺癌的作用,在体内实验中无明显毒性,其有效剂量为临床等效剂量的2倍。其抗小鼠Lewis肺癌的机制可能与降低HSP27、HSP70、HSPH1、ER的mRNA和蛋白质表达水平,升高PPARγ的蛋白质表达水平相关。
石莹莹[6]（2021）在《线粒体功能障碍激活[Ca2+]m-PDP1-PDH-组蛋白乙酰化逆向通路诱导结直肠癌细胞放射抵抗》文中研究说明目的:放射治疗是结直肠癌重要的治疗手段之一,然而肿瘤细胞内在的放射抵抗常常导致治疗后复发和转移。前期研究发现,线粒体功能障碍会导致放射抵抗及糖酵解,而放射抵抗的细胞也会表现出线粒体呼吸缺陷及糖酵解。进一步研究发现糖酵解的关键酶p-PDH与放射抵抗正相关,然而这个酶是如何参与线粒体-核逆向信号通路发挥作用的过程尚不清楚。方法:我们首先分析了前期构建的辐射抗拒细胞及其亲本细胞的基因组测序结果,旨在鉴定出与放射敏感性有关的呼吸链复合体Ⅰ差异基因。接着通过鱼藤酮处理下调复合体Ⅰ的功能,来检测复合体Ⅰ功能与细胞放射敏感性的关系。为了探索复合体Ⅰ调控放射敏感性的机制,我们检测了鱼藤酮处理和在鱼藤酮处理基础上过表达复合体Ⅰ关键基因NDUFS1来提高复合体Ⅰ的功能后,线粒体膜电势/钙离子水平/PDP1/PDH水平及胞核PDH/组蛋白乙酰化/DNA损伤修复蛋白水平的变化。同时在体内、体外过表达NDUFS1提高线粒体氧化呼吸能力后,检测肿瘤细胞对射线的敏感性。最后,我们还在临床标本中分析NDUFS1、PDH与新辅助放疗后的肿瘤退缩分级TRG的相关性。结果:在测序结果和公开数据库中均发现了线粒体复合体Ⅰ基因下调与辐射抗拒有关,并且体外构建的线粒体复合体Ⅰ功能缺陷细胞表现出增强的DNA损伤修复能力和升高的p-PDH水平。内在的机制是复合体Ⅰ缺陷通过[Ca2+]m-PDP1-PDH轴下调了胞质和胞核的PDH水平,而核内PDH的降低通过减少组蛋白乙酰化水平促进DNA损伤修复基因转录。同时,在体内、体外过表达NDUFS1能提高复合体Ⅰ的功能、逆转糖酵解,增加细胞对射线的敏感性。进一步分析,发现在接受新辅助放疗的患者中,NDUFS1和PDH水平较低的患者呈现较差的TRG评分,对放射线治疗不敏感。结论:在本文中,我们提出复合体Ⅰ缺陷导致的线粒体功能障碍,能通过激活[Ca2+]m-PDP1-PDH-组蛋白乙酰化逆向信号通路促进肿瘤细胞放射抵抗,而靶向增强复合体Ⅰ的功能或可提高结直肠癌的放疗疗效。
王莉丽[7]（2021）在《皮肤衰老相关circRNA表达谱的分析及研究》文中认为目的:环状RNA（circluar RNA,circRNA）是一种在二十世纪七十年代发现的没有5’端帽子结构和3’端poly（A）尾巴并以共价键形成闭环结构的内源性RNA。近几年才刚刚兴起对环状RNA的研究,自从circRNA被发现以来,人们从最初对其结构和生物功能、作用机制的简单认识,进而将其与各种器官系统疾病联系起来进行了探索。现有研究表明circRNA与肿瘤、动脉粥样硬化、冠心病、糖尿病、神经系统疾病、抑郁症等多种疾病相关,其中研究最热门的当数肿瘤性疾病。circRNA在皮肤相关疾病的研究主要集中在皮肤基底细胞癌、鳞状细胞癌、黑色素瘤和银屑病、皮肤创伤愈合这些方面。目前关于circRNA皮肤衰老方面研究相对缺如。皮肤是人体最大的器官,也是人体直接接触于外界环境的“门户”,皮肤的老化过程是一个复杂的过程,主要受两个因素的影响:一个是内源性因素（Intrinsic aging）,也被称为固有的皮肤老化（Chronologic aging）。另一种是受环境影响的皮肤老化过程,称为外源性皮肤老化,被称作外源性皮肤老化（Extrinsic aging）。眼睛作为五官之首是容貌的中心,眼部衰老在面部老化方面很突出。本项研究涉足circRNA与皮肤衰老这一领域,探索衰老相关机制,通过对组织、细胞相关功能实验的验证,我们可以观察到circRNA对皮肤衰老的作用和影响。方法:以眼睑皮肤作为老化的研究对象,采用第二代高通量测序测序技术（RNA-seq）检测老少两组眼睑皮肤样本中circRNA的差异表达,探索与皮肤衰老相关的异常表达circRNA,对差异circRNA的来源基因进行基因本体（GO）、生物学通路（Pathway）分析,从生物过程、分子功能、信号通路等方面全面探讨衰老形成机制。另外,对差异circRNA的靶向Micro RNA进行预测分析,构建circRNA-Micro RNA调控网络。根据高通量测序结果,从组织学水平筛选出10个差异表达明显的circRNA分子进行荧光定量PCR验证,最终遴选的2个circRNA分子做后续研究。通过组织块贴壁培养法获取皮肤成纤维细胞HSF,构建hsa＿circ＿0077605、hsa＿circ＿0137613过表达载体,观察过表达后对HSF细胞功能影响,包括β-gal染色实验、CCK8检测增殖情况和细胞流式周期实验。通过生物信息学分析预测hsa＿circ＿0077605的靶Micro RNA,应用双荧光素酶实验、FISH检测证实,hsa＿circ＿0077605结合的Micro RNA。结果:1.眼皮组织circRNA高通量测序共筛选出20552条circRNA,其中外显子来源的5432条,内含子来源的9318条,基因间区来源的5802条。老年组和少年组眼皮组织的差异circRNA总共14915个,以差异表达倍数FC≥1.5,P<0.05为筛选条件进行筛选。符合筛选条件的差异表达circRNA共有571个。在571个circRNA中,348个circRNA在衰老组中高表达,223个circ NRA在衰老组中低表达。GO分析和KEGG分析提示了差异表达的circRNA可能具有的生物功能和参与的通路。组织测序中筛选出10个差异circRNA,包括5个在衰老组上调的circRNA（hsa＿circ＿0077605、hsa＿circ＿0002957、hsa＿circ＿0137613、hsa＿circ＿0008089、hsa＿circ＿0000205）,和5个在衰老组下调的circRNA（hsa＿circ＿0112861、hsa＿circ＿0003803、hsa＿circ＿0032813、hsa＿circ＿0113488、hsa＿circ＿0026497）。通过RT-qPCR验证,发现大部分的结果与组织测序数据吻合,其中hsa＿circ＿0077605和hsa＿circ＿0137613在衰老皮肤组中显着上调,表达差异倍数明显,可作为后续的研究对象。2.通过组织块贴壁培养法获取HSF。hsa＿circ＿0077605环化接头处的序列与其他基因同源性很高,强行设计si RNA可能会导致si RNA的脱靶,因此无法设计特异性si RNA序列。hsa＿circ＿0137613设计出2条si RNA。在HSF使用RT-qPCR检测HSF细胞中的hsa＿circ＿0137613水平,hsa＿circ＿0137613本底表达非常低,做RNA敲降无意义,最终决定遴选的2个circRNA分子在后续研究方向均做过表达。3.遴选的2个circRNA分子做过表达载体构建及测序鉴定。以聚合酶链反应（PCR）分别扩增两个circRNA的全长序列,接入到p LC5-ci R质粒中,构建hsa＿circ＿0077605、hsa＿circ＿0137613过表达质粒。分hsa＿circ＿0077605/hsa＿circ＿0137613、NC（p LC5-ci R）和Control三组,用Lipofectamine2000转染试剂转染至293T细胞,qPCR检测过表达效率。与转染空载质粒的对照组相比,hsa＿circ＿0077605的过表达倍数为3380,hsa＿circ＿0137613组的过表达倍数为98748,qPCR产物测序显示环化序列正确。以上结果表明hsa＿circ＿0077605、hsa＿circ＿0137613能在真核细胞中成功过表达。在HSF细胞中过表达hsa＿circ＿0077605/hsa＿circ＿0137613后,对HSF细胞功能影响包括三方面实验:β-gal染色实验、CCK8检测增殖情况和细胞流式周期实验。hsa＿circ＿0077605/hsa＿circ＿0137613过表达的HSF细胞表现出典型的形态衰老。β-gal染色显示细胞形态变宽变平,细胞质透明,核颗粒增多,近衰老细胞核呈蓝色。体外培养HSF 3天,过表达组CCK8细胞增殖活性明显降低。流式检测仪进行检测细胞周期,显示过表达组HSF G1期明显增多,S/G2期减少,HSF细胞的DNA复制受到抑制。4.通过三种生物信息学软件miRanda、RNAhybrid和Target Scan预测剪接序列长度为151 bp的hsa＿circ＿0077605可能结合的miRNA,发现三种软件均预测到hsa-miR-612。通过双荧光素酶实验证实,hsa＿circ＿0077605能有效结合hsa-miR-612。为进一步验证hsa＿circ＿0077605与hsa-miR-612的在细胞中的亚定位进行FISH共定位实验,在共聚焦显微镜下观察hsa＿circ＿0077605主要定位于HSF细胞浆内,且hsa-miR-612也主要在HSF细胞浆中定位,通过两者的共定位可以观察到在细胞浆中存在hsa＿circ＿0077605与hsa-miR-612的共定位。上述实验结果提示hsa＿circ＿0077605与hsa-miR-612结合,hsa＿circ＿0077605/hsa-miR-612轴与皮肤衰老相关。结论:1.circRNA在皮肤衰老过程中出现差异表达,说明circRNA可能参与皮肤衰老的基因调控。2.hsa＿circ＿0077605和hsa＿circ＿0137613在HSF中的低表达提示后续进行过表达研究。3.过表达hsa＿circ＿0077605、hsa＿circ＿0137613可诱导HSF老化。4.FISH检测和双荧光素酶实验证实hsa＿circ＿0077605与hsa-miR-612存在相互作用。hsa＿circ＿0077605/hsa-miR-612轴与皮肤衰老相关。
宋亚惠[8]（2020）在《E3泛素连接酶TRIM21抗乙型肝炎病毒复制的作用及分子机制》文中研究指明[背景]乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染人体诱导急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎及肝硬化、肝纤维化和肝细胞癌,仍然是世界上最严重的公共健康问题之一。我国每年新发乙肝感染者仍有百万之巨,而现有乙肝治疗药物如核苷酸类似物、干扰素等,不能完全清除病毒,寻找新的乙肝病毒抑制剂或相关分子靶点显得十分迫切。三重基序蛋白（Tripartite motif protein,TRIM）家族成员TRIM21具有E3泛素连接酶活性,参与多种细胞生理功能,在病毒感染过程中发挥正向调控干扰素通路抗病毒和负向调控干扰素通路促进病毒复制的双重功能。有报道显示TRIM21通过其胞浆IgFc受体功能间接抑制HBV复制,但仍不清楚TRIM21是否具有直接抑制HBV复制的功能。[目的]探究TRIM21在肝细胞内HBV复制过程中发挥的作用及其分子机制。[方法]1.HBV感染肝细胞模型:以1μg pUC19-HBV1.3质粒转染肝癌细胞系Huh7和HepG2,48 h后逆转录定量PCR检测HBV复制中间体HBV RNA、ELISA检测上清包膜蛋白s抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）证实感染。2.建立体内瞬时HBV感染小鼠模型:通过高压尾静脉快速注射10 μg的pUC19-HBV1.3质粒至小鼠,4天后肝细胞可测HBV RNA表达,血清可测HBeAg和HBsAg蛋白的分泌,肝脏可原位检测HBc抗原表达。3.敲低和过表达TRIM21:肝癌细胞转染p-Flag-TRIM21可上调TRIM21的表达,转染TRIM21特异性siRNA可敲低内源性TRIM21表达。4.TRIM21结构域缺失体质粒的构建:酶切连接法分别构建TRIM21的ΔRING、ΔB-BOX、ΔPRY/SPRY缺失突变体质粒。5.TRIM21的抗HBV复制活性检测:TRIM21的各种表达质粒与pUC19-HBV1.3共转HepG2细胞,48 h后逆转录定量PCR检测复制中间体HBV RNA;ELISA检测上清HBeAg和HBsAg水平;绝对定量PCR检测上清HBV DNA水平;巢式PCR检测细胞中HBV Precore-core DNA水平。6.免疫共沉淀筛选与TRIM21互作的HBV蛋白:将带Myc标签的HBV蛋白质粒p-HBx、p-HBs、p-HBc或空载质粒分别与p-Flag-TRIM21共转HEK293T细胞,48 h进行SDS-PAGE,以Flag抗体明确与TRIM21互作的HBV蛋白。7.泛素-蛋白酶体途径降解病毒蛋白实验:p-Flag-TRIM21与p-Myc-HBx共转HEK293T 细胞,48 h 后检测 HBx 表达。p-Flag-TRIM21 与 p-Myc-HBx 和 HA-总泛素化质粒共转HEK293T,48 h后,蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞4 h,以抗Myc-HBx抗体进行免疫共沉淀,Western blot检测泛素化修饰的改变。8.构建TRIM21瞬时过表达小鼠和TRIM21敲除小鼠:C57雌性小鼠通过高压尾静脉注射20μg/只p-Flag-mTRIM21,验证TRIM21在小鼠体内过表达。由南京生物医药研究院构建TRIM21杂合子敲除小鼠,杂交得到TRIM21纯合子敲除小鼠。9.乙肝小鼠体内检测TRIM21对HBV的直接抑制功能:将p-Flag-mTRIM21与pUC19-HBV1.3高压尾静脉注射C57小鼠,或pUC19-HBV1.3注射TRIM21-KO和WT小鼠,4天后检测血清HBeAg和HBsAg水平;qRT-PCR检测肝脏HBV RNA水平;免疫组化检测肝脏HBcAg和HBxAg的表达。[结果]1.HBV感染肝细胞显着上调TRIM21的表达:在HBV细胞模型中,证实HBV感染肝细胞诱导TRIM21在mRNA水平和蛋白水平的显着上调表达。2.TRIM21可显着抑制肝细胞内HBV的复制与表达:Huh7和HepG2中,过表达TRIM21均可显着抑制HBV RNA和HBeAg、HBsAg的表达。而以siRNA下调TRIM21则可显着增加HBV RNA和HBeAg、HBsAg水平。3.TRIM21的抗病毒效应依赖于RING结构域:TRIM21的RING和PRY-SPRY结构域缺失体阻断了 TRIM21的抗HBV作用。4.TRIM21与HBx之间相互作用:免疫共沉淀实验证实TRIM21可与HBx蛋白之间存在强相互作用,与HBc之间存在弱相互作用,而与HBs之间不存在相互作用。免疫荧光实验证实TRIM21与HBx确实存在相互作用。5.TRIM21通过泛素-蛋白酶体途径降解HBx蛋白:HEK293T细胞中,共转TRIM21可直接下调HBx蛋白水平,而对HBc表达无影响;MG132处理可逆转HBx表达。泛素实验证实TRIM21可促进HBx上发生的泛素化修饰。6.TRIM21在小鼠体内具有显着抑制HBV复制的功能:C57小鼠经高压尾静脉同时注射HBV和p-Flag-mTRIM21,4天后肝脏HBV RNA、血清HBeAg和HBsAg表达显着降低,免疫组化证实肝脏HBcAg、HBxAg表达显着降低。与WT小鼠相比,TRIM21 敲除小鼠的 HBV RNA、血清 HBeAg 和 HBsAg、肝脏 HBcAg、HBxAg水平均显着增高,证实TRIM21具有显着的体内抗HBV功能。[结论]以HBV感染人肝细胞和小鼠瞬时乙肝感染为模型,本研究阐明了 E3泛素连接酶TRIM21抑制HBV复制的作用和创新机制:HBV感染可显着上调肝细胞内TRIM21表达;TRIM21在体内外均显着抑制HBV复制,该功能依赖于RING结构域和PRY-SPRY结构域;TRIM21可与HBx直接相互作用,经泛素-蛋白酶体降解HBx以抑制HBV复制。本研究首次揭示了 TRIM21对HBV的直接抗病毒作用,并创新性发现TRIM21作用的HBV靶蛋白,补充了 TRIM21抗HBV复制的新机制,提供了乙肝治疗的候选新靶点和新策略。
张钰烁[9]（2020）在《新型高效小肠辐射防护药物制剂应用基础研究》文中指出研究背景:为了应对核与辐射突发事件及医疗照射造成的辐射损伤,深入开展辐射防护研究具有十分重要的意义。随着放射治疗在肿瘤治疗领域的广泛应用,电离辐射不仅对快速增殖的肿瘤细胞起到了有效的杀伤作用,也不可避免地损伤正进行快速自我更新的正常细胞,例如位于小肠隐窝中的干细胞。如果全身受照剂量大于10 Gy,严重的小肠损伤甚至会使患者在短时间内出现急性胃肠道损伤综合症,并在数周内导致患者死亡。因此,探索针对放射性肠损伤的防治策略已成为放射医学领域的重要研究内容。目前放射性肠损伤的发生发展机制及辐射防护药物研究已取得了一定进展,但仍存在一些问题与挑战,如药物的稳定性、小肠靶向性以及生物安全性等问题。另外,近年来虽然发现了一些对维持小肠组织稳态及促进肠道修复有效的细胞类型及调节因子,但辐射导致的小肠干细胞损伤及修复的机制至今仍然没有定论。因此,基于小肠特殊的生理学结构及辐射损伤特点,结合小肠干细胞的损伤及修复机制,探索新的辐射防治手段,对于缓解辐射引起的胃肠道综合症意义重大。研究目的:本论文围绕提高辐射防护药物稳定性、小肠靶向性及生物安全性等方面,系统研究了新型高效辐射防护药物制剂用于放射性肠损伤的防护作用及机制,旨在构建具有临床应用价值的辐射防护药物体系,改善小肠辐射损伤患者预后,为新型辐射防护制剂的临床转化提供研究基础。具体研究如下:（1）口服辐射防护纳米药物对小肠的防护作用及机制研究大剂量电离辐射会造成胃肠道的损伤,辐射敏感性较高的小肠组织损伤尤为严重,甚至会导致机体死亡。传统的辐射防护药物由于难以富集于小肠或进入肠腔后易被消化液快速清除,因此难以达到理想的小肠辐射防护效果。目的:本研究提出了一种新型辐射防护策略,旨在通过口服新型智能辐射防护纳米药物缓解放射性肠损伤。方法:通过亲疏水作用将沙利度胺封装于改性后的壳聚糖纳米颗粒中,使用聚多巴胺包覆于纳米颗粒表面形成纳米药物。通过小肠隐窝3D组织培养模型检测纳米药物的生物安全性及体外辐射防护效果。通过在模拟消化液中进行药物释放实验检测纳米药物对胃酸的抵抗作用,及在小肠内释放规律。通过荧光染料标记纳米药物,检测纳米药物肠道粘液屏障穿透能力及在隐窝部位粘附时间。通过建立放射性肠损伤动物模型,检测纳米药物的辐射防护效果。结果:辐射防护纳米药物具有良好的生物相容性及体外辐射防护效果。纳米药物可以抵抗胃酸并在小肠内缓慢释放,口服此纳米药物可有效改善受到14 Gy全腹照射C57BL/6J小鼠的生存率,并保护小肠上皮结构的完整性。结论:口服辐射防护纳米药物具有高效小肠辐射防护效果,为有效缓解辐射引起的胃肠综合症提供了一种新的应对策略,并为核应急及放射诊疗中放射性肠损伤的高效精准防护提供了新的解决思路。（2）靶向中空普鲁士蓝纳米注射制剂的小肠辐射防护作用及机制研究放射治疗是腹部肿瘤的主要治疗手段,但不可避免地会对肿瘤周围的小肠等正常组织造成辐射损伤。然而,目前多数缓解放射性肠损伤的医疗手段仅停留在试验阶段。传统辐射防护制剂副作用大且缺乏小肠靶向性,限制了其缓解放射性肠损伤的作用效果。目的:本研究中我们开发了一种以普鲁士蓝为基材的肠靶向纳米注射制剂（Res@PVP-HMPB）,拟通过提高小肠靶向性来提高药物的辐射防护效果。方法:通过细胞实验检测靶向中空普鲁士蓝纳米药物的生物相容性及对小肠上皮细胞的辐射防护效果。通过荧光染料标记纳米药物,检测纳米药物的器官分布情况。通过建立放射性肠损伤动物模型,检测纳米药物对小肠的保护作用。通过检测小肠DNA损伤程度及凋亡相关蛋白表达水平,对其辐射防护机制进行深入研究。结果:Res@PVP-HMPB具有良好的生物相容性及辐射防护效果,为其成为肠道辐射防护剂提供了有利的先决条件。经注射后Res@PVP-HMPB可富集于小肠内,有效增强了纳米药物的生物利用度。Res@PVP-HMPB可以通过有效抑制电离辐射引起的小肠隐窝干细胞DNA损伤,发挥干细胞凋亡抑制作用,从而有效维持14Gy全腹照射后C57BL/6J小鼠肠道结构的完整性。结论:靶向中空普鲁士蓝纳米注射制剂显着增强了纳米药物的小肠辐射防护效果,开拓了临床药物普鲁士蓝的新应用领域,不仅为胃肠道辐射防护提供了新的纳米药物解决方案,也促进了纳米药物的临床转化。（3）中性鞘磷脂酶抑制剂GW4869缓解小肠辐射损伤及防护机制研究电离辐射会对小肠干细胞等增殖迅速的细胞DNA造成损伤,从而引起辐射诱导的胃肠道综合症。受到断裂双链DNA的刺激后,炎性Caspase会释放GSDMD蛋白N末端片段,该蛋白片段会在细胞膜上成孔破坏膜完整性,从而引起小肠干细胞焦亡。目的:本研究拟通过调控细胞膜脂质成分,减少焦亡相关成孔蛋白水平,促进辐射引起细胞膜损伤的修复,从而缓解放射性肠损伤。方法:本研究建立了致死性辐射损伤动物模型和体外小肠类器官3D培养模型,研究GW4869的辐射防护细胞机制。通过对电离辐射前后中性鞘磷脂酶活性及焦亡相关蛋白表达水平进行检测,研究GW4869的辐射防护分子机制。结果:研究发现GW4869可通过保护小肠隐窝干细胞及前体细胞来维持小肠上皮结构完整性,从而显着提高小鼠照后存活率。GW4869缓解辐射引起胃肠道综合症的机制为抑制中性鞘磷脂酶活性,从而使细胞膜GSDMD成孔部位发生内吞降解。结论:GW4869通过改善细胞膜的完整性抑制细胞焦亡的发生发展过程。本文阐明了 GW4869缓解胃肠道综合症的作用机制,为缓解放射性肠损伤提供了新的治疗靶点。总结:本论文针对放射性肠损伤开展了新型高效小肠辐射防护药物研究。设计构建了新型的口服智能辐射防护纳米药物,显着改善放射性肠损伤;使用中空普鲁士蓝装载白藜芦醇纳米注射制剂,抑制小肠隐窝干细胞DNA损伤,实现了小肠靶向辐射防护;使用中性鞘磷脂酶抑制剂,通过维持细胞膜结构的完整性,提高了小肠辐射防护效果。研究成果为放射性肠损伤的临床干预提供了新策略和解决方案,具有重要的理论价值和应用前景。
石莲军[10]（2020）在《环状RNA-ZBTB44通过miR-578-VEGFA/VCAM1信号轴调控脉络膜新生血管的生成》文中研究指明研究目的:脉络膜新生血管（CNV）是目前全球范围内导致严重视力功能障碍的主要原因之一,其发生在多种眼底疾病,包括高致盲率的湿性年龄相关性黄斑变性（nAMD）。环状RNA（circRNA）是近年来发现的一类内源性非编码RNA,已证实参与了癌症、糖尿病和神经退行性病变的机制调控。在本研究中,我们旨在阐明circRNA-ZBTB44（cZBTB44）在CNV发病机制中的作用及其疾病治疗应用前景。方法:（1）相关性研究:采用定量聚合酶链反应检测在体CNV发生过程及体外内皮细胞缺氧应激反应中cZBTB44的表达水平。（2）在体水平:采用8周龄C57BL/6小鼠建立激光诱导的CNV病理模型,通过玻璃体腔内注射改变靶基因表达水平,使用伊红-苏木素染色、免疫荧光染色等技术,揭示circRNA-ZBTB44对小鼠脉络膜新生血管生成的调控作用。（3）体外水平:通过内皮细胞增殖、迁移和成管实验,探讨circRNA-ZBTB44在血管生成中的作用。（4）机制研究:通过生物信息学分析、RNA免疫沉淀分析、荧光素酶分析和体外实验研究,探讨circRNA-ZBTB44介导CNV发生的机制。结果:（1）在激光诱导的小鼠CNV模型中,脉络膜组织circRNA-ZBTB44的表达上调;在缺氧刺激下,脉络膜内皮细胞中circRNA-ZBTB44的表达上调。（2）在体水平,circRNA-ZBTB44表达下调,抑制了脉络膜新生血管的生成。（3）体外水平,circRNA-ZBTB44表达下调,可降低脉络膜血管内皮细胞的增殖、迁移和成管能力。（4）circRNA-ZBTB44可作为miRNA-578的海绵,抑制其活性,从而上调血管内皮生长因子A（VEGFA）和血管细胞粘附分子1（VCAM1）的表达。结论:本研究发现circRNA-ZBTB44通过miR-578/VEGFA/VCAM1信号轴参与调控脉络膜新生血管生成,沉默circRNA-ZBTB44表达脉络膜血管内皮细胞功能被抑制,脉络膜新生血管生成减少,为CNV的分子发病机制提供了新的理论。cZBTB44-miR-578-VEGFA/VCAM1为新生血管性疾病的治疗提供了新靶点。
二、环状DNA结构能有效抵抗辐射（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、环状DNA结构能有效抵抗辐射（论文提纲范文）
（1）南海珊瑚微生物组的空间变化及其环境适应机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 珊瑚礁生态系统的分布、功能与现状 |
| 1.1.1 珊瑚礁的全球分布特征与生态功能 |
| 1.1.2 珊瑚礁生态系统多样性-从宏观到微观 |
| 1.1.3 珊瑚礁生态现状 |
| 1.2 珊瑚礁微生物组及其功能 |
| 1.2.1 珊瑚共生功能体(holobiont)与微生物组(microbiome) |
| 1.2.2 珊瑚共生虫黄藻及其功能 |
| 1.2.3 珊瑚共/附生细菌及其功能 |
| 1.2.4 共生微生物组中的“暗物质”—病毒 |
| 1.2.5 珊瑚礁水域微生物组及其功能 |
| 1.3 微生物组对珊瑚环境适应性的指示意义 |
| 1.3.1 虫黄藻多样性与群落组成对珊瑚响应热压力的指示意义 |
| 1.3.2 细菌多样性与群落组成对珊瑚响应热压力与环境变化的指示意义 |
| 1.3.3 病毒对珊瑚响应热压力与珊瑚疾病的指示意义 |
| 1.3.4 珊瑚礁水域微生物组对珊瑚响应热压力、环境变化与珊瑚疾病的指示意义 |
| 1.4 拟解决的科学问题与技术路线 |
| 1.5 围绕科学问题所具体开展的工作 |
| 第二章 研究区域概况、研究材料与方法 |
| 2.1 南海珊瑚礁分布特征及其重要性 |
| 2.2 南海珊瑚礁生态区划及其特征 |
| 2.2.1 南海相对高纬度珊瑚礁/群落 |
| 2.2.2 南海生物地理过渡区 |
| 2.2.3 南海中纬度珊瑚礁 |
| 2.2.4 南海低纬度珊瑚礁 |
| 2.3 珊瑚生态调查、优势种鉴定与样本采集 |
| 2.3.1 珊瑚生态调查与优势种鉴定 |
| 2.3.2 珊瑚组织样本采集 |
| 2.3.3 珊瑚礁水体样本采集 |
| 2.4 微生物组测定与分析 |
| 2.4.1 微生物组总DNA提取 |
| 2.4.2 虫黄藻PCR扩增与Illumine Mi Seq测序 |
| 2.4.3 虫黄藻生物信息学分析 |
| 2.4.4 虫黄藻分子生态数据统计分析 |
| 2.4.5 细菌PCR扩增与Illumine Mi Seq测序 |
| 2.4.6 细菌生物信息学分析 |
| 2.4.7 细菌分子生态数据统计分析 |
| 2.4.8 珊瑚微生物交互作用网络分析 |
| 2.4.9 病毒全基因组扩增、文库构建与Novaseq6000 测序 |
| 2.4.10 宏病毒组生物信息学分析 |
| 2.4.11 病毒分子生态数据统计分析 |
| 2.5 耐热型共生虫黄藻群体遗传学分析 |
| 2.5.1 虫黄藻种水平的初步筛选 |
| 2.5.2 群体PCR扩增、毛细管电泳检测与虫黄藻物种鉴定 |
| 2.5.3 微卫星数据分析 |
| 第三章 南海珊瑚礁水域微生物组的空间分布及其生态意义 |
| 3.1 南海珊瑚礁水域微生物组的组成与功能特征的空间分布模式 |
| 3.1.1 南海珊瑚礁水域虫黄藻的空间分布模式 |
| 3.1.2 南海珊瑚礁水域细菌的空间分布模式及其功能 |
| 3.1.3 南海珊瑚礁水域病毒的空间分布模式及其功能特征 |
| 3.2 南海珊瑚礁水域中虫黄藻的空间分布模式及其与珊瑚环境适应性的关系 |
| 3.3 南海珊瑚礁水域中细菌空间分布模式及其与环境压力、珊瑚适应性的关系 |
| 3.4 南海珊瑚礁水域病毒的空间分布差异及其与珊瑚疾病、热压力的关系 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 南海珊瑚共生虫黄藻的空间分布、系统进化模式及其与环境因子的关系 |
| 4.1 南海珊瑚共生虫黄藻多样性与群落结构的空间变化特征 |
| 4.1.1 南海珊瑚共生虫黄藻的多样性 |
| 4.1.2 南海珊瑚共生虫黄藻群落组成 |
| 4.1.3 南海珊瑚共生虫黄藻群落结构、系统发育关系及其与环境因子的关系 |
| 4.2 南海珊瑚共生虫黄藻α多样性的纬度变化及其环境因子的关系 |
| 4.3 南海珊瑚共生虫黄藻群落组成的纬度变化及其与环境因子的关系 |
| 4.4 共生体祖先类型差异性对南海共生虫黄藻系统进化关系、环境适应性的影响 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 南海广布型珊瑚微生物组的空间变化及其与珊瑚环境适应性的关系 |
| 5.1 南海广布型珊瑚的微生物组功能体征及其交互作用 |
| 5.1.1 南海广布型珊瑚共生虫黄藻的多样性与群落组成 |
| 5.1.2 南海广布型珊瑚共生虫黄藻亚系群的交互作用网络分析 |
| 5.1.3 南海广布型珊瑚共/附生细菌的多样性与群落组成 |
| 5.1.4 环境因子对南海广布型珊瑚微生物组群落结构的影响 |
| 5.1.5 南海广布型珊瑚共/附生细菌核心微生物群 |
| 5.1.6 基于南海广布型珊瑚共/附生细菌基因的功能预测 |
| 5.2 南海广布型珊瑚共生虫黄藻多样性与群落结构的空间变化及其与珊瑚环境适应性之间的关系 |
| 5.3 南海广布型珊瑚共生虫黄藻的交互作用与珊瑚共生体系稳定性之间的关系 |
| 5.4 南海广布型珊瑚共/附生细菌群落的灵活性及其与珊瑚环境适应性之间的关系 |
| 5.5 南海广布型珊瑚核心细菌微生物群与珊瑚环境适应性之间的关系 |
| 5.6 南海广布型珊瑚共/附生细菌的功能富集特征的纬度变化及其与珊瑚环境适应性之间的关系 |
| 5.7 小结 |
| 第六章 南海区域型珊瑚微生物组的空间变化及其与珊瑚环境适应性的关系 |
| 6.1 南海区域型珊瑚微生物组空间变化与功能特征 |
| 6.1.1 南海区域型珊瑚共生虫黄藻的群落组成与群落结构 |
| 6.1.2 南海区域型珊瑚共/附生细菌的群落组成与群落结构 |
| 6.1.3 环境与地理因素对南海区域型珊瑚微生物组群落结构的影响 |
| 6.1.4 南海区域型珊瑚共生核心细菌微生物群 |
| 6.1.5 南海区域型珊瑚微生物组多样性与交互网络复杂度之间的关系 |
| 6.2 南海区域型珊瑚虫黄藻群落结构与纬度环境变化、珊瑚适应性之间的关系 |
| 6.3 南海区域型珊瑚的共/附生细菌群落结构与气候带环境变化、珊瑚适应性之间的关系 |
| 6.4 环境压力与人为干扰对南海区域型珊瑚核心细菌微生物群的影响 |
| 6.5 南海区域型珊瑚微生物组多样性与交互作用之间的关系及其对珊瑚环境适应性的影响 |
| 6.6 小结 |
| 第七章 南海耐热型虫黄藻的迁移扩散、遗传变异及其与珊瑚环境适应性的关系 |
| 7.1 南海耐热型虫黄藻D.trenchii的群体遗传学特征 |
| 7.1.1 南海耐热型虫黄藻D.trenchii的遗传多样性 |
| 7.1.2 南海耐热型虫黄藻D.trenchii的遗传结构与连通性 |
| 7.2 南海耐热型虫黄藻D.trenchii群体的迁移、扩散机制及其生态意义 |
| 7.3 低温对南海耐热型虫黄藻D.trenchii群体在亚热带建立共生关系的影响 |
| 7.4 地理隔离与SST变化对南海耐热型虫黄藻D.trenchii群体遗传结构的影响 |
| 7.5 南海耐热型虫黄藻D.trenchii群体遗传学特征对珊瑚适应全球变暖的指示意义 |
| 7.6 小结 |
| 第八章 南海相对高纬度区域珊瑚组织的病毒群落组成及其对珊瑚环境适应性的指示意义 |
| 8.1 南海相对高纬度区域珊瑚组织中病毒的群落组成、功能及宿主特征 |
| 8.1.1 南海相对高纬度区域珊瑚组织中病毒的群落组成及其功能 |
| 8.1.2 南海相对高纬度区域珊瑚组织中的病毒宿主预测 |
| 8.1.3 南海相对高纬度区域珊瑚组织与水体中病毒群落的组成和功能特征差异 |
| 8.2 南海相对高纬度区域珊瑚组织中的病毒群落组成对珊瑚-虫黄藻共生体系稳定性的影响 |
| 8.3 南海相对高纬度区域珊瑚组织中的病毒群落组成对珊瑚-细菌共生体系稳定性的影响 |
| 8.4 病毒群落对南海北部热带珊瑚避难所的生态影响 |
| 8.5 小结 |
| 第九章 南海珊瑚微生物组的空间变化与环境适应模式 |
| 9.1 南海珊瑚微生物组的空间变化模式 |
| 9.2 南海珊瑚-微生物组共生体系的环境适应模式 |
| 9.3 小结 |
| 第十章 结论与展望 |
| 10.1 主要结论 |
| 10.2 展望 |
| 10.3 主要创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（2）基于酶辅助信号放大的荧光生物传感器的构建及其应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 生物传感器 |
| 1.2 基于信号放大技术的荧光生物传感器 |
| 1.2.1 无酶参与的信号放大技术 |
| 1.2.2 酶辅助的信号放大技术 |
| 1.3 基于酶辅助等温信号放大技术的荧光生物传感器 |
| 1.3.1 核酸生物标志物的定量检测 |
| 1.3.2 蛋白质和生物酶的定量检测 |
| 1.4 本论文的研究意义及研究内容 |
| 第二章 基于依赖解旋酶恒温扩增反应的荧光生物传感器快速检测micro RNA |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂与仪器 |
| 2.2.2 ExoⅠ消化反应 |
| 2.2.3 HDA反应与实时荧光检测 |
| 2.2.4 凝胶电泳分析 |
| 2.2.5 细胞培养和细胞总RNA提取物的制备 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 mi RNA定量检测的原理 |
| 2.3.2 可行性验证 |
| 2.3.3 灵敏度分析 |
| 2.3.4 选择性分析 |
| 2.3.5 实际样品分析 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 基于依赖解旋酶恒温扩增反应的荧光生物传感器检测β-葡萄糖转移酶 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂与仪器 |
| 3.2.2 β-GT活性检测 |
| 3.2.3 凝胶电泳分析 |
| 3.2.4 酶活动力学分析实验 |
| 3.2.5 抑制剂效果分析实验 |
| 3.2.6 血清样品中β-GT活性的检测 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 β-GT活性检测的原理 |
| 3.3.2 可行性验证 |
| 3.3.3 实验条件优化 |
| 3.3.4 灵敏度分析 |
| 3.3.5 选择性分析 |
| 3.3.6 酶活动力学分析 |
| 3.3.7 抑制剂筛选 |
| 3.3.8 实际样品分析 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 基于两级链置换扩增反应的荧光生物传感器在单细胞水平检测多核苷酸激酶 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂与仪器 |
| 4.2.2 双链检测探针的制备 |
| 4.2.3 PNK活性测定和活性抑制实验 |
| 4.2.4 等温核酸扩增反应 |
| 4.2.5 凝胶电泳分析 |
| 4.2.6 细胞培养和细胞核蛋白提取物的制备 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 PNK活性检测的原理 |
| 4.3.2 可行性验证 |
| 4.3.3 实验条件优化 |
| 4.3.4 灵敏度分析 |
| 4.3.5 选择性分析 |
| 4.3.6 抑制剂筛选 |
| 4.3.7 实际样品分析 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 基于链置换扩增反应构建的荧光生物传感器同时检测多种DNA糖基化酶 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 试剂与仪器 |
| 5.2.2 哑铃探针的制备 |
| 5.2.3 构建信号探针@AuNPs的纳米结构 |
| 5.2.4 DNA糖基化酶活性检测 |
| 5.2.5 荧光光谱测量 |
| 5.2.6 单分子检测和数据分析 |
| 5.2.7 凝胶电泳分析 |
| 5.2.8 酶活动力学分析实验 |
| 5.2.9 抑制剂效果分析实验 |
| 5.2.10 细胞培养和细胞蛋白提取物的制备 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 单分子同时检测DNA糖基化酶活性的原理 |
| 5.3.2 信号探针@Au NPs的表征 |
| 5.3.3 可行性验证 |
| 5.3.4 实验条件优化 |
| 5.3.5 灵敏度分析 |
| 5.3.6 选择性分析 |
| 5.3.7 酶活动力学分析 |
| 5.3.8 抑制剂筛选 |
| 5.3.9 实际样品分析 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的科研成果 |
| 1.已发表的学术论文 |
| 2.申请的国家发明专利 |
| 3.主要获奖 |
| 致谢 |
（3）耐辐射奇球菌中锰离子转运相关蛋白的功能研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 耐辐射奇球菌简介 |
| 1.1.1 耐辐射奇球菌的发现和形态特性 |
| 1.1.2 耐辐射奇球菌的分类 |
| 1.1.3 耐辐射奇球菌的基因组 |
| 1.1.4 耐辐射奇球菌抗性机制的研究进展 |
| 1.1.5 耐辐射奇球菌中重要转录调控因子 |
| 1.2 耐辐射奇球菌锰离子相关蛋白研究进展 |
| 1.2.1 锰离子外排通道蛋白研究 |
| 1.2.2 锰离子吸收通道蛋白研究 |
| 1.2.3 耐辐射奇球菌锰离子转运相关蛋白研究进展 |
| 1.2.4 耐辐射奇球菌锰离子转运相关蛋白S层蛋白研究进展 |
| 第2章 耐辐射奇球菌锰离子转运相关蛋白的生物信息学分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 主要软件与方法 |
| 2.2.1 耐辐射奇球菌TerC家族蛋白预测分析 |
| 2.2.2 S层蛋白与TerC家族蛋白基本性质分析 |
| 2.2.3 TerC家族蛋白多序列比对分析以及蛋白同源建模 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 耐辐射奇球菌TerC家族蛋白预测分析 |
| 2.3.2 耐辐射奇球菌S层蛋白与TerC家族同源蛋白motif分析 |
| 2.3.3 耐辐射奇球菌S层蛋白和TerC家族同源蛋白的基本性质分析 |
| 2.3.4 耐辐射奇球菌TerC家族同源蛋白的多序列比对及同源建模 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 耐辐射奇球菌TerC家族锰离子转运相关蛋白的功能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料、设备与方法 |
| 3.2.1 实验菌种及筛选培养 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器 |
| 3.2.3 基因缺失突变株与补偿株的构建引物列表 |
| 3.2.4 生长曲线的测定 |
| 3.2.5 金属离子敏感性实验 |
| 3.2.6 总RNA提取和实时定量PCR |
| 3.2.7 荧光定位分析 |
| 3.2.8 ICP-MS测定胞内金属离子浓度 |
| 3.2.9 氧化压力处理下的生存曲线 |
| 3.2.10 UV处理下的生存曲线 |
| 3.2.11 电离辐射处理下的生存曲线 |
| 3.2.12 胞内ROS测定 |
| 3.2.13 基因点突变构建 |
| 3.3 实验结果与分析 |
| 3.3.1 △dr1187、△drb0131 突变株鉴定 |
| 3.3.2 过氧化氢抗性实验 |
| 3.3.3 金属敏感性实验 |
| 3.3.4 细胞内锰离子浓度水平 |
| 3.3.5 DR1187 的亚细胞定位 |
| 3.3.6 锰离子胁迫对△dr1187 突变株的抑制作用 |
| 3.3.7 △dr1187 突变株与野生型在极端环境压力下的生存曲线 |
| 3.3.8 dr1187 突变对胞内ROS的影响 |
| 3.3.9 dr1187 基因缺失对菌体生长的影响 |
| 3.3.10 △dr1187 突变株内其他金属离子通道和调控因子的表达研究 |
| 3.3.11 dr1187 跨膜保守位点的研究 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 耐辐射奇球菌S层蛋白DR2577 对锰离子水平影响及应用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料、设备与方法 |
| 4.2.1 实验菌种及筛选培养 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器 |
| 4.2.3 植物材料及处理方法 |
| 4.2.4 电子显微镜分析细胞表面形态及细胞结构 |
| 4.2.5 水稻与细菌共培养中的细菌定殖实验 |
| 4.2.6 细胞内金属离子测定 |
| 4.2.7 总RNA提取和实时定量PCR |
| 4.2.8 叶片叶绿素含量测定 |
| 4.2.9 水稻幼苗过氧化氢含量测定 |
| 4.2.10 丙二醛测定 |
| 4.2.11 抗氧化酶活性实验 |
| 4.2.12 游离氨基酸含量测定 |
| 4.3 实验结果与分析 |
| 4.3.1 △dr2577 胞内锰离子及其他金属含量分析 |
| 4.3.2 △dr2577 突变株中锰离子转运相关蛋白表达分析 |
| 4.3.3 dr2577 突变对镉离子和铅离子含量的影响 |
| 4.3.4 △dr2577 突变株对培养基镉和铅离子吸收的影响 |
| 4.3.5 △dr2577 突变株在铅/镉胁迫处理后的电镜结果 |
| 4.3.6 耐辐射奇球菌与水稻幼苗共培养结果 |
| 4.3.7 耐辐射奇球菌根部定殖结果分析 |
| 4.3.8 耐辐射奇球菌对水稻中镉和铅离子积累的影响 |
| 4.3.9 耐辐射奇球菌对培养液中氨基酸的影响 |
| 4.3.10 水稻幼苗中锰离子和谷氨酸的变化 |
| 4.3.11 耐辐射奇球菌对水稻幼苗中氧化胁迫的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 博士期间研究成果 |
（4）丙烯酸酯光固化材料收缩应力及收缩率的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 收缩应力及收缩率的产生及危害 |
| 1.3 监测收缩率及收缩应力的方法 |
| 1.3.1 膨胀计法 |
| 1.3.2 圆盘法 |
| 1.3.3 浮力法 |
| 1.3.4 密度天平法 |
| 1.3.5 光学流变法 |
| 1.3.6 激光反射法 |
| 1.3.7 激光干涉法 |
| 1.3.8 Micro-CT法 |
| 1.3.9 正电子湮没法 |
| 1.4 降低丙烯酸酯光固化体系收缩率的方法 |
| 1.4.1 填料法 |
| 1.4.2 动态共价键 |
| 1.4.3 链转移剂 |
| 1.4.4 开环聚合 |
| 1.4.5 合成新型大分子单体 |
| 1.4.6 固化条件的影响 |
| 1.5 多孔微球的制备及应用 |
| 1.6 本课题研究的意义 |
| 1.7 本课题研究的内容 |
| 第二章 光固化材料收缩率及收缩应力测试方法的建立 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验原料 |
| 2.2.2 实验仪器及设备 |
| 2.2.3 样品的制备与固化 |
| 2.3 性能测试与分析 |
| 2.3.1 线性粘弹区测试 |
| 2.3.2 粘度测试 |
| 2.3.3 树脂分子量的测定 |
| 2.3.4 光固化材料不同深度的聚合程度测试 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 收缩应力的测试仪器装置 |
| 2.4.2 红外-流变联用技术测试原理 |
| 2.4.3 红外-流变联用测试参数设置 |
| 2.4.4 收缩应力测试的可靠性及误差来源 |
| 2.4.5 收缩率的测试仪器及测试原理 |
| 2.4.6 收缩率的测试参数设置及测试方法 |
| 2.4.7 收缩率测试的可靠性及误差来源 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 丙烯酸酯光固化材料收缩应力及收缩率的影响因素 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验原料 |
| 3.2.2 实验仪器及设备 |
| 3.2.3 样品的制备 |
| 3.3 性能测试与分析 |
| 3.3.1 粘度测试 |
| 3.3.2 红外-流变联用测试 |
| 3.3.3 3D线扫描激光共聚焦收缩率测试 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 固化温度的影响 |
| 3.4.2 固化厚度的影响 |
| 3.4.3 辐射光强的影响 |
| 3.4.4 稀释剂链长的影响 |
| 3.4.5 稀释剂官能度的影响 |
| 3.4.6 稀释剂与树脂配比的影响 |
| 3.4.7 引发剂浓度的影响 |
| 3.4.8 收缩应力与双键转化率的关系 |
| 3.4.9 收缩应力与储能模量的关系 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 多孔弹性微球降低光固化材料收缩应力及收缩率的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验原料 |
| 4.2.2 实验仪器及设备 |
| 4.2.3 改性二氧化硅乳化颗粒的合成 |
| 4.2.4 多孔弹性微球的制备 |
| 4.2.5 丙烯酸酯光固化树脂的制备与固化 |
| 4.3 性能测试与表征 |
| 4.3.1 纳米粒度仪分析(Zeta Nanosizer) |
| 4.3.2 激光衍射法粒径分析 |
| 4.3.3 光学显微镜表征(OM) |
| 4.3.4 扫描电子显微镜测试(SEM) |
| 4.3.5 红外-流变联用测试(RT-MIR-Photo-Rheology) |
| 4.3.6 3D线扫描激光共聚焦收缩率测试 |
| 4.3.7 傅里叶红外光谱测试 |
| 4.3.8 动态热机械分析(DMA) |
| 4.3.9 拉伸性能测试 |
| 4.3.10 热重分析(TGA) |
| 4.3.11 涂层基本性能测试 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 改性二氧化硅的表面形貌及粒径分布 |
| 4.4.2 改性二氧化硅表面基团的表征 |
| 4.4.3 多孔微球形貌及粒径表征 |
| 4.4.4 不同粒径的多孔微球表征 |
| 4.4.5 不同力学性能的多孔微球表征 |
| 4.4.6 多孔微球对树脂收缩应力的影响 |
| 4.4.7 多孔微球在树脂中的分散性 |
| 4.4.8 多孔微球对树脂力学性能的影响 |
| 4.4.9 多孔微球对涂层基本性能的影响 |
| 4.4.10 多孔微球对树脂热学性能的影响 |
| 4.4.11 多孔微球对树脂体积收缩率的影响 |
| 4.4.12 多孔微球粒径对树脂收缩应力的影响 |
| 4.4.13 不同力学性能的多孔微球对树脂收缩应力的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 主要结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
（5）西黄丸治疗非小细胞肺癌疗效的系统评价及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 非小细胞肺癌的西医研究进展 |
| 综述二 西黄丸抗肿瘤的实验研究进展 |
| 综述三 热休克蛋白与肿瘤的关系 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 西黄丸治疗非小细胞肺癌的疗效：系统综述和Meta分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 西黄丸抗非小细胞肺癌的网络药理学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 西黄丸抗小鼠Lewis肺癌的药效学研究 |
| 实验一 西黄丸含药血清和浸提液对LL/2细胞株增殖的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 西黄丸浸提液对LL/2细胞株凋亡和细胞周期的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 西黄丸浸提液对LL/2细胞株迁移及侵袭能力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 西黄丸抑制Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤生长的作用研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 西黄丸对Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤的转录组学的影响 |
| 实验五 西黄丸对Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤转录组学的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验六 西黄丸对Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤热休克蛋白家族的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验七 西黄丸对Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤的ER/RXRα/PPAR的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）线粒体功能障碍激活[Ca2+]m-PDP1-PDH-组蛋白乙酰化逆向通路诱导结直肠癌细胞放射抵抗（论文提纲范文）
| 英汉缩略名词对照表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 引言 |
| 第一部分 线粒体复合体Ⅰ基因与肿瘤放射敏感性的关系 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 生信及基因测序分析复合体Ⅰ基因与肿瘤预后的关系 |
| 3.2 生信分析复合体Ⅰ基因水平与结直肠癌组织放疗后DFS的关系 |
| 3.3 复合体Ⅰ功能与结直肠癌细胞放射敏感性的关系 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 PDH与复合体Ⅰ缺陷细胞中DNA修复的关系及调控机制 |
| 5 材料和方法 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 6 研究结果 |
| 6.1 复合体Ⅰ缺陷细胞中糖酵解水平 |
| 6.2 复合体Ⅰ缺陷细胞中PDH水平 |
| 6.3 复合体Ⅰ缺陷细胞中PDH与组蛋白乙酰化的关系 |
| 7 讨论 |
| 第三部分 复合体I缺陷介导PDH下调的线粒体-核逆向信号通路研究 |
| 8 材料和方法 |
| 8.1 材料 |
| 8.2 实验方法 |
| 9 研究结果 |
| 9.1 复合体I缺陷细胞中PDP1 水平 |
| 9.2 复合体I缺陷调控PDP1 的机制 |
| 9.3 过表达NDUFS1 对复合体I活性及糖酵解的影响 |
| 9.4 提高复合体I活性对PDP1-PDH-组蛋白乙酰化通路的影响 |
| 9.5 干扰NDUFS1 对放射敏感性的影响 |
| 9.6 干扰NDUFS1对PDP1-PDH-组蛋白乙酰化通路的影响 |
| 10 讨论 |
| 第四部分 提高复合体Ⅰ功能在体内、体外对肿瘤细胞放射敏感性的影响 |
| 11 材料和方法 |
| 11.1 材料 |
| 11.2 实验方法 |
| 12 研究结果 |
| 12.1 过表达NDUFS1 在体外对肿瘤细胞放射敏感性的影响 |
| 12.2 过表达NDUFS1 对裸鼠移植瘤对射线敏感性的影响 |
| 13 讨论 |
| 第五部分 NDUFS1、PDH表达与临床放疗疗效的关系 |
| 14 材料和方法 |
| 14.1 材料 |
| 14.2 实验方法 |
| 15 研究结果 |
| 15.1 生信分析PDH、PDP1 与结直肠癌放疗后DFS的关系 |
| 15.2 组织标本分析NDUFS1、PDH与 CRC新辅助放疗后肿瘤退缩率的关系 |
| 16 讨论 |
| 17 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 线粒体功能障碍及其逆向信号和肿瘤的关系 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间科研成果 |
| 致谢 |
（7）皮肤衰老相关circRNA表达谱的分析及研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:高通量测序筛选皮肤衰老相关circRNA |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验对象与方法 |
| 2.2.1 实验对象 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 circRNA高通量测序结果 |
| 3.2 GO功能分析和KEGG通路分析 |
| 3.3 差异circRNA靶向MicroRNA预测以及网络图 |
| 3.4 RT-qPCR验证4 对组织10个差异circRNA |
| 3.5 RT-qPCR验证20 对组织2个差异circRNA分子 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:组织块贴壁培养法获取HSF并检测circRNA在HSF细胞中的表达水平 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验对象与方法 |
| 2.2.1 实验对象 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HSF细胞提取和培养 |
| 3.2 RNA设计合成和转染 |
| 3.3 RT-qPCR验证siRNA干扰有效性 |
| 3.4 RT-qPCR检测HSF中2个circRNA的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:过表达hsa_circ_0077605和hsa_circ_0137613对HSF细胞的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 过表达载体构建及测序鉴定 |
| 3.2 细胞转染 |
| 3.3 qPCR检测转染后表达效率 |
| 3.4 CCK-8检测 |
| 3.5 细胞周期检测 |
| 3.6 细胞衰老-β-gal染色 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分:hsa_circ_0077605结合hsa-miR-612研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 载体构建测序鉴定 |
| 3.2 生物信息学分析 |
| 3.3 环形结构验证实验 |
| 3.4 双荧光素酶实验 |
| 3.5 FISH共定位实验 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 对本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 新型转录本环状RNA与皮肤衰老 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）E3泛素连接酶TRIM21抗乙型肝炎病毒复制的作用及分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 TRIM21被HBV感染显着上调并可在肝细胞内直接抑制HBV复制和表达 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 HBV质粒转染Huh7细胞建立体外HBV感染细胞模型 |
| 3.2 HBV感染肝细胞Huh7可显着上调TRIM21的表达 |
| 3.3 肝细胞过表达TRIM21可显着抑制HBV复制与表达 |
| 3.4 肝细胞敲低TRIM21可显着促进HBV基因复制表达 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 TRIM21抑制HBV复制的分子机制 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 TRIM21抑制HBV复制依赖其E3泛素连接酶活性 |
| 3.2 免疫共沉淀筛选TRIM21相互作用的HBV病毒蛋白 |
| 3.3 TRIM21与HBx相互作用 |
| 3.4 TRIM21通过蛋白酶体途径降解HBx |
| 3.5 TRIM21可增加HBx蛋白的泛素化修饰 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 TRIM21的体内抵抗HBV复制功能 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 建立体内HBV瞬时感染小鼠模型 |
| 3.2 小鼠体内瞬时过表达TRIM21 |
| 3.3 体内过表达TRIM21可显着抑制HBV基因和抗原的表达 |
| 3.4 体内敲除TRIM21可显着促进HBV基因和抗原蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 结论与思考 |
| 1. 结论 |
| 2. 创新性 |
| 3. 不足之处和未尽工作 |
| 综述 三重基序（TRIM)蛋白在宿主防御病毒过程中的作用 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略语 |
| 致谢 |
（9）新型高效小肠辐射防护药物制剂应用基础研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 辐射诱导的胃肠道综合症 |
| 1.3 辐射诱导小肠损伤及修复的细胞机制 |
| 1.3.1 小肠干细胞 |
| 1.3.2 小肠血管内皮细胞 |
| 1.3.3 肠道菌群与免疫细胞 |
| 1.4 辐射诱导小肠损伤及修复的分子机制 |
| 1.4.1 凋亡 |
| 1.4.2 有丝分裂灾变死亡 |
| 1.4.3 细胞焦亡 |
| 1.4.4 其他 |
| 1.5 小肠辐射防护制剂的研究现状 |
| 1.5.1 注射类制剂 |
| 1.5.2 口服类制剂 |
| 1.6 纳米制剂在放射医学领域的发展现状及应用前景 |
| 1.6.1 注射类纳米制剂 |
| 1.6.2 口服类纳米制剂 |
| 1.6.3 其他途径给药的纳米制剂 |
| 1.7 本论文的设计思路 |
| 第二章 口服辐射防护纳米药物对小肠的防护作用及机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 原料及试剂 |
| 2.2.2 动物 |
| 2.2.3 测试表征 |
| 2.2.4 Arg-CS聚合物及纳米颗粒的合成 |
| 2.2.5 Arg-CS(THA)纳米颗粒的合成 |
| 2.2.6 PDA@Arg-CS(THA)纳米药物及PDA@Arg-CS空载纳米颗粒的合成 |
| 2.2.7 PDA自聚合纳米颗粒的合成 |
| 2.2.8 Cy5.5荧光染料标记纳米药物 |
| 2.2.9 模拟胃肠液环境下纳米药物的稳定性能 |
| 2.2.10 纳米药物的载药率检测 |
| 2.2.11 纳米药物的释药率检测 |
| 2.2.12 小肠隐窝的分离与培养 |
| 2.2.13 纳米药物体外生物相容性及辐射防护效果评估 |
| 2.2.14 纳米药物的器官分布 |
| 2.2.15 血液THA浓度检测 |
| 2.2.16 纳米药物小肠粘附效果 |
| 2.2.17 纳米药物在小肠内分布情况检测 |
| 2.2.18 纳米药物在隐窝内分布情况 |
| 2.2.19 照射条件及给药计划 |
| 2.2.20 组织切片 |
| 2.2.21 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 纳米载体Arg-CS聚合物的合成与表征 |
| 2.3.2 纳米药物PDA@Arg-CS(THA)的合成与表征 |
| 2.3.3 纳米药物对小肠隐窝类器官的毒性检测 |
| 2.3.4 纳米药物的小肠隐窝类器官辐射防护效果检测 |
| 2.3.5 纳米药物在模拟消化液中的理化性质及药物释放研究 |
| 2.3.6 纳米药物的器官分布 |
| 2.3.7 纳米药物的小肠粘附效果 |
| 2.3.8 纳米药物的肠上皮粘液层屏障穿透效果 |
| 2.3.9 纳米药物的小肠隐窝递送效率 |
| 2.3.10 纳米药物的体内辐射防护效果 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 靶向中空普鲁士蓝纳米注射制剂的小肠辐射防护作用及机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 原料及试剂 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 测试表征 |
| 3.2.4 普鲁士蓝纳米颗粒的合成 |
| 3.2.5 中空普鲁士蓝纳米颗粒的合成 |
| 3.2.6 中空普鲁士蓝纳米药物(Res@PVP-HMPB)的合成 |
| 3.2.7 FITC荧光染料标记纳米药物 |
| 3.2.8 中空普鲁士蓝纳米药物Res负载率的检测 |
| 3.2.9 细胞复苏、传代培养与冻存 |
| 3.2.10 体外细胞毒性检测 |
| 3.2.11 体外辐射防护效果检测 |
| 3.2.12 流式细胞检测凋亡 |
| 3.2.13 纳米药物的器官分布 |
| 3.2.14 动物照射条件及给药计划 |
| 3.2.15 组织切片 |
| 3.2.16 脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测 |
| 3.2.17 小肠隐窝分离 |
| 3.2.18 隐窝蛋白提取 |
| 3.2.19 蛋白定量及样品制备 |
| 3.2.20 Western blot实验 |
| 3.2.21 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 中空普鲁士蓝纳米药物的合成与表征 |
| 3.3.2 细胞毒性及辐射防护效果 |
| 3.3.3 纳米药物的细胞辐射防护机制 |
| 3.3.4 纳米药物器官分布 |
| 3.3.5 体内辐射防护效果 |
| 3.3.6 纳米药物的体内辐射防护机制 |
| 3.3.7 纳米药物的体内生物安全性 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 中性鞘磷脂酶抑制剂GW4869缓解小肠辐射损伤及防护机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 原料及试剂 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 仪器设备 |
| 4.2.4 动物实验药物配置 |
| 4.2.5 动物实验给药计划 |
| 4.2.6 动物照射条件 |
| 4.2.7 小鼠生存率、体重统计 |
| 4.2.8 HE染色切片标本的制备 |
| 4.2.9 小鼠小肠隐窝组织的分离 |
| 4.2.10 小鼠小肠隐窝类器官的培养 |
| 4.2.11 小鼠小肠隐窝全蛋白的提取 |
| 4.2.12 蛋白定量及样品制备 |
| 4.2.13 免疫组化染色实验(Immunohistochemical Staining,IHC) |
| 4.2.14 中性鞘磷脂酶活性检测实验 |
| 4.2.15 隐窝细胞膜蛋白抽提实验 |
| 4.2.16 膜蛋白定量实验 |
| 4.2.17 Western blot实验 |
| 4.2.18 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 GW4869的体内辐射防护效果 |
| 4.3.2 GW4869的小肠辐射防护作用 |
| 4.3.3 GW4869的隐窝干细胞辐射防护作用 |
| 4.3.4 小肠隐窝干细胞焦亡水平 |
| 4.3.5 小肠隐窝干细胞的中性鞘磷脂酶活性 |
| 4.3.6 细胞膜焦亡相关成孔蛋白片段变化 |
| 4.3.7 焦亡相关蛋白的变化 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 存在的问题及工作展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间本人出版或公开发表的论着、论文 |
| 致谢 |
（10）环状RNA-ZBTB44通过miR-578-VEGFA/VCAM1信号轴调控脉络膜新生血管的生成（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 湿性年龄相关性黄斑变性发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录一 中英文缩略词 |
| 附录二 发表论文及获奖情况 |
| 附录三 攻读学位期间临床轮转科室和参加相关考试情况 |
| 致谢 |
四、环状DNA结构能有效抵抗辐射（论文参考文献）
- [1]南海珊瑚微生物组的空间变化及其环境适应机制[D]. 陈飚. 广西大学, 2021(01)
- [2]基于酶辅助信号放大的荧光生物传感器的构建及其应用研究[D]. 刘萌. 山东师范大学, 2021(12)
- [3]耐辐射奇球菌中锰离子转运相关蛋白的功能研究[D]. 陈琪. 浙江大学, 2021
- [4]丙烯酸酯光固化材料收缩应力及收缩率的研究[D]. 吴星仪. 江南大学, 2021(01)
- [5]西黄丸治疗非小细胞肺癌疗效的系统评价及作用机制研究[D]. 张志莹. 北京中医药大学, 2021(01)
- [6]线粒体功能障碍激活[Ca2+]m-PDP1-PDH-组蛋白乙酰化逆向通路诱导结直肠癌细胞放射抵抗[D]. 石莹莹. 武汉大学, 2021(02)
- [7]皮肤衰老相关circRNA表达谱的分析及研究[D]. 王莉丽. 中国医科大学, 2021(02)
- [8]E3泛素连接酶TRIM21抗乙型肝炎病毒复制的作用及分子机制[D]. 宋亚惠. 苏州大学, 2020(02)
- [9]新型高效小肠辐射防护药物制剂应用基础研究[D]. 张钰烁. 苏州大学, 2020
- [10]环状RNA-ZBTB44通过miR-578-VEGFA/VCAM1信号轴调控脉络膜新生血管的生成[D]. 石莲军. 南京医科大学, 2020(07)